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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2023年第5期44卷 112-117页

作者：庞茂达杜加园孙利厂包红朵曾小轩王志博刘永杰尼博王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/江苏省食品质量安全重点实验室(省部共建国家重点实验室培育基地) 南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 山东青岛266032

基于MedChemExpress天然产物库筛选对无乳链球菌有抗菌效果的天然产物,采用成药性预测工具Swisse-ADME分析其成药性,并测定抗菌天然产物对人源、奶牛源、鱼源等不同来源菌株的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和最小生物被膜清除浓度。结果表... 详细信息

基于MedChemExpress天然产物库筛选对无乳链球菌有抗菌效果的天然产物,采用成药性预测工具Swisse-ADME分析其成药性,并测定抗菌天然产物对人源、奶牛源、鱼源等不同来源菌株的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和最小生物被膜清除浓度。结果表明:从2443个天然产物中共鉴定出104个对无乳链球菌有显著抗菌效果的天然产物,其中15个成药性前景较好的天然产物,其最小抑菌浓度介于4~256μg·mL^(-1)之间,藤黄酸、血根碱、白屈菜红碱、冬凌草甲素和积雪草酸等5个天然产物对无乳链球菌的最小杀菌浓度介于4~64μg·mL^(-1)之间,最小生物被膜清除浓度介于32~128μg·mL^(-1)之间,具有开发成新型无乳链球菌抗菌药物的潜力。

关键词：无乳链球菌天然产物抗菌药物

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CRISPR/Cas9介导RSAD2基因敲除的ST细胞模型建立

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中国细胞生物学学报 2022年第6期44卷 1069-1076页

作者：李娟杜柳阳顾金燕曹瑞兵南京农业大学动物医学院南京210095 浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室杭州310058

RSAD2是一种多功能干扰素(interferon,IFN)诱导蛋白。该研究利用CRISPR/Cas9系统建立了RSAD2基因敲除的猪睾丸细胞系(swine testicular cell,ST cell)模型。应用在线工具设计了针对RSAD2基因的4条sgRNA,并将其克隆至pX459载体。经嘌呤... 详细信息

RSAD2是一种多功能干扰素(interferon,IFN)诱导蛋白。该研究利用CRISPR/Cas9系统建立了RSAD2基因敲除的猪睾丸细胞系(swine testicular cell,ST cell)模型。应用在线工具设计了针对RSAD2基因的4条sgRNA,并将其克隆至pX459载体。经嘌呤霉素初步筛选、Western blot检测确定了RSAD2-sgRNA-4具有最优敲除效果。该实验通过单克隆化转染RSAD2-sgRNA-4的ST细胞后成功获得RSAD2基因敲除ST细胞模型。双荧光素酶活性实验及实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)证明,RSAD2基因敲除对ST细胞的IFN-β、IRF3、NF-κB基因启动子活性及mRNA水平没有明显影响。该实验利用CRISPR/Cas9系统构建并获得稳定敲除RSAD2基因的ST细胞模型,为RSAD2功能研究提供有力工具。

关键词： RSAD2 CRISPR/Cas9系统基因敲除

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适合早期诊断的非洲猪瘟sIgA抗体量子点免疫层析检测方法建立

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畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4311-4319页

作者：谢青云易玮婕李嘉豪白昀谢星袁厅张越冯余凡赵东明步志高刘斐冯志新江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程重点实验室南京210014 南京农业大学动物医学院单分子纳米生物学实验室南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染引起的一种烈性猪传染病,其极高的传染性和发病率给养猪产业造成了巨大的经济损失。目前尚无安全有效的ASF疫苗,因此早期监测是防控ASF最重要的解决方案之一。建立敏感、快速的AS... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染引起的一种烈性猪传染病,其极高的传染性和发病率给养猪产业造成了巨大的经济损失。目前尚无安全有效的ASF疫苗,因此早期监测是防控ASF最重要的解决方案之一。建立敏感、快速的ASF现场即时检验方法,对维护生猪产业繁荣具有重要意义。首先基于氨基和羧基的偶联反应制备量子点微球(quantum dot microsphere,QDM)偶联ASFV重组抗原蛋白p30的检测探针和QDM-兔抗鸡IgY质控探针;接着在检测线和质控线分别固定鼠抗猪IgA-Sc片段抗体和鸡IgY蛋白制备侧向流免疫试纸条;待检动物口腔液中的ASF sIgA抗体经QDM-p30捕获可被固定至T线。将ASFV阳性口腔液以2倍梯度稀释,检测该方法的灵敏度。通过检测其他几种常见猪病病毒验证该方法的特异性。通过检测ASFV阴性和阳性动物的口腔液临床样本评价该方法的临床诊断效能。该方法特异性好,与PRV、CSFV、PRRV不存在交叉反应;灵敏度高,最低检出稀释度可达1∶64;耗时短,可在20 min内完成检测;操作便捷,无需侵入式采样;检出时间早,人工感染最早可于感染后第6天检出。本研究开发了一种口腔液中ASF sIgA抗体的现场即时检验(point-of-care testing,POCT)量子点免疫试纸条,为ASFV的监测和防控提供了新的技术支持和补充。

