检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第6期57卷 98-104页

作者：张金霞曹莹张昊文刘德鹏李铎王晓冉田似报吴香菊齐静周萌王先炜杜以军南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽生物组学重点实验室山东济南250100 济南市企业服务中心山东济南250001

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析,确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点;设计猪TRIM56 E3泛... 详细信息

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析,确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点;设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物,定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点,构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达;通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果:猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功;猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性,促进STING K63连接的多聚泛素化修饰,而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词：猪TRIM56 E3泛素连接酶定点突变 STING

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广西、四川两地屠宰场猪链球菌致病特征分析

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微生物学报 2023年第12期63卷 4714-4725页

作者：彭泽仁吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,同时也是一种人畜共患病原。屠宰场健康猪的猪链球菌感染率较高,血清型多而复杂,是人和猪的重要传染源。四川、广西两地都曾暴发猪链球菌疫情,大量生猪发病死亡的同时,也导致部... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,同时也是一种人畜共患病原。屠宰场健康猪的猪链球菌感染率较高,血清型多而复杂,是人和猪的重要传染源。四川、广西两地都曾暴发猪链球菌疫情,大量生猪发病死亡的同时,也导致部分与病猪有密切接触的人群发病死亡。因此,对上述两地区屠宰场进行猪链球菌感染调查,明确其致病特征,具有重要公共卫生意义。【方法】本研究自2021‒2022年采集广西、四川两地屠宰场健康猪扁桃体,分离鉴定猪链球菌并进行血清型分型,对分离株进行斑马鱼毒力、小鼠毒力试验,并对毒力株进行基因组测序,进行多序列位点分型(multilocus sequence typing,MLST)及毒力标志基因分析,探究其致病特征。【结果】广西57份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为84.21%(48/57),分离鉴定出60株猪链球菌,其中分离率最高的是血清31型(16.67%,10/60),其次为9型(11.67%,7/60)、4型(10.00%,6/60)、12型(8.33%,5/60)等,2型菌株仅分离出1株,含2种及以上不同血清型猪链球菌的扁桃体占33.33%(16/48);四川250份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为10.8%(27/250),分离鉴定出41株猪链球菌,其中分离率最高的血清型为31型(34.15%,14/41),其次为16型(17.07%,7/41)、9型(12.20%,5/41)、28型(9.76%,4/41)等,2型菌株仅分离出1株,含有2种以上不同血清型的扁桃体占33.33%(9/27)。选择44株不同血清型的代表菌株(广西28株,四川16株)进行斑马鱼毒力试验,结果显示,5株菌株对斑马鱼致病性较强,攻毒计量在3×106 CFU/尾时,对斑马鱼的致死率高达70%‒100%,其中广西3株分别为2型、9型和新荚膜基因簇(novel capsular polysaccharide loci,NCL)18型,四川2株分别为2型和9型。对上述5株毒力株进行小鼠毒力试验,结果显示4株菌株致死率高达80%‒100%,1株致死率为60%,与斑马鱼试验较为相符。MLST及毒力标志基因分析表明,2株血清2型菌株均为ST1型及mrp+、epf+、sly+毒力型,为世界范围内广泛流行的具有人畜共患潜力的致病型菌株;2株血清9型菌株毒力型均为mrp‒、epf‒和sly‒,ST型分别为ST1198和ST2104,1株NCL18型菌株为ST2102型和mrp+、epf‒、sly‒毒力型。【结论】上述结果表明,两地屠宰场猪链球菌的感染情况存在差异,广西屠宰场猪链球菌分离率较高,都存在世界范围内广泛流行的具有人畜共患潜能的血清2型ST1毒力株,公共卫生意义值得关注。

关键词：猪链球菌广西四川屠宰场健康猪致病特征

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猪链球菌检测技术研究进展

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微生物学报 2025年第3期65卷 883-897页

作者：李繁彭泽仁刘荣启孙洁吴宗福深圳市动植物疫病预防控制中心广东深圳南京农业大学动物医学院江苏南京农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,能够引发猪的脑膜炎、败血症、关节炎等多种疾病,给养猪业带来严重的经济损失。此外,该菌也能感染人类,导致疾病甚至死亡,是重要的人兽共患病原菌。因此,建立准确、快速、灵敏且简便的检... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,能够引发猪的脑膜炎、败血症、关节炎等多种疾病,给养猪业带来严重的经济损失。此外,该菌也能感染人类,导致疾病甚至死亡,是重要的人兽共患病原菌。因此,建立准确、快速、灵敏且简便的检测技术对于猪链球菌病的防控至关重要。目前,国内外已开发出多种猪链球菌检测技术,包括传统的微生物学、分子生物学、免疫学方法,以及基于纳米材料的免疫传感器、CRISPR-Cas12a系统、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱等新型检测技术。本综述概述了上述技术的原理、应用及其优缺点,并探讨了猪链球菌检测技术未来的发展方向,旨在为猪链球菌病的防控提供重要参考。

