检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2021年第4期53卷 82-88页

作者：李彤彤张则陈佳静李陈飞卢安然周广防冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平... 详细信息

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。

关键词：法氏囊活性肽BP7 DT40细胞基因表达谱通路分析生物学功能

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法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞的功能研究

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畜牧与兽医 2021年第5期53卷 88-93页

作者：张则郑阳郝珊珊蔡佳希冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部“动物健康与食品安全”国际合作联合实验室江苏南京210095

旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平... 详细信息

旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平;流式分析图显示,法氏囊多肽BP7促进活化T细胞增殖分化成CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+) T细胞,而BP9在48 h促进CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例增加,但未达到差异水平;细胞凋亡结果显示,BP7和BP9均能抑制T淋巴细胞早期凋亡。此外,ELISA检测表明,BP7促进T细胞分泌IL-4和IFN-γ。以上结果表明:法氏囊活性肽BP7和BP9均参与T细胞分化成熟反应,但其调节功能略有差异。

关键词：法氏囊活性肽BP7 BP9 H9N2灭活疫苗 T细胞亚型

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泛素化激酶Cbl蛋白对H9N2亚型禽流感病毒早期复制的抑制作用

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畜牧与兽医 2021年第6期53卷 78-83页

作者：陈佳静李彤彤张则卢安然李陈飞冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部“动物健康与食品安全”国际合作联合实验室江苏南京210095

为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒... 详细信息

为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒的血凝素(HA)、核蛋白(NP)和非结构蛋白(NS)基因水平;采用RNAi技术检测Cbl对病毒HA基因表达水平的影响。结果显示:EcoRⅠ、HindⅢ双酶切鉴定及测序分析发现,成功构建真核表达重组载体FLAG-Cbl;Western blot结果证实H9N2亚型AIV感染FLAG-Cbl重组载体转染的A549细胞6 h时,病毒NP蛋白表达降低;荧光定量PCR结果证实病毒NP、NS及HA基因在AIV感染FLAG-cbl重组载体转染的A549细胞的6和12 h时表达水平均明显降低;RNAi敲低A549细胞内源性Cbl蛋白后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12、24和36 h明显升高。结果表明:Cbl蛋白能在早期抑制H9N2亚型AIV在A549细胞上的复制,为深入研究Cbl蛋白抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗AIV的药物研发提供了参考。

关键词： Cbl蛋白 H9N2亚型AIV 重组蛋白表达病毒基因表达 siRNA

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牛结节性皮肤病病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用

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畜牧与兽医 2022年第11期54卷 100-105页

作者：伍子昂南文龙吴晓东王怡王俊荣高雁怩白娟杨振姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/“一带一路”国际重大跨境动物疫病诊断与免疫专业科技创新院江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)是近年来我国新出现的一种牛传染性疾病。本研究根据LSD病毒(LSDV)的LSD022基因保守区域,设计出引物和探针,经过反应条件优化,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,测试了其敏感性、特异性和... 详细信息

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)是近年来我国新出现的一种牛传染性疾病。本研究根据LSD病毒(LSDV)的LSD022基因保守区域,设计出引物和探针,经过反应条件优化,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,测试了其敏感性、特异性和重复性。结果发现,本方法敏感性达到15 copies/μL,不与其他牛病病毒和山羊痘弱毒疫苗AV41发生反应,变异系数均小于3%。用本方法和OIE推荐的普通PCR方法检测发病牛场94份临床样品,LSDV检出率分别为62%和37%,其中阳性样品2种方法检测符合率为96.7%,说明本方法敏感性、特异性和重复性较好,可用于LSDV检测。

关键词：牛结节性皮肤病 TaqMan探针实时荧光定量PCR

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链球菌引发宿主中毒性休克综合症相关机制的研究进展

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微生物学报 2021年第3期61卷 501-511页

作者：张郁敏马家乐赵焱刘广锦南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室OIE猪链球菌病参考实验室江苏南京210095 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730030

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依... 详细信息

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依赖超抗原的STSS病例报道,致病机制较为复杂。本文主要对不依赖链球菌超抗原引发STSS的机制研究进行介绍,包括链球菌感染后宿主细胞中炎症信号通路的激活、炎性小体和细胞焦亡的发生、促炎细胞因子的释放以及细胞因子风暴等。同时,对研究链球菌STSS常采用的细胞和动物模型进行总结,旨在为实验室开展STSS的机制研究奠定理论基础。

关键词：链球菌链球菌性中毒性休克综合症炎症信号通路促炎细胞因子炎性小体细胞焦亡细胞因子风暴

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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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中国动物传染病学报 2021年

作者：敖清莹钟秋萍史馨瑾魏常青刘英楠廖欣欣谢振华钱莺娟郑龙三陈鸿军南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室中国农业科学院上海兽医研究所

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。... 详细信息

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞，出现明显病变后，收获细胞培养上清，在正常Sf9细胞中传三代，获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况，并通过间接免疫荧光（IFA）和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示，在感染的Sf9细胞中，p54蛋白能获得高效表达，并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性，为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白昆虫细胞表达系统免疫原性

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猪塞尼卡病毒VP2 ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1123-1127,1151页

作者：周而璇范慧延君芳姜平白娟南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

猪塞尼卡病毒(SVA)是影响我国生猪产业的一种新的重要病原,临床上主要引起猪口腔和蹄冠部水泡,与口蹄疫临床症状十分相似。为建立快速、敏感和特异的SVA血清抗体检测方法,本研究采用原核表达系统表达该病毒VP2蛋白,证实其以包涵体形式表... 详细信息

