检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2023年第2期55卷 73-79页

作者：赵普陈欢张财盛明鑫钱莺娟戴建君郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部细菌学重点实验室/江苏省外国专家工作室江苏南京210095

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对... 详细信息

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC_(50)均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。

关键词： PEDV 两性霉素B 病毒入胞巨胞饮

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兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

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江苏农业科学 2023年第18期51卷 40-44页

作者：王冠萱陈萌萌仇汝龙范志宇胡波宋艳华魏后军葛雷徐为中王芳钱莺娟江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断,建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的Taq Man实时PCR。结果显示,稀释度为1×10^(8)~1×10^(4) copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系,决定系数r^(2)为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性,与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应;检测灵敏度为100~1000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%~1.61%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测,结果显示,RHDV检出率为70.5%,敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此,该方法能够同时检测RHDV1型和RHDV2型,可用于鉴别诊断兔出血症病毒。

关键词：兔出血症病毒1型兔出血症病毒2型双重TaqMan qPCR

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一例PEDV S-INDEL重组毒案例的复盘分析

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今日养猪业 2023年第1期 77-80页

作者：张欣崔敏杨雷王云龙刘海成姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室烟台龙大养殖有限公司

山东省烟台市某规模化猪场哺乳仔猪发生以水样腹泻为主要症状的临床案例,采集腹泻病料,荧光定量PCR检测流行性腹泻抗原阳性,阳性样品进行测序分析,遗传进化分析位于新型PEDV毒株中的G1b亚型,首次发现PEDV S-INDEL重组毒。通过紧急防控措... 详细信息

山东省烟台市某规模化猪场哺乳仔猪发生以水样腹泻为主要症状的临床案例,采集腹泻病料,荧光定量PCR检测流行性腹泻抗原阳性,阳性样品进行测序分析,遗传进化分析位于新型PEDV毒株中的G1b亚型,首次发现PEDV S-INDEL重组毒。通过紧急防控措施,疫情未发生扩散,通过复盘分析,确定此次疫情来源于引种所致。

关键词：流行性腹泻水样腹泻 PEDV 腹泻病测序分析哺乳仔猪规模化猪场荧光定量PCR检测

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PH826噬菌体与抗生素联用有效抑制多重耐药铜绿假单胞菌生物被膜的形成

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微生物学报 2024年第2期64卷 473-488页

作者：胡紫萌陈伟叶陈欣仪李培李敏周璐杜鸿刘玉庆张炜谈忠鸣南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 南京农业大学三亚研究所海南三亚572024 江苏省疾病预防控制中心急性传染病防制所江苏南京210009 苏州大学第二附属医院临床检验科江苏苏州215004 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250100

【目的】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种重要的革兰氏阴性病原体,可以加重囊性纤维化患者的肺部感染,最终会导致患者的死亡。然而由于多重耐药(multi-drug resistant,MDR)和泛耐药(pan-drug resistant,PDR)铜绿假单胞菌菌... 详细信息

【目的】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种重要的革兰氏阴性病原体,可以加重囊性纤维化患者的肺部感染,最终会导致患者的死亡。然而由于多重耐药(multi-drug resistant,MDR)和泛耐药(pan-drug resistant,PDR)铜绿假单胞菌菌株的出现,使其防控变得更为严峻。【方法】从养殖场污水中分离能有效裂解多重耐药铜绿假单胞菌的噬菌体,研究其形态特征、生物学特性、宿主谱范围、基因组特征和体外抑菌能力等,并采用噬菌体和抗生素联用的方法进行生物被膜的抑制试验。【结果】透射电子显微镜的形态分析和基因组分析结合表明,该噬菌体属于Nankokuvirus病毒属。生物学特性试验表明,PH826具有广泛的温度稳定性(4-60℃)和pH稳定性(3.0-11.0)。宿主谱测试显示,PH826可以裂解13株铜绿假单胞菌(包括人源和动物源),体外抑菌试验显示,PH826在感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、1、0.1时对铜绿假单胞菌均有强烈的裂解作用。根据基因组分析,PH826噬菌体的基因组大小为87956 bp,G+C含量为54.70%,编码165个开放阅读框(open reading frames,ORFs),并预测携带有裂解酶。值得注意的是,在24 h和48 h内,PH826和环丙沙星联用在1×、2×、4×最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的条件下都减少了80%以上的生物被膜的形成;PH826和美罗培南联用在24h和48h内,在2×MIC和4×MIC的条件下也减少了80%以上的生物被膜的形成。【结论】PH826可能是一种潜在的消毒剂和治疗剂,可以单独使用或与抗生素联合使用,用于预防和治疗致病性铜绿假单胞菌。

关键词：噬菌体铜绿假单胞菌生物被膜多重耐药性抗生素

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赤羽病通过云南边境地区活牛走私传入我国的定量风险评估

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畜牧与兽医 2024年第11期56卷 94-99页

作者：李超戴美霞王双翔独佳芸黄克和张毅薛峰南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)/青岛市动物生物安全重点实验室山东青岛266032 遵义医科大学贵州遵义563004

