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宁夏医科大学学报 2010年第9期32卷 947-949,952页

作者：苏春霞段相国黄菱陈溥言宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院免疫检验系银川750004 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgG... 详细信息

目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgGI、gG1I、gG2a、淋巴细胞增殖功能I、L-4和IFN-γ的水平来衡量重组病毒的免疫效果。结果重组腺病毒免疫小鼠既能刺激小鼠淋巴细胞增殖又能诱导小鼠特异性抗体的产生,证明重组病毒具有良好的免疫原性。免疫原性略低于灭活疫苗免疫组,但明显高于PBS组。结论重组病毒刺激小鼠淋巴细胞增殖和抗体分泌的能力略低于灭活疫苗,但重组病毒诱导Th1分化的能力强于灭活疫苗。

关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒 VP1基因

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仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗的研制Ⅳ疫苗生产与免疫效力试验

仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗的研制Ⅳ疫苗生产...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：袁万哲何孔旺陆承平河北农业大学动物科技学院(河北保定) 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室(江苏南京) 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室(江苏南京) 南京农业大学动物医学院(江苏南京)

本研究选用四株带有K88、K99、987P、F41粘附素抗原的产肠毒素性大肠杆菌,分别接种于适宜培养基培养,将培养物加热提取粘附素抗原后,加入油佐剂制成四价亚单位疫苗.经成品检验合格后分别免疫小鼠和怀孕母猪,同时监测怀孕母猪抗体.结果... 详细信息

本研究选用四株带有K88、K99、987P、F41粘附素抗原的产肠毒素性大肠杆菌,分别接种于适宜培养基培养,将培养物加热提取粘附素抗原后,加入油佐剂制成四价亚单位疫苗.经成品检验合格后分别免疫小鼠和怀孕母猪,同时监测怀孕母猪抗体.结果表明制备的仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗具有良好的免疫原性,能有效预防仔猪大肠杆菌病的发生.

关键词：仔猪大肠杆菌疫苗免疫效力产肠毒素性大肠杆菌

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2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

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2007年南京农业大学畜牧兽医学术年会暨猪主要传染病的防治对策与营养调控学术研讨会

作者：王继春何孔旺陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室，江苏南京 210014 江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室，江苏南京 210014 江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室，江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095

检测了4株猪链球菌2型(S treptococcus suis type 2,SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(S treptococcus equi ***，SEZ)对猪、兔的致病性。SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏，前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+，后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株，作为对照，其毒力因子的表现型为MRP+EF+SLY+;SEZ2CY和SEZ2CN株均分离自发病猪并经鉴定。SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2～3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108cfu;对兔(2～3只/组)的最小致死量分别为100～1000、1000、100和105cfu;SS22D株108cfu对猪不致死，对兔的最小致死量为108cfu，而SS2-006444对猪、兔无致病性。显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致，可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2～4只，组)，并致死，SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10min即可检出细菌，此后2～4h为无菌血症阶段，之后重新出现。

关键词：猪链球菌2型马链球菌兽疫亚种动物致病性毒力因子

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产肠毒素性大肠杆菌主要毒力因子研究概况

产肠毒素性大肠杆菌主要毒力因子研究概况

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：袁万哲何孔旺陆承平孙继国陈立功河北农业大学动物科技学院河北保定071001 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原之一,该菌的致病性与其毒力因子密切相关.ETEC的毒力因子包括粘附素、肠毒素、水肿病毒素、内毒素、溶血素以及EatA.其中粘附素和肠毒素无论是从发病学还是免疫学角度来讲都扮演着很... 详细信息

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原之一,该菌的致病性与其毒力因子密切相关.ETEC的毒力因子包括粘附素、肠毒素、水肿病毒素、内毒素、溶血素以及EatA.其中粘附素和肠毒素无论是从发病学还是免疫学角度来讲都扮演着很重要的角色.猪源ETEC的粘附素抗原主要有K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)和F41,本文即从病原学角度综述了四种粘附素抗原的研究进展;肠毒素包括耐热肠毒素与不耐热肠毒素,文章也从病原学角度综述了肠毒素的研究进展.

