检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2019年第6期27卷 1101-1109页

作者：彭曦冉俞天奇张宜娜周继勇胡伯里南京农业大学动物医学院免疫研究所/教育部动物健康与食品安全国际联合实验室浙江大学动物医学系/农业部动物病毒学重点实验室

传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）感染鸡（Gallus gallus）引起的IBD是一种严重的、高度传染的免疫抑制性疾病。为探索IBDV感染所引起的宿主细胞转录组变化,本研究以IBDV感染鸡成纤维细胞系DF-1,提取细胞总... 详细信息

传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）感染鸡（Gallus gallus）引起的IBD是一种严重的、高度传染的免疫抑制性疾病。为探索IBDV感染所引起的宿主细胞转录组变化,本研究以IBDV感染鸡成纤维细胞系DF-1,提取细胞总RNA,使用TruSeq?RNA LT Sample Prep Kit v2构建RNA文库,采用Illumina HiSeq 3000平台进行高通量测序,分析IBDV感染12 h引起的DF-1细胞转录组变化,筛选显著变化基因。实验结果显示,差异表达基因总共有3 417条,其中在IBDV感染组中相对高表达的基因有1 887条,相对低表达的基因有1 530条(差异倍数（Fold change, FC）>2且P≤0.05)。对差异基因进行基因本体（Gene Ontology, GO）注释及KEGG信号通路富集分析,发现IBDV感染能够引起DF-1细胞中免疫、凋亡、代谢等20多条信号通路发生显著变化;其中细胞免疫和细胞凋亡通路可能在IBDV感染和免疫调控机制中具有重要作用。随机选择9条差异表达基因进行qRT-PCR验证,变化趋势与转录组数据一致。本研究为揭示IBDV致病及免疫抑制的分子机制提供了参考信息。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 高通量测序转录组信号通路

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猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2019年第8期51卷 90-95页

作者：黄童杜柳阳张宇顾金燕周继勇南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m^6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分... 详细信息

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m^6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m^6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪YTHDF2 原核表达多克隆抗体

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2017年冬季上海地区犬流感病毒的检测与HA、NA序列的遗传进化分析

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畜牧与兽医 2019年第2期51卷 89-96页

作者：范玉凤高婷婷毛曌李叶刘广锦姚火春南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 上海鹏峰宠物医院上海200235

为了解2017年冬季上海临床接诊犬的流感病毒感染情况和病毒变异趋势,收集上海某动物医院疑似犬流感样品进行RT-PCR检测,构建HA、NA的重组载体并测序,对获得的序列进行进化分析、氨基酸变异分析,综合我国同亚型犬流感病毒HA序列进行进化... 详细信息

为了解2017年冬季上海临床接诊犬的流感病毒感染情况和病毒变异趋势,收集上海某动物医院疑似犬流感样品进行RT-PCR检测,构建HA、NA的重组载体并测序,对获得的序列进行进化分析、氨基酸变异分析,综合我国同亚型犬流感病毒HA序列进行进化率分析。结果显示:23份疑似样品中检出5份阳性样品,获得5个H3亚型的HA序列、2个N2亚型的NA序列,上述序列在进化树中已经形成独立的进化分支,与韩国、广东毒株亲缘关系最近;氨基酸比对表明,HA和NA在重要位点发生许多一致的突变,如抗原位点区域、糖基化位点等,NA茎部未见氨基酸插入;对2007年至2017年中国南方地区分离的H3N2犬流感病毒HA片段进行进化率、变异率分析显示,年平均进化率呈逐年增高趋势,变异不断积累。研究表明,开展犬流感病毒变异监测,掌握病毒变异和进化方向,对防控该病、防止病毒向人群传播有重要意义。

关键词：犬流感病毒 H3N2 进化率系统进化分析

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伪狂犬病毒UL54蛋白与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性

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病毒学报 2018年第3期34卷 379-385页

作者：杨珊珊白娟吕林王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、... 详细信息

研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、TBK1、IRF3和IKKε诱导IFN-β表达的影响;免疫共沉淀方法检测UL54与IRF3的相互作用。构建UL54截短基因表达载体,用双荧光素酶报告基因检测系统和ELISA方法检测UL54截短基因对IFN-β启动子活性的影响。构建了pCDH-UL54和8个UL54截短基因真核表达载体。UL54显著抑制IFN-β和IRF3启动子活性,对RIGI、TBK1、IRF3、IKKε介导的IFN-β有抑制作用,免疫共沉淀方法检测证明其与IRF3存在互作。UL54的1-146aa、74-361aa和84-361aa截短体仍抑制IFN-β启动子活性,但第94aa后的其他截短体基因均丧失该抑制作用。PRV UL54通过与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性,UL54第84-94位氨基酸是其抑制IFN-β表达的关键功能区域。

