检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2021年第9期51卷 1097-1105页

作者：孙培培朱慧欣延君芳刘文文姜平白娟南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为加强塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的鉴别诊断及流行病学监测。本研究以SVA重组VP2蛋白及其对应的辣根过氧化酶(HRP)标记的单克隆抗体,建立了检测SVA抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后,抗原最佳包被浓度为0.25μg/m L,37℃孵育2 h... 详细信息

为加强塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的鉴别诊断及流行病学监测。本研究以SVA重组VP2蛋白及其对应的辣根过氧化酶(HRP)标记的单克隆抗体,建立了检测SVA抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后,抗原最佳包被浓度为0.25μg/m L,37℃孵育2 h后4℃过夜;最佳封闭液为1%BSA,37℃孵育1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,37℃孵育1.5 h;酶标单抗最佳稀释度为1∶1000,37℃作用45 min;TMB最佳显色时间为37℃作用10~15 min。本方法的判定标准:当阻断率(PI)≥41.25%时为阳性,PI≤25.29%时为阴性,25.29%

关键词：塞内卡病毒A VP2蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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非洲猪瘟病毒p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1443-1450页

作者：何佳依邹艳丽王燕刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢贾红郑龙三吴晓东冯志新钱莺娟南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266032 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法,以非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原,建立了一种双抗原间接ELISA方法,用于检测ASFV抗体。结果表明,该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪... 详细信息

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法,以非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原,建立了一种双抗原间接ELISA方法,用于检测ASFV抗体。结果表明,该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪圆环病毒和猪瘟病毒等常见猪源病原阳性血清无交叉反应;对ASFV阳性血清的敏感性能达到1∶12800;批内变异系数为7.95%,批间变异系数为9.18%,均小于10%。利用该方法与***商品化ELISA试剂盒分别检测130份临床猪血清,其阳性符合率为92.19%,阴性符合率为86.36%,总符合率为89.23%。综上所述,成功建立了ASFV p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法,为检测猪血清中ASFV特异性抗体提供了新的技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30蛋白 pK205R蛋白间接ELISA

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蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒羊口疮病毒和山羊痘病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2022年第12期52卷 1510-1517页

作者：勾倩倩杜吉革朱真陈小云赵辉赵洋钱莺娟印春生中国兽医药品监察所北京100081 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)和山羊痘病毒(CaPV)的方法,基于TaqMan探针技术,分别以NS3、N、F1L和P32为靶基因设计特异性探针和引物。以特异性引物扩增目的基因并构建重组质粒标准... 详细信息

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)和山羊痘病毒(CaPV)的方法,基于TaqMan探针技术,分别以NS3、N、F1L和P32为靶基因设计特异性探针和引物。以特异性引物扩增目的基因并构建重组质粒标准品。通过优化反应体系建立多重荧光定量PCR检测方法,并用此方法检测临床样品。结果显示,该多重荧光定量PCR标准曲线呈线性关系,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV的扩增效率分别为100%、91%、91%、95%;该方法具有较高的灵敏性和特异性,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV阳性质粒的最低检出量分别为17、12、8和9 copies/μL,与口蹄疫病毒、腐败梭菌、布鲁菌及弓形虫无交叉反应;其重复性较好,组间变异系数和组内变异系数均小于5%。对232份样品进行检测,用该多重荧光定量PCR分别检出9份BTV、3份PPRV、3份CaPV和24份ORFV阳性样品,而用常规PCR分别检出7份BTV、3份PPRV、0份CaPV、12份ORFV阳性样品。综上,该方法能够同时检测BTV、PPRV、ORFV和CaPV,可用于羊病的鉴别诊断、流行病学调查和疫病防控。

关键词：蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒羊口疮病毒山羊痘病毒多重荧光定量PCR

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BTV和PPRV双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 285-291页

作者：勾倩倩杜吉革李启红李倩琳赵洋钱莺娟印春生郑龙三南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beaco... 详细信息

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beacon designer 8设计引物和探针并优化反应体系及反应条件,建立了双重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法检测BTV和PPRV阳性质粒标准品的最低检出量分别为1.7 copies/μL和1.2 copeis/μL;与山羊痘病毒、羊口疮病毒、口蹄疫病毒、羊腐败性梭菌、布氏杆菌及弓形虫无交叉反应,具有良好的特异性;其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法具有较好的重复性。结果表明,建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法适用于BTV和PPRV的快速检测。

关键词：蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒双重荧光定量RT-PCR

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猪链球菌分子流行病学研究方法

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微生物学报 2021年第12期61卷 3928-3936页