关键词：粘附素肠毒素毒力因子产肠毒素性大肠杆菌仔猪腹泻

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分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将*** O157:H7用甲醛灭活超声破碎,免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP/20骨髓瘤细胞融合,建立了7株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、Ig... 详细信息

将*** O157:H7用甲醛灭活超声破碎,免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP/20骨髓瘤细胞融合,建立了7株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×101～2×102,腹水效价均为1×103。相加ELISA结果显示,F1、G9和G1 1三株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。在Western blotting试验中,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC-O157:H7) 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：刘洁夏兴霞王永山张雪寒费荣梅何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157:H7抗原和抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸... 详细信息

用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157:H7抗原和抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果:该试纸条仅与O157:H7阳性鼠血清发生特异性反应;用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157:H7免疫鼠血清,抗体效价分别为106和105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157:H7感染状况时的现场检测。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 胶体金免疫层析试纸条鼠

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传染性法氏囊病病毒AH1株VP2基因在原核中的表达与抗原性分析

传染性法氏囊病病毒AH1株VP2基因在原核中的表达与抗原性分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：曹冰玉欧阳伟王永山范红结江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

为获得更具实际意义的IBDV VP2基因,研制针对近期流行IBDV的新型基因工程疫苗和检测试剂,本课题组对当前IBDV毒株的VP2基因的分子遗传变异状况进行了分析,并于2007年12月从安徽发生的免疫失败的IBDV野毒株中克隆到了VP2

关键词：传染性法氏囊病病毒基因工程疫苗检测试剂 VP2 抗原性分析 AH1

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猪链球菌2型感染家兔后组织脏器中的定量检测

猪链球菌2型感染家兔后组织脏器中的定量检测

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：胡东波何孔旺倪艳秀周俊明俞正玉范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

用猪链球菌2型SS2-1株人工感染健康家兔。分别以静脉、肌肉、皮下、滴鼻、口服五种途径感染10～9CFU,结果前四者均引起发病或死亡,口服不发病,以静脉感染发病最为急性。分别静脉注射10～9、10～8、10～7、10～6、10～5CFU,分别肌肉注射1... 详细信息

用猪链球菌2型SS2-1株人工感染健康家兔。分别以静脉、肌肉、皮下、滴鼻、口服五种途径感染10～9CFU,结果前四者均引起发病或死亡,口服不发病,以静脉感染发病最为急性。分别静脉注射10～9、10～8、10～7、10～6、10～5CFU,分别肌肉注射10～8、10～6 CFU,结果均发病并有死亡,结果提示感染剂量与发病程度有正相关性。家兔临床症状和病理变化明显。用荧光定量PCR方法检测所有感染家兔组织的含菌量,结果提示发病程度与含菌量呈正相关。各组织含菌量有差异。另外,人工感染家兔后在不同时间点取动物组织做菌体含量动态监测,结果提示体内含菌量随时间推移递增,发病高峰或死亡时达最高值。试验证明SS2-1株对家兔易感,致病性稳定,细菌在动物体内增殖稳定且具有规律性。

关键词：猪链球菌2型人工感染含菌量检测

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以HBcAg为IBDV模拟抗原表位分子载体的分子设计及其表达产物分析

以HBcAg为IBDV模拟抗原表位分子载体的分子设计及其表达产物分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会

作者：刘小娟王永山欧阳伟张海彬范红结江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B eore antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modifi... 详细信息

为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B eore antigen,HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建HBcAg修饰基因(Modified HBc,mHBc)表达质粒pET-mHBc。

关键词：分子设计模拟抗原表位 HBcAg 产物分析分子载体

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPV VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Western-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性.电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)].

关键词：猪细小病毒口蹄疫病毒 VP2 PPV 重组杆状病毒细胞表位病毒样颗粒

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