关键词：非洲猪瘟 sIgA抗体量子点免疫试纸条现场即时检验

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猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

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畜牧与兽医 2025年第06期57卷 98-104页

作者：张金霞曹莹张昊文刘德鹏李铎王晓冉田似报吴香菊齐静周萌王先炜杜以军南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室山东省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽生物组学重点实验室济南市企业服务中心

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3... 详细信息

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物，定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点，构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达；通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果：猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功；猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性，促进STING K63连接的多聚泛素化修饰，而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词：猪TRIM56 E3泛素连接酶定点突变 STING

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法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的基因表达谱及功能分析

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畜牧与兽医 2021年第4期53卷 82-88页

作者：李彤彤张则陈佳静李陈飞卢安然周广防冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平... 详细信息

试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。

关键词：法氏囊活性肽BP7 DT40细胞基因表达谱通路分析生物学功能

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nrdF基因介导禽致病性大肠杆菌DE205B的抗氧化应激

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南京农业大学学报 2020年第3期43卷 492-497页

作者：姜珊汤芳刘云李德志任建鸾张中华巩倩雯戴建君教育部动物健康与食品安全国际联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室/南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究前噬菌体phiv205-3片段对禽致病性大肠杆菌DE205B氧化应激耐受力的影响。[方法]利用Red同源重组技术敲除前噬菌体phiv205-3片段,构建前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3,检测野生株和前噬菌体片段缺失株对氧化应激... 详细信息

[目的]本文旨在研究前噬菌体phiv205-3片段对禽致病性大肠杆菌DE205B氧化应激耐受力的影响。[方法]利用Red同源重组技术敲除前噬菌体phiv205-3片段,构建前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3,检测野生株和前噬菌体片段缺失株对氧化应激的耐受力;进一步敲除前噬菌体片段中氧化应激耐受相关基因nrdE、nrdF、nrdH、nrdI,构建前噬菌体基因缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdF、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI,并通过基因序列分析和荧光定量PCR(qPCR)检测这些缺失菌株和野生菌株的氧化应激耐受力。[结果]与野生株相比,前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3氧化应激耐受力下降33%(P<0.05);qPCR检测结果显示,前噬菌体基因nrdF在氧化应激情况下转录水平显著提高(P<0.05);对构建前噬菌体单基因缺失株检测结果显示:与野生株相比,缺失株DE205BΔnrdF在氧化应激环境下的存活率下降21%(P<0.05),而缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI的存活率无显著变化。[结论]前噬菌体片段编码的nrdF基因有助于增强宿主细菌DE205B氧化应激耐受力。

关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌氧化应激 nrdF

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链球菌引发宿主中毒性休克综合症相关机制的研究进展

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微生物学报 2021年第3期61卷 501-511页

作者：张郁敏马家乐赵焱刘广锦南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室OIE猪链球菌病参考实验室江苏南京210095 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730030

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依... 详细信息

某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依赖超抗原的STSS病例报道,致病机制较为复杂。本文主要对不依赖链球菌超抗原引发STSS的机制研究进行介绍,包括链球菌感染后宿主细胞中炎症信号通路的激活、炎性小体和细胞焦亡的发生、促炎细胞因子的释放以及细胞因子风暴等。同时,对研究链球菌STSS常采用的细胞和动物模型进行总结,旨在为实验室开展STSS的机制研究奠定理论基础。

关键词：链球菌链球菌性中毒性休克综合症炎症信号通路促炎细胞因子炎性小体细胞焦亡细胞因子风暴

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禽致病性大肠杆菌O1、O2、O78血清型三重PCR检测方法的建立

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南京农业大学学报 2020年第1期43卷 108-115页

作者：王娟芳戴建君姜敏任建鸾李德志张鹏孙建和汤芳南京农业大学动物医学院/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

[目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌O1、O2和O 783种血清型的三重PCR检测方法。[方法]根据O1、O2和O 783种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O1、O2和O 78血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重... 详细信息