作者：杨诗鑫卞晨吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪重要的细菌性病原,它可以导致猪的脑膜炎、败血症和关节炎等症状,给养猪业带来严重经济损失;同时该菌还可感染人,是一种人畜共患病原菌。应用分子流行病学方法,阐明猪链球菌病的流行病学特征,明确其毒... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪重要的细菌性病原,它可以导致猪的脑膜炎、败血症和关节炎等症状,给养猪业带来严重经济损失;同时该菌还可感染人,是一种人畜共患病原菌。应用分子流行病学方法,阐明猪链球菌病的流行病学特征,明确其毒力分型、时空分布、传播途径、传染源,确定传播的遗传决定因素等,将有助于猪链球菌病的防控。目前常用的分子流行病学方法主要有多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组测序和基于PCR的方法等。本文介绍了上述方法的原理以及在猪链球菌流行病学中的应用,并分析这几种方法的优缺点,从而为更好地揭示猪链球菌流行病学特征、制定猪链球菌病的防控策略提供参考。

关键词：猪链球菌流行病学多位点序列分型脉冲凝胶电泳全基因组测序

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非洲猪瘟病毒pp62蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 579-585页

作者：储珺赵普张婕妮王振忠苗雨润鲍晨沂郑龙三吴晓东钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室和农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(... 详细信息

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(1—612 bp)及C端(784—1593 bp),分别构建原核表达质粒pET-28a-pp62-N和pET-28a-pp62-C;转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达pp62蛋白;再用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和阳性克隆筛选后,获得4株可稳定分泌pp62单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western-blot检测ASFV感染PAM细胞中pp62剪切体的结果显示,1株仅识别pp62蛋白,1株仅识别p35蛋白,1株仅识别p15蛋白,1株可识别pp62和p8蛋白。IFA鉴定结果显示,4株均能与ASFV感染PAM细胞产生特异性绿色荧光。本研究为建立ASFV诊断方法和研究pp62的生物学功能奠定了生物材料基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pp62蛋白单克隆抗体

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法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的基因表达谱及功能分析

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畜牧与兽医 2021年第4期53卷 82-88页

作者：李彤彤张则陈佳静李陈飞卢安然周广防冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平... 详细信息

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。

关键词：法氏囊活性肽BP7 DT40细胞基因表达谱通路分析生物学功能

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microRNA-654调控巨噬细胞游走抑制因子抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用

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中国兽医科学 2022年第8期52卷 1023-1030页

作者：罗金刘文阁任巧云严若峰宋小凯刘光远李祥瑞南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了解microRNA(mi RNA)调控巨噬细胞游走抑制因子(MIF)抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用,利用PCR扩增获得MIF基因的完整ORF,并进行体外原核表达,制备抗原免疫家兔,验证MIF重组蛋白对长角血蜱发育的影响。另外,预测可能调控MIF基因的mi ... 详细信息

为了解microRNA(mi RNA)调控巨噬细胞游走抑制因子(MIF)抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用,利用PCR扩增获得MIF基因的完整ORF,并进行体外原核表达,制备抗原免疫家兔,验证MIF重组蛋白对长角血蜱发育的影响。另外,预测可能调控MIF基因的mi RNA分子,用双荧光素酶报告系统分析mi RNA与靶标基因之间的调控关系,并解析此作用下靶标基因引起的抗病原作用。结果显示,MIF基因是一个包含348 bp核酸,编码116个氨基酸的片段。动物免疫试验证实,MIF+GST重组蛋白对蜱发育的各项生理指标影响较小。并且MIF受mi R-654的负调控,其调控效率达到60%。在蜱体中,mi RNA抑制后的MIF表达对东方泰勒虫感染不同发育阶段的长角血蜱有一定的识别和清除作用,可降低蜱体中约55%的虫体。尽管MIF对蜱的发育没有明显影响,但是在蜱抗病原感染过程中扮演着重要的角色。mi RNA作为功能基因的重要调控因子,在MIF识别和清除病原方面发挥着重要作用。为进一步蜱传疾病的防控提供了新的策略。

关键词：巨噬细胞游走抑制因子 microRNA 长角血蜱东方泰勒虫抗感染

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链球菌引发宿主中毒性休克综合症相关机制的研究进展

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微生物学报 2021年第3期61卷 501-511页

作者：张郁敏马家乐赵焱刘广锦南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室OIE猪链球菌病参考实验室江苏南京210095 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730030

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依... 详细信息

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依赖超抗原的STSS病例报道,致病机制较为复杂。本文主要对不依赖链球菌超抗原引发STSS的机制研究进行介绍,包括链球菌感染后宿主细胞中炎症信号通路的激活、炎性小体和细胞焦亡的发生、促炎细胞因子的释放以及细胞因子风暴等。同时,对研究链球菌STSS常采用的细胞和动物模型进行总结,旨在为实验室开展STSS的机制研究奠定理论基础。

关键词：链球菌链球菌性中毒性休克综合症炎症信号通路促炎细胞因子炎性小体细胞焦亡细胞因子风暴

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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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中国动物传染病学报 2021年

作者：敖清莹钟秋萍史馨瑾魏常青刘英楠廖欣欣谢振华钱莺娟郑龙三陈鸿军南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室中国农业科学院上海兽医研究所

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。... 详细信息

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞，出现明显病变后，收获细胞培养上清，在正常Sf9细胞中传三代，获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况，并通过间接免疫荧光（IFA）和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示，在感染的Sf9细胞中，p54蛋白能获得高效表达，并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性，为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白昆虫细胞表达系统免疫原性

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