关键词：伪狂犬病毒(PRV) UL54蛋白干扰素 IFN-β 信号通路

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蓝舌病毒14型的分离与鉴定

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中国兽医科学 2019年第7期49卷 855-860页

作者：曹雨张莹辉赵炜陈新薄宗义姚文生 JUNG Yong-Sam 戴建君钱莺娟印春生南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定... 详细信息

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定,同时针对VP7片段和VP2片段设计引物进行RT-PCR检测鉴定,并对其L2基因进行系统发育树分析。结果显示,血清中BTV抗体检测均为阳性,接种BHK21细胞后均产生了特异性细胞病变,并与FITC标记的抗BTV单抗特异性结合,针对VP7扩增出1156bp片段,针对VP2分别扩增出850bp和1581bp片段,经测序和序列分析确定为BTV-14型。结果表明,我国新疆地区存在蓝舌病毒14型,这也是我国境内首次分离到蓝舌病毒14型,为进一步防控我国蓝舌病疫情提供了科学依据。

关键词：蓝舌病毒 14型分离鉴定

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2011—2017年华东地区猪圆环病毒3型分子流行病学调查

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中国兽医科学 2018年第8期48卷 985-990页

作者：李勇姜辰龙刘刚姜平白娟南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

为了明确我国猪场PCV3流行情况,采用PCR方法对2011—2017年采自山东、浙江、安徽、江苏及江西省的660份临床病料组织进行了PCV3检测。结果显示,PCV3于2011年即存在于我国猪场,阳性率为4.1%,此后呈现上升趋势,2017年阳性率为35.0%,并且... 详细信息

为了明确我国猪场PCV3流行情况,采用PCR方法对2011—2017年采自山东、浙江、安徽、江苏及江西省的660份临床病料组织进行了PCV3检测。结果显示,PCV3于2011年即存在于我国猪场,阳性率为4.1%,此后呈现上升趋势,2017年阳性率为35.0%,并且冬季最高。对13份PCV3阳性病料的Cap基因进行了测序,进化树分析结果表明,该地区的流行毒株主要属于PCV3a亚型。本研究结果为PCV3的防控研究提供了重要依据。

关键词： PCV3 PCR 分子流行病学种间传播

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2018年第9期48卷 1086-1092页

作者：侯贺飞刘雪威白娟宋中宝姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的一种重要病原，GP5蛋白是病毒编码的重要免疫保护蛋白。目前，虽然PRRSV抗体检测方法较多。但尚无商品化的GP5蛋白ELISA抗体检测试剂盒。本研究根据高致病性PRRSVBB0907毒株GP5基因... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的一种重要病原，GP5蛋白是病毒编码的重要免疫保护蛋白。目前，虽然PRRSV抗体检测方法较多。但尚无商品化的GP5蛋白ELISA抗体检测试剂盒。本研究根据高致病性PRRSVBB0907毒株GP5基因特性．删除了GP5基因跨膜区，并将剩余基因片段优化为大肠杆菌偏嗜性，构建了高效表达的GP5重组蛋白的原核表达载体．制备获得GP5重组蛋白。通过反应条件优化，建立了PRRSVGP5蛋白间接ELISA（GP5-ELISA）抗体检测方法，其最佳抗原包被浓度为1．0μg／mL，血清的最佳稀释度为1：100，与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、口蹄疫病毒（FMDV）、脑心肌炎病毒（EMCV）和副猪嗜血杆菌（HPS）等病原抗体均无交叉反应。相对于IDEXX公司PRRSVELISA抗体检测试剂盒，本研究建立的间接GP5-ELISA的敏感性和特异性分别为90．69％和92.86％,两种方法的符合率为91．11％。用本研究建立的间接GP5-ELISA对360份临床猪血清的PRRSV抗体进行检测，抗体阳性率为74．44％。上述结果表明，本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白间接ELISA抗体检测方法具有广阔的应用前景。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白间接ELISA

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甘肃省庆阳地区泰勒虫病流行趋势及分子特征分析

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中国兽医科学 2020年第8期50卷 946-951页

作者：罗金谭阳春仇晓飞马雨楠黄学智禹晓宁梁会锋李军岗李利娟程保伟吴泽功倪军许肖枫殷宏罗建勋李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 北京大学肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所实验动物室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 泾源县六盘山畜牧兽医工作站宁夏固原756400 郏县畜牧局河南郏县467100