[目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌O1、O2和O 783种血清型的三重PCR检测方法。[方法]根据O1、O2和O 783种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O1、O2和O 78血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重PCR反应条件,进行特异性和敏感性检测,并对临床模拟样品进行检测。[结果]在三重PCR的25μL反应体系中,dNTP 1.5μL,MgCl 22.5μL,Taq DNA酶0.6μL,O1、O2、O78最佳引物加入量分别为0.6、0.2、0.6μL;最佳退火温度为55.9℃。三重PCR的特异性好,3种血清型之间无交叉反应;对146株不同血清型的大肠杆菌进行检测,准确率为99.32%(145/146),用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽胞杆菌进行特异性检测时,没有出现非特异性扩增。三重PCR敏感性高,以单一血清型DNA为模板时,O1和O2血清型的DNA最低检测限均为0.1 ng·μL^-1,O 78血清型的DNA最低检测限为0.02ng·μL^-1;以O 1、O2和O78混合DNA为模板时,最低检测限为0.05ng·μL^-1。对18份临床模拟样品进行检测,准确率为94.4%(17/18)。[结论]建立了一种能同时检测O1、O2和O783种血清型禽致病性大肠杆菌的三重PCR方法,方法特异性好,敏感性高,适用于临床上禽大肠杆菌病的快速检测。

关键词：三重PCR 禽致病性大肠杆菌血清型特异性敏感性

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荧光标记噬菌体快速检测K1荚膜大肠杆菌方法的建立及应用

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微生物学通报 2021年第9期48卷 3218-3229页

作者：黄豪圣王许航席静巩倩雯薛峰任建鸾汤芳戴建君南京农业大学动物医学院农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 广州海关技术中心广东广州510623 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210095

【背景】大肠杆菌(Escherichia coli,***)是引发新生儿脑膜炎和禽类脑膜炎最常见的革兰氏阴性菌,其中含K1荚膜大肠杆菌是重要的病原菌。目前,K1荚膜大肠杆菌的检测方法存在一些弊端。【目的】利用PNJ1809-36噬菌体的宿主特异性建立快速... 详细信息

【背景】大肠杆菌(Escherichia coli,***)是引发新生儿脑膜炎和禽类脑膜炎最常见的革兰氏阴性菌,其中含K1荚膜大肠杆菌是重要的病原菌。目前,K1荚膜大肠杆菌的检测方法存在一些弊端。【目的】利用PNJ1809-36噬菌体的宿主特异性建立快速检测K1荚膜大肠杆菌的方法。【方法】用荧光染料SYBR Gold标记PNJ1809-36噬菌体,侵染33株受试菌,在荧光显微镜下观察,测定该方法的特异性;倍比稀释宿主菌DE058,用荧光标记噬菌体侵染,测定该方法的灵敏度;用荧光标记噬菌体检测8份模拟粪样,测定该方法的临床应用效果;测定4℃避光保存4个月的荧光标记噬菌体的效价和检测效果。【结果】33株受试菌中的9株K1荚膜大肠杆菌有8株可见环状荧光,1株未能检出;20株非K1荚膜大肠杆菌以及4株非大肠杆菌属细菌均不能观察到荧光,检测灵敏度达100CFU/mL。8份模拟粪样的检测结果显示,3份含有K1荚膜大肠杆菌的粪样均可见环状荧光,5份不含K1荚膜大肠杆菌的粪样均无荧光。荧光标记噬菌体4℃避光保存4个月后效价无明显下降,检测效果无明显变化,表明该荧光标记噬菌体在4℃避光条件下较稳定。【结论】用荧光标记的PNJ1809-36噬菌体能够在15min内特异、快速、直观地检测K1荚膜大肠杆菌。

关键词：噬菌体荧光标记大肠杆菌检测 K1荚膜

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尼帕病毒的环境存活能力及相关消毒剂研究现状

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中国动物检疫 2024年第11期41卷 100-105页

作者：胡瑞琪崔超杰李云涛戈胜强马喆张慧魏荣王志亮南京农业大学江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 山东农业大学山东泰安271018 云南农业大学动物医学院云南昆明650201 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室山东青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 山东青岛266032

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性病毒,其在环境中的存活能力及对消毒剂的敏感性对防控其人兽感染至关重要。NiV对温度、干燥、紫外线均较敏感,对pH的耐受范围较广;在适宜环境下,病毒在尿液和果汁中稳定性较高。季铵类、含氯类及高浓度醇类... 详细信息

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性病毒,其在环境中的存活能力及对消毒剂的敏感性对防控其人兽感染至关重要。NiV对温度、干燥、紫外线均较敏感,对pH的耐受范围较广;在适宜环境下,病毒在尿液和果汁中稳定性较高。季铵类、含氯类及高浓度醇类消毒剂等均可完全灭活NiV,但其有效浓度和消毒时间是确保病毒被完全灭活的关键因素,同时要现配现用。本文综述了NiV在不同环境因素下的存活能力及其相关消毒剂研究现状,以期为NiV感染防控提供参考。

关键词：尼帕病毒传播途径环境存活能力消毒剂

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