检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2019年第9期39卷 1829-1835页

作者：叶跃天郇文彬陈欢钱莺娟 JUNG Yong-sam 戴建君南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋... 详细信息

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。

关键词： PEDV 黄连素复制组装细胞凋亡

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2017年冬季上海地区犬流感病毒的检测与HA、NA序列的遗传进化分析

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畜牧与兽医 2019年第2期51卷 89-96页

作者：范玉凤高婷婷毛曌李叶刘广锦姚火春南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 上海鹏峰宠物医院上海200235

为了解2017年冬季上海临床接诊犬的流感病毒感染情况和病毒变异趋势,收集上海某动物医院疑似犬流感样品进行RT-PCR检测,构建HA、NA的重组载体并测序,对获得的序列进行进化分析、氨基酸变异分析,综合我国同亚型犬流感病毒HA序列进行进化... 详细信息

为了解2017年冬季上海临床接诊犬的流感病毒感染情况和病毒变异趋势,收集上海某动物医院疑似犬流感样品进行RT-PCR检测,构建HA、NA的重组载体并测序,对获得的序列进行进化分析、氨基酸变异分析,综合我国同亚型犬流感病毒HA序列进行进化率分析。结果显示:23份疑似样品中检出5份阳性样品,获得5个H3亚型的HA序列、2个N2亚型的NA序列,上述序列在进化树中已经形成独立的进化分支,与韩国、广东毒株亲缘关系最近;氨基酸比对表明,HA和NA在重要位点发生许多一致的突变,如抗原位点区域、糖基化位点等,NA茎部未见氨基酸插入;对2007年至2017年中国南方地区分离的H3N2犬流感病毒HA片段进行进化率、变异率分析显示,年平均进化率呈逐年增高趋势,变异不断积累。研究表明,开展犬流感病毒变异监测,掌握病毒变异和进化方向,对防控该病、防止病毒向人群传播有重要意义。

关键词：犬流感病毒 H3N2 进化率系统进化分析

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蓝舌病毒14型的分离与鉴定

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中国兽医科学 2019年第7期49卷 855-860页

作者：曹雨张莹辉赵炜陈新薄宗义姚文生 JUNG Yong-Sam 戴建君钱莺娟印春生南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定... 详细信息

为了解我国新疆地区羊蓝舌病的流行情况,对某羊场疑似发生蓝舌病的羊病料进行了采集,并进行病毒分离和鉴定。应用间接ELISA试剂盒检测血清抗体,抗凝血样品接种敏感的BHK21细胞进行连续盲传,对细胞病变呈阳性的样品进行间接免疫荧光鉴定,同时针对VP7片段和VP2片段设计引物进行RT-PCR检测鉴定,并对其L2基因进行系统发育树分析。结果显示,血清中BTV抗体检测均为阳性,接种BHK21细胞后均产生了特异性细胞病变,并与FITC标记的抗BTV单抗特异性结合,针对VP7扩增出1156bp片段,针对VP2分别扩增出850bp和1581bp片段,经测序和序列分析确定为BTV-14型。结果表明,我国新疆地区存在蓝舌病毒14型,这也是我国境内首次分离到蓝舌病毒14型,为进一步防控我国蓝舌病疫情提供了科学依据。

关键词：蓝舌病毒 14型分离鉴定

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伪狂犬病毒UL54蛋白与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性

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病毒学报 2018年第3期34卷 379-385页

作者：杨珊珊白娟吕林王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、... 详细信息

研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、TBK1、IRF3和IKKε诱导IFN-β表达的影响;免疫共沉淀方法检测UL54与IRF3的相互作用。构建UL54截短基因表达载体,用双荧光素酶报告基因检测系统和ELISA方法检测UL54截短基因对IFN-β启动子活性的影响。构建了pCDH-UL54和8个UL54截短基因真核表达载体。UL54显著抑制IFN-β和IRF3启动子活性,对RIGI、TBK1、IRF3、IKKε介导的IFN-β有抑制作用,免疫共沉淀方法检测证明其与IRF3存在互作。UL54的1-146aa、74-361aa和84-361aa截短体仍抑制IFN-β启动子活性,但第94aa后的其他截短体基因均丧失该抑制作用。PRV UL54通过与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性,UL54第84-94位氨基酸是其抑制IFN-β表达的关键功能区域。