关键词：猪链球菌免疫学检测分子生物学检测方法 CRISPR-Cas12a 免疫传感器

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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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畜牧与兽医 2025年第4期57卷 101-106页

作者：司安琪王淑娟张永强王筱真任炜杰郑龙三包静月王志亮南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266032

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化... 详细信息

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化,利用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在进行4次免疫后,取加强免疫后的小鼠脾脏进行细胞融合,经阳性克隆筛选后,获得了2株能够稳定分泌抗CP312R蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blot和间接免疫荧光(IFA)等试验对所获得的单克隆抗体的特异性进行鉴定,Western blot结果显示,制备的2株单克隆抗体均能与CP312R蛋白发生特异性反应;IFA结果显示,2株单克隆抗体均能与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)产生特异性绿色荧光。综上,本研究制备的2株单克隆抗体,为非洲猪瘟血清学诊断方法及疫苗的研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 CP312R蛋白单克隆抗体原核表达

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猪源含缬酪肽蛋白(VCP)的真核表达及其活性鉴定

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畜牧与兽医 2022年第8期54卷 66-72页

作者：孙睿聪胡家欢李晓晗陈婧周斌南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

含缬酪肽蛋白(VCP)作为细胞中的重要活性蛋白,参与多种细胞过程,也在许多病毒的感染过程中发挥重要作用。为了探究VCP对猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒(JEV)和伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,试验扩增了猪源VCP的基因片段,并将其连接到pEGF... 详细信息

含缬酪肽蛋白(VCP)作为细胞中的重要活性蛋白,参与多种细胞过程,也在许多病毒的感染过程中发挥重要作用。为了探究VCP对猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒(JEV)和伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,试验扩增了猪源VCP的基因片段,并将其连接到pEGFP-C1载体中。经双酶切鉴定结合基因测序结果,成功构建真核表达重组载体pEGFP-VCP。通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)证实,重组质粒EGFP-VCP能在猪肾细胞(PK-15)中成功表达。而在表达pEGFP-VCP的细胞中分别感染CSFV、JEV和PRV后,通过Western blot、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、半数细胞感染量(TCID_(50))以及IFA试验,检测到过表达VCP能够明显促进CSFV、JEV以及PRV病毒蛋白的表达,提高胞内病毒核酸的含量,并且使胞外病毒滴度增加,极大地促进了3种病毒在PK-15细胞中的复制,为深入研究VCP促进多种病毒感染宿主细胞的分子机制奠定了理论基础。

关键词：含缬酪肽蛋白猪瘟病毒日本脑炎病毒伪狂犬病毒猪肾细胞复制

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EAEC噬菌体PNJ1809-11和PNJ1809-13作为环境消毒剂的杀菌效果评估

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微生物学报 2021年第7期61卷 2018-2030页

作者：钱新杰李一昊曾颃殷晗杰王瑜欣黄豪圣巩倩雯李德志薛峰汤芳戴建君南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

【目的】分析2株肠聚集性大肠杆菌(EAEC)CVCC232噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性,并对其作为环境消毒剂的杀菌效果进行评估。【方法】透射电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13的形态;通过宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长... 详细信息

【目的】分析2株肠聚集性大肠杆菌(EAEC)CVCC232噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性,并对其作为环境消毒剂的杀菌效果进行评估。【方法】透射电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13的形态;通过宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、对pH和温度耐受性的测定分析PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性;比较2株噬菌体的体外杀菌效果和喷雾、雾化处理后的杀菌效果;检测噬菌体在模拟养殖环境下的耐受性,及喷雾处理的噬菌体制剂在模拟养殖环境下的杀菌效果和对宿主菌生物被膜的清除效果;分析宿主菌的抗性突变率。【结果】电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13均为肌尾病毒科噬菌体;PNJ1809-11可裂解155株大肠杆菌,PNJ1809-13可裂解46株大肠杆菌;噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的最佳感染复数(MOI)均为10,最适pH均为7;与PNJ1809-13相比,PNJ1809-11具有较好的热稳定性;在模拟的封闭装置中,将两株噬菌体分别经喷雾、雾化处理后,二者对宿主菌的杀灭效果均可达99%以上;对人工污染的粪便表面细菌的杀灭效果均达到99%以上。噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13及两者的混合制剂(噬菌体鸡尾酒)对宿主菌CVCC232形成的生物被膜的裂解效率分别为78%、30%和83%。噬菌体PNJ1809-11在养殖温度、粪便pH以及阳光照射下,其耐受性均强于PNJ1809-13。宿主菌对PNJ1809-11、PNJ1809-13的抗性突变率分别为2.5×10^(-3)和1.0×10^(-3)。【结论】综上,噬菌体PNJ1809-11的环境耐受力更强,噬菌体鸡尾酒对生物被膜的裂解效果更好,提示噬菌体PNJ1809-13或噬菌体鸡尾酒经喷雾处理后具有作为环境杀菌剂的潜力。