为分析评估云南边境地区活牛走私传入赤羽病的可能性,收集整理云南边境地区活牛非法调入数量等信息,利用“情景树”法建立传入风险随机模型并进行仿真分析。结果显示:每走私调入1头境外活牛,赤羽病传入我国的概率为50.37%(95%CI:41.64%~... 详细信息

为分析评估云南边境地区活牛走私传入赤羽病的可能性,收集整理云南边境地区活牛非法调入数量等信息,利用“情景树”法建立传入风险随机模型并进行仿真分析。结果显示:每走私调入1头境外活牛,赤羽病传入我国的概率为50.37%(95%CI:41.64%~60.29%),每年约有76头感染赤羽病的活牛自云南边境走私进入我国,境外活牛走私导致赤羽病传入我国的风险仍不容忽视,赤羽病通过境外活牛走私传入我国的风险取决于境外活牛被我国海关查获并无害化处理的可能性,建议加强边境的管控力度和海关的查获力度。本研究对赤羽病通过云南边境地区活牛走私传入我国的风险进行了定量评估研究,为我国防范赤羽病的境外传入提供了重要的数据支撑。

关键词：赤羽病定量风险评估活牛走私

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胸膜肺炎放线杆菌ApxⅠ、ApxⅢ和ApxⅣ的截短表达及免疫反应性鉴定

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畜牧与兽医 2021年第6期53卷 84-89页

作者：于栋祝可心安家慧叶洋李玉峰南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为了制备胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)亚单位疫苗和建立配套的鉴别诊断方法,在蛋白抗原性和亲疏水性分析的基础上,设计了针对溶血外毒素(Apx)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ截短蛋白的基因扩增引物,以实验室保存的血清2型和血清... 详细信息

为了制备胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)亚单位疫苗和建立配套的鉴别诊断方法,在蛋白抗原性和亲疏水性分析的基础上,设计了针对溶血外毒素(Apx)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ截短蛋白的基因扩增引物,以实验室保存的血清2型和血清5型菌株基因组DNA作为模板进行特异性基因片段扩增,分别将目的片段克隆至原核表达载体pColdI后转化入Rosetta感受态细胞,通过1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,应用小鼠抗6×His组氨酸单克隆抗体和猪多抗对表达的重组蛋白上清进行Western blot分析。结果表明:PCR扩增产物与预期大小相符,通过酶切鉴定和测序证明成功构建了重组表达质粒pColdI-tApxⅠ、pColdI-tApxⅢ和pColdI-tApxⅣ。诱导表达的蛋白分子量分别为63、50和54 kDa,大小符合预期,可以稳定表达可溶性蛋白。Western blot显示表达的蛋白具有良好的免疫反应性。该试验的成功开展将为制备APP亚单位疫苗和建立配套的鉴别诊断方法奠定基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅠ ApxⅢ ApxⅣ 原核表达

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乳酸脱氢酶在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用

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中国兽医科学 2021年第10期51卷 1264-1269页

作者：毛健刘雪威刘星杨元奇白娟姜平南京农业大学动物医学院农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为了探究乳酸脱氢酶(LDH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主细胞及增殖复制中的作用。本研究采用高糖和低糖细胞营养液培养PRRSV,发现低糖培养基中添加葡萄糖可有效促进PRRSV复制。PRRSV感染Marc-145细胞可明显提高糖酵解的关键... 详细信息

为了探究乳酸脱氢酶(LDH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主细胞及增殖复制中的作用。本研究采用高糖和低糖细胞营养液培养PRRSV,发现低糖培养基中添加葡萄糖可有效促进PRRSV复制。PRRSV感染Marc-145细胞可明显提高糖酵解的关键激酶乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,并存在病毒感染剂量依赖性。采用LDHA抑制剂培黄素(galloflavin)和糖酵解的关键限速酶己糖激酶(HK)抑制剂2-DG,可以显著抑制PRRSV的N蛋白表达并降低病毒滴度。上述结果表明,LDHA可显著影响PRRSV复制,糖酵解在PRRSV感染中发挥重要作用,对该病防控具有重要意义。

关键词：糖酵解 PRRSV 葡萄糖乳酸脱氢酶A

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重庆屠宰场猪链球菌感染的调查

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畜牧与兽医 2022年第6期54卷 58-65页

作者：都玉刘召颖彭泽仁吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210095

旨在调查2021年重庆地区屠宰场表观健康猪群中猪链球菌的血清型、耐药和毒力特征,为制定该地区猪链球菌病的防控策略提供参考。以2021年重庆地区屠宰场表观健康猪扁桃体样品为试验材料,分离猪链球菌并对菌株进行血清型分型、耐药基因检... 详细信息

