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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：周斌吴龙成康乐黄艺珠魏建超陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森... 详细信息

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森氏菌，命名为江苏株(JSAV-1株)。将其16S rRNA基因克隆到pMD-18 T载体上并进行测序鉴定。应用DNAstar序列分析软件对分离株的16S rRNA基因和其推导氨基酸序列与GenBank中的公布的胞内劳森氏菌的16S rRNA进行序列比对，确定JSAR-1株与GenBank上已公布的胞内劳森氏菌序列同源性为98.9％。结果表明本PCR方法特异性好，为实验室鉴定胞内劳森氏菌提供了一种简单、容易操作的手段。

关键词：猪增生性肠炎胞内劳森氏菌 16S rRNA基因序列分析特异性引物 PCR测序分离鉴定

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猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：吉利伟蔡伟刚刘民星杨秋实孔建涛范红结南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pE... 详细信息

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pET-32a表达载体中;重组质粒转化至原核系统大肠杆菌B21中，经诱导表达目的蛋白后，利用小鼠进行免疫效果的测定和佐剂筛选，结果使用ISA206佐剂的溶血素(Hly)蛋白亚单位疫苗保护率高。

关键词：猪链球菌2型溶血素蛋白亚单位疫苗免疫效果特异性引物

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临床堪萨斯分枝杆菌89株的鉴定和分型研究

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中华检验医学杂志 2009年第1期32卷 73-75页

作者：陈超徐鹏高谦姜平梅建南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 200095 上海市疾病预防控制中心结核病防制科复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室

分枝杆菌属内除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌（non—tuberculosis mycobacteria，NTM），其数目迄今报道已达150种以上，且有不断增加的趋势。目前的研究表明NTM是一类广泛存在的环境分枝杆菌，人可从环... 详细信息

分枝杆菌属内除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌（non—tuberculosis mycobacteria，NTM），其数目迄今报道已达150种以上，且有不断增加的趋势。目前的研究表明NTM是一类广泛存在的环境分枝杆菌，人可从环境中感染NTM而患病。我国结核病流行病学调查显示，在肺病患者标本中检出NTM的比例呈现逐年增加的趋势。

关键词：非结核分枝杆菌 tuberculosis 结核分枝杆菌复合群分型鉴定萨斯临床麻风分枝杆菌

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类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白二级结构与B细胞表位预测

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华北农学报 2009年第5期24卷 45-49页

作者：温立斌何孔旺杨汉春王玉然江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094 河北省动物卫生监督所河北石家庄050081

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位。采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位。结果表明,P1VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测... 详细信息

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位。采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位。结果表明,P1VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测的B细胞表位优势区。多参数方案综合预测P1 VP2蛋白的B细胞抗原表位,为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础。

关键词： P1 二级结构 B细胞表位生物信息学预测

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 291-295页

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚... 详细信息

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3，腹水效价均为1×10^11；C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2，腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示，F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明，c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带，而其它4株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定

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江苏农业学报 2009年第3期25卷 568-571页

作者：潘群兴王永山刘洁夏兴霞何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的... 详细信息

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。

关键词：肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性

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类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响

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华北农学报 2009年第B08期24卷 1-4页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明陈梦海江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院北京100094 扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响。将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头。在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性... 详细信息

探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响。将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头。在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测。P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别。P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响。

关键词：类猪圆环病毒因子广西巴马小型猪 T淋巴细胞计数 T淋巴细胞增殖活性

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPV VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Western-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性.电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)].

关键词：猪细小病毒口蹄疫病毒 VP2 PPV 重组杆状病毒细胞表位病毒样颗粒

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2... 详细信息

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为1×10～3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G11三株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,七株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的制备及鉴定

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中国比较医学杂志 2009年第11期19卷 23-26页

作者：熊富强王芳范志宇恽时锋蔡少平林焱姜平南京军区南京总医院比较医学科南京210002 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

目的建立能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌(Bb)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后进一步建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体(McAb),用间接... 详细信息

目的建立能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌(Bb)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后进一步建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体(McAb),用间接ELISA、Western-blot等方法对McAb特性进行鉴定。结果获得两株能稳定分泌抗Bb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A7D5和D6B2,其小鼠腹水抗体效价分别为1∶409600和1∶102400;且不与兔大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌等兔的常见病原菌反应,特异性强。两株单抗亲和力实验表明A7D5亲和力略高于D6B2。ELISA相加试验表明它们针对相同的抗原表位。结论成功建立了两株能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,效价高、特异性强,为今后建立该菌的免疫检测技术建立奠定了基础。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体

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