关键词：噬菌体噬菌体鸡尾酒消毒剂耐受性生物被膜

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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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中国动物传染病学报 2023年第4期31卷 164-169页

作者：敖清莹钟秋萍史馨瑾魏常青刘英楠廖欣欣谢振华钱莺娟郑龙三陈鸿军南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业农村部细菌学重点实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白昆虫细胞表达系统免疫原性

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波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究

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畜牧与兽医 2022年第4期54卷 93-101页

作者：卢安然殷贵虎黄翔宇黄静雯胡嘉宁蔡怡秦冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA... 详细信息

为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。

关键词：波形蛋白 H9N2亚型AIV 重组蛋白表达病毒基因表达小干扰RNA

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2021—2022年山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

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畜牧与兽医 2023年第6期55卷 87-92页

作者：姜丹丹王凯月杜以军姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东济南250100 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300380

为研究2021—2022年猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在山东地区的流行情况,从疑似发病的猪场采集了103份临床样本,采用RT-PCR方法对样品进行检测,并对阳性样品进行GP5和NSP2基因的序列测定、遗传进化分析以及同源性分析。结果显示:103份... 详细信息

为研究2021—2022年猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在山东地区的流行情况,从疑似发病的猪场采集了103份临床样本,采用RT-PCR方法对样品进行检测,并对阳性样品进行GP5和NSP2基因的序列测定、遗传进化分析以及同源性分析。结果显示:103份样品中检测到21份阳性样品,阳性率为20.38%。最终有5个样品能够同时扩增出GP5和NSP2基因序列,遗传进化分析显示,这5个样品中有2个属于谱系(lineage)1;2个属于lineage 5;1个属于lineage 8。各样品之间GP5基因的核苷酸同源性为81.5%~99.3%,NSP2基因的核苷酸同源性为56.9%~99.4%。本研究表明2021—2022年山东地区的PRRSV传播呈现多样性,为PRRSV毒株的遗传变异、演化分析和防控提供了理论基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒同源性流行病学遗传变异进化分析

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浙江某市屠宰场猪链球菌血清型、耐药及致病特征

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微生物学报 2022年第8期62卷 3236-3250页

作者：刘召颖朱夏雨牛洪颖万欣吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要病原菌,同时也是人畜共患病原。猪的扁桃体是猪链球菌主要定殖部位之一,是易感猪和人的重要传染源。因此,对屠宰场健康猪进行猪链球菌流行病学调查,具有重要的公共卫生学意义。【方法】... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要病原菌,同时也是人畜共患病原。猪的扁桃体是猪链球菌主要定殖部位之一,是易感猪和人的重要传染源。因此,对屠宰场健康猪进行猪链球菌流行病学调查,具有重要的公共卫生学意义。【方法】本研究自2020年至2021年,从浙江某市屠宰场采集健康猪扁桃体样品,分离鉴定猪链球菌,采用血清型特异性PCR法分型,通过耐药基因检测、药敏试验、斑马鱼毒力实验分析其耐药及致病特征。【结果】131份健康猪扁桃体样品猪链球菌阳性率为62.59%(82/131),共分离猪链球菌68株,其中16型分离率最高,占比16.18%(11/68),其次为31型(11.76%,8/68)、9型(7.35%,5/68)、3型(7.35%,5/68)等。含2种及以上血清型的扁桃体样品占15.85%(13/82)。药敏试验表明,分离株主要对林可酰胺类(100%,68/68)、大环内酯类(98.53%,67/68)、四环素类(100%,68/68)抗生素耐药,所有菌株均属于多药耐药。值得关注的是,有18株菌对青霉素耐药、3株菌对头孢噻肟耐药、2株菌对利福平耐药、11株菌对利奈唑胺耐药。大环内酯类/林可酰胺类耐药基因、四环素类耐药基因检出率均为82.35%(56/68),这是猪链球菌对这些抗生素耐药的主要原因。按不同批次分离的菌株,选择25株代表株进行斑马鱼毒力实验,结果显示:5株菌对斑马鱼致病力强,攻毒剂量为3×10^(6)CFU/尾时死亡率为80%–100%。【结论】该地区健康猪不仅猪链球菌携带率高,而且存在多药耐药和致病性强的菌株,这为了解该地区猪链球菌病的发病规律和制定相关的防控策略提供参考。

关键词：猪链球菌浙江屠宰场健康猪耐药致病

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