关键词：伪狂犬病毒(PRV) UL54蛋白干扰素 IFN-β 信号通路

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2011—2017年华东地区猪圆环病毒3型分子流行病学调查

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中国兽医科学 2018年第8期48卷 985-990页

作者：李勇姜辰龙刘刚姜平白娟南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

为了明确我国猪场PCV3流行情况,采用PCR方法对2011—2017年采自山东、浙江、安徽、江苏及江西省的660份临床病料组织进行了PCV3检测。结果显示,PCV3于2011年即存在于我国猪场,阳性率为4.1%,此后呈现上升趋势,2017年阳性率为35.0%,并且... 详细信息

为了明确我国猪场PCV3流行情况,采用PCR方法对2011—2017年采自山东、浙江、安徽、江苏及江西省的660份临床病料组织进行了PCV3检测。结果显示,PCV3于2011年即存在于我国猪场,阳性率为4.1%,此后呈现上升趋势,2017年阳性率为35.0%,并且冬季最高。对13份PCV3阳性病料的Cap基因进行了测序,进化树分析结果表明,该地区的流行毒株主要属于PCV3a亚型。本研究结果为PCV3的防控研究提供了重要依据。

关键词： PCV3 PCR 分子流行病学种间传播

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2018年第9期48卷 1086-1092页

作者：侯贺飞刘雪威白娟宋中宝姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的一种重要病原，GP5蛋白是病毒编码的重要免疫保护蛋白。目前，虽然PRRSV抗体检测方法较多。但尚无商品化的GP5蛋白ELISA抗体检测试剂盒。本研究根据高致病性PRRSVBB0907毒株GP5基因... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的一种重要病原，GP5蛋白是病毒编码的重要免疫保护蛋白。目前，虽然PRRSV抗体检测方法较多。但尚无商品化的GP5蛋白ELISA抗体检测试剂盒。本研究根据高致病性PRRSVBB0907毒株GP5基因特性．删除了GP5基因跨膜区，并将剩余基因片段优化为大肠杆菌偏嗜性，构建了高效表达的GP5重组蛋白的原核表达载体．制备获得GP5重组蛋白。通过反应条件优化，建立了PRRSVGP5蛋白间接ELISA（GP5-ELISA）抗体检测方法，其最佳抗原包被浓度为1．0μg／mL，血清的最佳稀释度为1：100，与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、口蹄疫病毒（FMDV）、脑心肌炎病毒（EMCV）和副猪嗜血杆菌（HPS）等病原抗体均无交叉反应。相对于IDEXX公司PRRSVELISA抗体检测试剂盒，本研究建立的间接GP5-ELISA的敏感性和特异性分别为90．69％和92.86％,两种方法的符合率为91．11％。用本研究建立的间接GP5-ELISA对360份临床猪血清的PRRSV抗体进行检测，抗体阳性率为74．44％。上述结果表明，本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白间接ELISA抗体检测方法具有广阔的应用前景。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白间接ELISA

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奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药物敏感试验

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畜牧与兽医 2018年第6期50卷 105-109页

作者：阮智杨陈新孙雯 JUNG Yong-Sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院/农业部细菌学重点实验室

为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示：分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8... 详细信息

为了解2016年春夏季安徽某奶牛场奶牛乳房炎的病原菌及主要致病菌的耐药性情况,采用PCR方法对奶牛场74份乳房炎病牛奶样及30份垫料样品中分离的菌落进行鉴定。结果显示：分离得到4种致病菌,共计147株,其中大肠杆菌108株,金黄色葡萄球菌8株,乳房链球菌29株,停乳链球菌2株;药敏试验显示,青霉素、阿莫西林和庆大霉素对引起该奶牛场的4种病原菌有较好的抑制作用。