旨在调查2021年重庆地区屠宰场表观健康猪群中猪链球菌的血清型、耐药和毒力特征,为制定该地区猪链球菌病的防控策略提供参考。以2021年重庆地区屠宰场表观健康猪扁桃体样品为试验材料,分离猪链球菌并对菌株进行血清型分型、耐药基因检测、药敏试验、斑马鱼毒力试验,分析猪链球菌的流行特征。结果显示:2021年5—6月于重庆屠宰场共采集表观健康猪扁桃体154份,检出猪链球菌阳性样本80份(51.95%),从中分离到菌株87株;主要血清型分别为16型(16.09%,14/87)、9型(9.20%,8/87)、4型(8.05%,7/87),而血清2型检出率较低,占比4.60%(4/87)。分离株对林可酰胺类、四环素类、大环内酯类抗生素耐药率较高,分别为100%(87/87)、95.40%(83/87)、93.10%(81/87);对氨基糖苷类抗生素耐药率为59.77%(52/87);对利奈唑胺、β-内酰胺类、万古霉素、利福平的耐药率较低,分别为5.75%(5/87)、5.75%(5/87)、0(0/87)、0(0/87);96.55%(84株)的菌株对3类及以上的抗菌药耐药,属于多重耐药菌株。选取19株猪链球菌代表菌株进行斑马鱼攻毒试验,结果显示78.95%(15/19)的菌株对斑马鱼致死率≤33.33%,但血清3型菌株2021WUSS071和新荚膜基因簇-7(NCL-7)菌株2021WUSS102对斑马鱼的致死率高,分别为93.33%、86.67%,属于强毒株;菌株2021WUSS067和2021WUSS082对斑马鱼的致死率分别为60.00%、40.00%,属于中等毒力菌株。研究表明,重庆地区屠宰场猪群中猪链球菌流行率较高且血清型复杂,绝大多数菌株属于多药耐药,且存在毒力较强的菌株,需引起重视。

关键词：猪链球菌健康猪耐药毒力重庆

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特异性识别K1荚膜大肠杆菌的噬菌体PNJ1809-36生物学特性及全基因组分析

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畜牧兽医学报 2021年第6期52卷 1677-1688页

作者：巩倩雯李一昊曾颃于沛欣钱新杰王瑜欣戴建君汤芳南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际联合实验室农业农村部细菌学重点实验室南京210095

本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058(avian pathogenic Escherichia coli )为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生... 详细信息

本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058(avian pathogenic Escherichia coli )为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生长曲线测定、温度和酸碱耐受性测定、体外裂解能力测定以及全基因组测序及分析来研究该噬菌体的生物学特性和基因组特征。结果显示:噬菌体PNJ1809-36能够形成清晰透明的噬菌斑,其电镜照片显示为具有收缩尾部的肌尾科噬菌体;宿主谱分析结果显示,该噬菌体能够特异性裂解具有K1荚膜的大肠杆菌;最佳MOI为0.01;一步生长曲线结果显示,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min;噬菌体PNJ1809-36在40和50 ℃下存活良好,60 ℃ 30 min可使噬菌体完全失活;噬菌体在pH3~11之间均可存活,最适pH为6;体外裂解试验表明,该噬菌体可在6 h内完全抑制宿主菌的生长。经基因组测序与分析,噬菌体PNJ1809-36基因组全长为152 343 bp,GC含量为39.11%,含有277个开放阅读框(ORF),11个tRNA基因。同源性分析显示其与早期发现的K1特异性的短尾噬菌体(如K1F、K1E)的同源性较低,而与噬菌体nepoznato、PVP-SE 1和phAPEC8等K1特异性噬菌体同源性较高,基因序列相似性达90%。噬菌体PNJ1809-36是一株特异性识别K1荚膜大肠杆菌的烈性噬菌体,属于肌尾科噬菌体新的系统发育分支。其针对K1荚膜的特性,提示该噬菌体在鉴定K1型大肠杆菌和治疗K1型大肠杆菌引起的疾病方面存在潜力。

关键词：噬菌体 K1荚膜大肠杆菌生物学特性全基因组分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在昆虫细胞中的可溶性表达

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畜牧与兽医 2021年第6期53卷 99-103页

作者：尹园英高雁怩夏婷婷白娟姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白是该病毒基因工程亚单位疫苗研究的重要靶向抗原,基因变异较大,且难以高效表达。本研究通过比对美洲型PRRSV 3种基因亚型的代表性毒株GP5蛋白的氨基酸序列,选取其同源性较高的氨基酸序列组合为杂合... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白是该病毒基因工程亚单位疫苗研究的重要靶向抗原,基因变异较大,且难以高效表达。本研究通过比对美洲型PRRSV 3种基因亚型的代表性毒株GP5蛋白的氨基酸序列,选取其同源性较高的氨基酸序列组合为杂合GP5(xGP5m),并在其N端分别添加3种穿膜肽序列(TAT、ppTG20、MPG),克隆至杆状病毒表达载体pFastBac^(TM)Dual,构建获得4株重组杆状病毒,Western blot、间接免疫荧光试验和小鼠试验结果显示,TAT能明显提高GP5蛋白的可溶性表达水平,且能增强小鼠对GP5蛋白的免疫应答能力,为PRRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 穿膜肽杆状病毒表达系统

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