猪塞尼卡病毒(SVA)是影响我国生猪产业的一种新的重要病原,临床上主要引起猪口腔和蹄冠部水泡,与口蹄疫临床症状十分相似。为建立快速、敏感和特异的SVA血清抗体检测方法,本研究采用原核表达系统表达该病毒VP2蛋白,证实其以包涵体形式表达,纯化后获得了VP2重组蛋白。经过反应条件优化,建立了SVA VP2间接ELISA抗体的检测方法。该方法与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒阳性血清均无交叉反应;敏感性为91.6%,批内和批间重复系数分别为11.1%和9.67%。上述结果表明该方法特异性、敏感性和重复性较好。符合率试验结果显示,该方法与血清中和抗体试验符合率为91.9%。利用本实验建立的间接ELISA抗体方法检测2016年~2019年华东地区5个省份2070份猪血清,结果显示,江苏、安徽、浙江、山东和江西省SVA抗体阳性率分别为73%、67%、69%、74%和73%;且各年度抗体阳性率均较高,其中2016年最高达86.9%。本研究为我国SVA检测和流行病学调查提供了有效方法。

关键词：塞内卡病毒 VP2 间接ELISA 流行病学

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2018-2019年苏豫赣三省猪伪狂犬病病毒野毒抗体流行病学调查

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畜牧与兽医 2020年第1期52卷 122-124页

作者：陈驰曹明珠吕林白娟王先炜姜平南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为了解近2年苏豫赣地区猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,采集江苏、河南和江西3省111家规模猪场3 804份猪的血清样品,用PRV gE-ELISA抗体检测方法进行PRV野毒抗体检测,结果:猪场PRV gE抗体阳性率为75.68%(84/111),血清样品总阳性率为36.75%... 详细信息

为了解近2年苏豫赣地区猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,采集江苏、河南和江西3省111家规模猪场3 804份猪的血清样品,用PRV gE-ELISA抗体检测方法进行PRV野毒抗体检测,结果:猪场PRV gE抗体阳性率为75.68%(84/111),血清样品总阳性率为36.75%(1 398/3 804),其中,种公猪PRV gE抗体阳性率最高,为68.89%;生产母猪PRV gE抗体阳性率最低,为28.84%。此外,春季血清gE抗体阳性率最高,夏季较低。调查结果表明,该地区猪场PRV野毒感染率依然较高,制定科学合理的免疫程序并加强综合防控十分必要。

关键词：伪狂犬病病毒流行病学 gE抗体

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安徽部分地区猪场产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

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畜牧与兽医 2020年第5期52卷 87-91页

作者：任建鸾张鹏殷晗杰黄豪胜杨德鸿曾颃李一昊南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室/南京农业大学动物医学院江苏南京210095

产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是猪场仔猪黄白痢的重要病原之一。为调查安徽省猪场中ETEC的感染情况,在2018年对该省6个地区的17个规模化猪场的仔猪黄白痢样品进行了ETEC的分离鉴定。结果:经PCR鉴定,在479... 详细信息

产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是猪场仔猪黄白痢的重要病原之一。为调查安徽省猪场中ETEC的感染情况,在2018年对该省6个地区的17个规模化猪场的仔猪黄白痢样品进行了ETEC的分离鉴定。结果:经PCR鉴定,在479份病料中分离出110株ETEC菌株。对这些菌株进行血清型、耐药性和致病力分析表明,该110株ETEC菌株共鉴定出13种血清型,以O8、O20、O128为优势血清型。110株ETEC菌株表现出高耐药性,对强力霉素的耐药率高达100%(110/110);对新霉素、红霉素、庆大霉素、阿莫西林、四环素等抗生素的耐药率均高达70%以上,且多数菌株表现出多重耐药,其中9、10重耐药菌株数最多。分别将优势血清型O8、O20、O128菌株对小鼠进行攻毒,结果同一血清型中强毒株数量分别占该血清型菌株总数的50%(55/110)、72.7%(8/11)和66.7%(4/6),表明这些优势血清型菌株的毒力普遍较高。本研究为猪场ETEC引起的仔猪黄白痢的流行病学研究及防控提供一定的参考。

关键词：产肠毒素大肠杆菌血清型耐药性毒力

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nrdF基因介导禽致病性大肠杆菌DE205B的抗氧化应激

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南京农业大学学报 2020年第3期43卷 492-497页

作者：姜珊汤芳刘云李德志任建鸾张中华巩倩雯戴建君教育部动物健康与食品安全国际联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室/南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究前噬菌体phiv205-3片段对禽致病性大肠杆菌DE205B氧化应激耐受力的影响。[方法]利用Red同源重组技术敲除前噬菌体phiv205-3片段,构建前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3,检测野生株和前噬菌体片段缺失株对氧化应激... 详细信息

[目的]本文旨在研究前噬菌体phiv205-3片段对禽致病性大肠杆菌DE205B氧化应激耐受力的影响。[方法]利用Red同源重组技术敲除前噬菌体phiv205-3片段,构建前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3,检测野生株和前噬菌体片段缺失株对氧化应激的耐受力;进一步敲除前噬菌体片段中氧化应激耐受相关基因nrdE、nrdF、nrdH、nrdI,构建前噬菌体基因缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdF、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI,并通过基因序列分析和荧光定量PCR(qPCR)检测这些缺失菌株和野生菌株的氧化应激耐受力。[结果]与野生株相比,前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3氧化应激耐受力下降33%(P<0.05);qPCR检测结果显示,前噬菌体基因nrdF在氧化应激情况下转录水平显著提高(P<0.05);对构建前噬菌体单基因缺失株检测结果显示:与野生株相比,缺失株DE205BΔnrdF在氧化应激环境下的存活率下降21%(P<0.05),而缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI的存活率无显著变化。[结论]前噬菌体片段编码的nrdF基因有助于增强宿主细菌DE205B氧化应激耐受力。

关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌氧化应激 nrdF

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