检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1081-1085页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武高小飞陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 中国预防医学科学院

目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,***70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZα-A... 详细信息

目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,***70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建E蛋白基因主要抗原片段与hsp70的融合表达载体,融合基因以酶切位点BamHⅠ连接,用电穿孔法转化酵母X-33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果E蛋白基因与hsp70的融合表达载体构建成功,SDS-PAGE显示,其相对分子质量为114kD,与实际大小相符,经凝胶薄层扫描分析,表达量为33mg/L,经Western印迹验证,有良好的抗原性。结论E-hsp70融合蛋白在酵母中的表达为下一步研究hsp70是否能作为E蛋白免疫时的理想佐剂作准备。

关键词：乙型脑炎E蛋白主要抗原片段结核杆菌热休克蛋白70 融合巴斯德毕赤酵母抗原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

乙脑E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区融合酵母表达载体的构建

引用

中国生物工程杂志 2005年第B4期25卷 244-248页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 中国预防医学科学院北京100052

构建乙型脑炎E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosis hear shock protein70,***70)的肽连接区(Binding domain)基因融合表达载体,利用酵母表达系统,为下一步研究肽连接区是否能增强乙型脑炎E蛋白主要抗... 详细信息

构建乙型脑炎E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosis hear shock protein70,***70)的肽连接区(Binding domain)基因融合表达载体,利用酵母表达系统,为下一步研究肽连接区是否能增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性作准备。以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建,以酶切位点BamHI连接这2个基因,用电穿孔法转化酵母X-33,Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区的融合表达载体构建成功,SDS-PAGE显示,其相对分子质量为 68kDa,与实际大小相符且为分泌表达,表达量约为97mg／L,经Western印迹验证,抗原性较好。将用同样的酵母表达载体表达的乙脑E蛋白主要抗原片段(另文发表)与上述融合蛋白均以50pmol．的量分别对6-8周龄的:BALB／c小鼠进行腹膜内注射,3周后进行第二次免疫,从淋巴细胞的增殖和抗体滴度两个方面进行比较,最后得出E-BD融合蛋白在免疫效果方面比乙脑E蛋白主要抗原片段效果要好,在试验中肽连接区可以增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性。

关键词：乙脑E蛋白主要抗原片段结核杆菌hsp70肽连接区巴斯德毕赤酵母淋巴细胞的增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

引用

中国人兽共患病杂志 2003年第5期19卷 31-35页

作者：杨耀武齐香荣陈德胜何孔旺陈溥言沈国顺南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 江苏省农业科学院畜牧兽医研究所沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并... 详细信息

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 SA14-14-2株 E蛋白基因表达原核细胞抗原性基因克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡γ—IFN的研究进展

鸡γ—IFN的研究进展

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：孙公军李银李劲松陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组江苏省农科院兽医所禽病室南京农业大学动物医学院传染病组南京农业大学动物医学院传染病组

鸡的干扰素(IFN)是由鸡体或培养的鸡体细胞在干扰素诱生剂作用下所产生的一类非特异性的抗病毒物质。1957年Isaacs和Lindenman研究禽流感病毒的干扰现象时在鸡胚绒毛尿囊膜中首先发现,1963年Lampson证明它是一种糖蛋白。干扰素不是单一... 详细信息

鸡的干扰素(IFN)是由鸡体或培养的鸡体细胞在干扰素诱生剂作用下所产生的一类非特异性的抗病毒物质。1957年Isaacs和Lindenman研究禽流感病毒的干扰现象时在鸡胚绒毛尿囊膜中首先发现,1963年Lampson证明它是一种糖蛋白。干扰素不是单一的物质,而是一个干扰素系统。它在生物体中普遍存在。至少有两种亚型,即Ⅰ型和Ⅱ型。其中用纤维素和上皮细胞形成的纤维素上皮细胞干扰素和由白细胞形成的白细胞干扰素归为Ⅰ型,而T细胞在特异性免疫基础上形成的免疫干扰素(γ-IFN)归为Ⅱ型。

关键词：干扰素基因中国畜牧兽医学会 IFN 细胞凋亡重组病毒家畜传染病学编码区种属特异性肿瘤病干扰素系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家禽细菌性疾病病原基因功能及致病机理研究

引用

中国家禽 2011年第13期33卷 37-39页

作者：王少辉熊丽平李求春董洪燕南京农业大学动物医学院扬州大学农业部畜禽传染病实验室扬州大学生物科学与技术学院扬州大学兽医学院

禽致病性大肠杆菌侵袭相关基因ibeA的致病机理研究肠道外致病性大肠杆菌(ExPEC),如尿源性大肠杆菌(UPEC)、新生儿脑膜炎大肠杆菌(NMEC)、禽致病性大肠杆菌(APEC)等,它们在基因组结构上很相似,且具有很高的同源性;在遗传进化和生态分布... 详细信息

禽致病性大肠杆菌侵袭相关基因ibeA的致病机理研究肠道外致病性大肠杆菌(ExPEC),如尿源性大肠杆菌(UPEC)、新生儿脑膜炎大肠杆菌(NMEC)、禽致病性大肠杆菌(APEC)等,它们在基因组结构上很相似,且具有很高的同源性;在遗传进化和生态分布中也有较高相似性.NMEC和APEC拥有许多共同的毒力基因,如毒力岛***和APEC都可引起相应宿主的脑膜炎症状.