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一... 详细信息

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一步进行了蜱所携带的泰勒虫进行了分子鉴定。结果显示,庆阳地区蜱虫优势种以长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)为主,兼有小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicum anatolicum),青海血蜱(***)的分布。其传播的泰勒虫主要是瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),东方泰勒虫(T. orientalis),环形泰勒虫(T. annulata)以及感染羊的吕氏泰勒虫(T. luwenshuni),尤氏泰勒虫(T. uilenbergi)等,此外还有泰勒虫未定种(Theileria sp.)的寄生。统计显示在收集的300头份牛血液中瑟氏泰勒虫感染率高达74.58%,东方泰勒虫感染率72.36%,环形泰勒虫感染率12.54%。收集的200头份羊血液中吕氏泰勒虫感染率63.58%,尤氏泰勒虫感染率53.62%。而长角血蜱感染泰勒虫的感染率高达87.76%,小亚璃眼蜱感染率为47.62%,青海血蜱感染率46.43%。由此可见,庆阳地区蜱虫分布虽然较为单一,但其传播的泰勒虫病原具有多样性,值得注意的是不论家畜还是蜱虫对于泰勒虫的感染均较高。这为当地的该疾病的防控带来了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题;其次杀蜱也是防控泰勒虫病极其有效的方法。

关键词：蜱梨形虫泰勒虫庆阳

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TGF-β1信号通路在副猪嗜血杆菌侵入3D4/21细胞中的作用

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畜牧兽医学报 2018年第8期49卷 1720-1726页

作者：沈懿娟周妮妮张健淞王美芬李玉峰姜平南京农业大学动物医学院农业部细菌学重点开放实验室南京210095

本研究旨在探讨猪肺泡巨噬细胞传代细胞系3D4/21中转化生长因子β1(TGF-β1)表达和纤连蛋白(Fn)/α5整合素与副猪嗜血杆菌侵入的关系。通过吸附/侵入试验选择副猪嗜血杆菌最佳吸附/侵入条件;运用荧光定量PCR和ELISA方法检测副猪嗜血杆... 详细信息

本研究旨在探讨猪肺泡巨噬细胞传代细胞系3D4/21中转化生长因子β1(TGF-β1)表达和纤连蛋白(Fn)/α5整合素与副猪嗜血杆菌侵入的关系。通过吸附/侵入试验选择副猪嗜血杆菌最佳吸附/侵入条件;运用荧光定量PCR和ELISA方法检测副猪嗜血杆菌感染细胞后对TGF-β1表达的影响;用TGF-β1预处理3D4/21细胞后,用CFU检测TGF-β1表达对副猪嗜血杆菌侵入的影响;用流式细胞术检测副猪嗜血杆菌感染细胞后Fn/α5整合素表达的变化;用特异的小干扰RNA(siRNA)片段干扰Fn/α5整合素表达水平后,研究其与副猪嗜血杆菌对3D4/21吸附/侵入的影响。结果显示,副猪嗜血杆菌感染细胞后会导致TGF-β1表达增加;用重组TGF-β1预处理3D4/21细胞可以显著提高副猪嗜血杆菌的侵入水平;流式细胞术检测显示,重组TGF-β1和副猪嗜血杆菌分别处理3D4/21细胞可以增加Fn和α5整合素的表达;siRNA干扰3D4/21细胞中Fn和α5整合素的表达,细菌侵入数显著降低;然而,只有当α5整合素被干扰时,副猪嗜血杆菌的吸附数量下降。这些结果表明,TGF-β1和Fn/α5整合素的表达促进了副猪嗜血杆菌对3D4/21细胞的侵入,并在此过程中发挥重要作用。

关键词：副猪嗜血杆菌纤连蛋白(Fn) α5整合素 TGF-β1 siRNA

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奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药物敏感试验

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畜牧与兽医 2018年第6期50卷 105-109页

作者：阮智杨陈新孙雯 JUNG Yong-Sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院/农业部细菌学重点实验室

为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示：分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8... 详细信息

为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示：分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8株,乳房链球菌29株,停乳链球菌2株;药敏试验显示,青霉素、阿莫西林和庆大霉素对引起该奶牛场的4种病原菌有较好的抑制作用。

关键词：安徽地区奶牛乳房炎病原菌药敏试验

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