关键词：安徽地区奶牛乳房炎病原菌药敏试验

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Tubacin对蓝舌病毒感染的抑制作用

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 1902-1906页

作者：陈新曹雨薄宗义陈欢孙雯张志芳印春生钱莺娟 JUNG Yong-sam 戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲... 详细信息

蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲外的所有洲都有发现,近20年间在欧洲肆虐传播,造成了巨大的经济损失。目前发现的BTV包含26个血清型,型间没有交叉保护作用,使用传统疫苗只能提供部分保护。虽然目前已经有针对多种血清型BTV重组疫苗的研究,但保护效果并不理想。因此,研究防治BT的药物具有重要的应用价值。本研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的特异性抑制剂Tubacin能够抑制13型BTV感染,通过半定量PCR、Western blot、TCID50等试验验证,Tubacin处理后细胞病变减轻,病毒RNA和蛋白表达水平下降,上清中病毒粒子含量减少。结果证明Tubacin可在一定程度上抑制BTV感染,Tubacin是抗BTV的候选药,HDAC6可能是抗BTV感染的靶点之一。

关键词：蓝舌病 Tubacin 抗病毒

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猪圆环病毒3型LAMP检测方法的建立与应用

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1314-1319页

作者：姜辰龙严秀文张日腾李勇姜平白娟南京农业大学生命科学学院南京210095 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室南京210095

为快速诊断和检测猪圆环病毒3型(PCV3),本研究根据其ORF2基因保守序列,设计特异性引物,并通过Bst DNA聚合酶、引物最佳浓度比例、Mg^(2+)、dNTPs和甜菜碱浓度及反应条件优化,建立了环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示,59℃恒... 详细信息

为快速诊断和检测猪圆环病毒3型(PCV3),本研究根据其ORF2基因保守序列,设计特异性引物,并通过Bst DNA聚合酶、引物最佳浓度比例、Mg^(2+)、dNTPs和甜菜碱浓度及反应条件优化,建立了环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示,59℃恒温扩增36min即可出现梯形条带,且产物亦可通过SYBR GreenⅠ染色进行判断。该方法最低检测限为1.0×10~1copies·μL^(-1),与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪圆环病毒1型和2型(PCV1、PCV2)等均无交叉反应。检测68份呼吸道病猪淋巴结样品,PCV3阳性率占30.9%,与PCR检测结果符合率为95.6%(65/68)。相对传统PCR方法而言,该方法敏感特异,简便快速,可用于PCV3检测和临床诊断。

关键词：猪圆环病毒3型 RT-LAMP 检测

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猪流行性腹泻病毒CZ2014株的分离鉴定

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畜牧与兽医 2018年第9期50卷 46-50页

作者：李松玲郑素雅周红范红结蔺辉星南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室

2014年江苏某规模猪场发生腹泻疫情,采集发病仔猪小肠组织及肠内容物,经RT-PCR检测,仅猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性。将病料接种Vero细胞,盲传3代后,出现明显的细胞合胞体病变,细胞空泡化,最终裂解脱落。将细胞反复冻融后,收获病毒,经R... 详细信息

2014年江苏某规模猪场发生腹泻疫情,采集发病仔猪小肠组织及肠内容物,经RT-PCR检测,仅猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性。将病料接种Vero细胞,盲传3代后,出现明显的细胞合胞体病变,细胞空泡化,最终裂解脱落。将细胞反复冻融后,收获病毒,经RT-PCR以及间接免疫荧光（IFA）鉴定后,确认所收获的病毒为PEDV,将该分离毒株命名为CZ2014株（Gen Bank：KT428878.1）。RT-PCR扩增其S基因,序列分析结果表明,CZ2014株S基因序列与近年来流行的毒株同源性较高,而与经典疫苗毒株同源性较低。PEDV流行毒株的分离为该病毒致病机制研究及其防控奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行毒株分离

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