关键词：禽细菌性疾病病原基因功能禽致病性大肠杆菌尿源性大肠杆菌侵袭相关基因脑膜炎 APEC 基因组结构遗传进化相似性生态分布机理研究毒力基因新生儿同源性毒力岛肠道外症状宿主

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

引用

生物工程学报 2008年第9期24卷 1573-1581页

作者：李祥健张建武吕健余丹丹姚火春袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区... 详细信息

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征高致病性猪蓝耳病感染性克隆嵌合病毒候选疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

乙脑病毒E-Hsp70与E-肽连接区对小鼠特异性免疫的比较

引用

中国病毒学 2005年第4期20卷 357-361页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095 中国预防医学科学院病毒病研究所北京100052

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与... 详细信息

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的融合蛋白以及该抗原肽与Hsp70上的一个功能域-肽连接区(Peptidebindingdomain,以下简称BD)融合形成的蛋白,用这三种蛋白分别免疫BALB/c小鼠,以酵母单独表达的E蛋白主要抗原片段免疫作为对照,比较它们对小鼠抗E蛋白主要抗原片段特异性的细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹腔内注射蛋白的方法免疫小鼠,主要从IL-2的mRNA水平,淋巴细胞的增殖和抗体滴度这三个方面进行比较,最后我们得出E-BD融合蛋白在免疫效果方面比E-Hsp70略好一些,所以在本试验中肽连接区是完全可以代替Hsp70独立行使其佐剂功能。

关键词：乙脑病毒E蛋白主要抗原片段结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70) 肽连接区淋巴细胞的增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

含MDV部分gb基因、鸡γ—干扰素基因和EGFP基因表达盒HVT转移质粒载体pTu-gB-chIFN的构建

含MDV部分gb基因、鸡γ—干扰素基因和EGFP基因表达盒HVT转移质粒...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：孙公军李银刘宇卓张则斌马玉玲张敬峰李劲松陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组江苏省农科院兽医所禽病室江苏省农科院兽医所禽病室江苏省农科院兽医所禽病室南京农业大学动物医学院传染病组江苏省农科院兽医所禽病室南京农业大学动物医学院传染病组南京农业大学动物医学院传染病组

近年来,基因工程活载体苗的研究十分活跃,国内外的学者相继报道了能够成功表达外源基因的多种重组活载体疫苗,如禽痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、沙门氏菌等等。但对于这些重组活载体疫苗来说,除了考虑它们的安全性以外,抗原量表达不高也... 详细信息

近年来,基因工程活载体苗的研究十分活跃,国内外的学者相继报道了能够成功表达外源基因的多种重组活载体疫苗,如禽痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、沙门氏菌等等。但对于这些重组活载体疫苗来说,除了考虑它们的安全性以外,抗原量表达不高也是其难以推广应用的限制性因素。因此,如何提高活载体的免疫效果成为了国内外的研究热点。后来,随着研究的深入,人们渐渐地意识到细胞因子可以

关键词：酶切鉴定 pTu-gB-chIFN HVT 干扰素基因基因表达 MDV

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 227-231页

作者：高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化*** BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋... 详细信息

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化*** BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鼠伤寒沙门菌PagC蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

引用

南京农业大学学报 2018年第5期41卷 896-901页

作者：郭晓汪远范红结马喆南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际联合实验室江苏南京210095 重要动物传染病与人畜共患病预防和控制中心江苏协同创新中心江苏扬州225009

[目的]本试验旨在制备抗鼠伤寒沙门菌Pag C蛋白的单克隆抗体并初步分析其特异性和识别的抗原表位,为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的建立奠定基础。[方法]原核表达并纯化Pag C蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体;用生物... 详细信息

[目的]本试验旨在制备抗鼠伤寒沙门菌Pag C蛋白的单克隆抗体并初步分析其特异性和识别的抗原表位,为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的建立奠定基础。[方法]原核表达并纯化Pag C蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体;用生物信息学分析法获得Pag C蛋白在沙门菌属内保守的区段,合成相应多肽P1及P2用于单克隆抗体筛选和结合表位鉴定;最后采用免疫印迹方法对单克隆抗体与肠杆菌科其他细菌的交叉反应进行检测,评价其特异性。[结果]纯化后的Pag C蛋白相对分子质量约23×103;免疫小鼠后经2次亚克隆最终得到稳定分泌抗体的细胞株6株,标记为A、B、C、D、I、J;单克隆抗体的反应性试验结果显示6株单克隆抗体均能够识别Pag C蛋白;单克隆抗体的结合表位分析显示,J细胞株分泌的单克隆抗体可特异性识别P1序列;采用免疫印迹方法对J细胞株上清液进行特异性检测,证实该株单克隆抗体与变形杆菌、大肠杆菌O1和宋内志贺菌Pag C蛋白均无结合反应。[结论]成功获得1株与Pag C蛋白有良好结合活性且具有高度特异性的单克隆抗体,该株单克隆抗体的识别表位位于Pag C中沙门菌属内保守区段,可作为建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的候选单克隆抗体。

关键词：沙门菌 PagC 单克隆抗体合成肽特异性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：