检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2002年第5期34卷 7-8页

作者：华荣虹张书霞白文霞张雪寒何孔旺南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

采用热抽提法提取4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白。K88、K99、F41和987p菌毛蛋白分别制成弗氏佐剂苗;K88还制成白油佐剂苗,氢氧化铝胶苗和蜂胶佐剂苗;另将4种菌毛等比例混合制成弗氏佐剂苗。分别对产蛋鸡进行免疫,用微量凝集反应和血凝抑... 详细信息

采用热抽提法提取4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白。K88、K99、F41和987p菌毛蛋白分别制成弗氏佐剂苗;K88还制成白油佐剂苗,氢氧化铝胶苗和蜂胶佐剂苗;另将4种菌毛等比例混合制成弗氏佐剂苗。分别对产蛋鸡进行免疫,用微量凝集反应和血凝抑制试验检测卵黄抗体效价。结果表明,K88菌毛较其他3种菌毛免疫性好,诱导抗体效价最高而且能长时间维持;987p菌毛能快速诱导抗体的产生,但整体效价低。K88不同佐剂苗中,铝胶佐剂能较快地诱导抗体的产生,蜂胶佐剂苗抗体持续时间短,弗氏佐剂能诱导高效价的抗体产生而且能长时间持续。

关键词：肠毒素性大肠杆菌菌毛产蛋鸡免疫性卵黄抗体

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法氏囊病病毒vp2基因在酵母中的分泌表达及鉴定

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中国病毒学 2004年第6期19卷 582-586页

作者：贾赟张素芳周斌徐学清曹瑞兵赵玉军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 沈阳农业大学畜牧兽医学院

应用 Pichia 酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒 vp2 基因片段。首先用 Primer5.0 设计 1 对引物 P1、P2,以插入 IBDV vp2 基因的 PMD18-T-VP2 载体为模板,扩增出带有终止密码子的 1.4 kb 片段,将此片段正向亚克隆到... 详细信息

应用 Pichia 酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒 vp2 基因片段。首先用 Primer5.0 设计 1 对引物 P1、P2,以插入 IBDV vp2 基因的 PMD18-T-VP2 载体为模板,扩增出带有终止密码子的 1.4 kb 片段,将此片段正向亚克隆到酵母表达载体pPICZα-A上,将构建好的重组载体pPICZα-A-VP2用SacⅠ内切酶线性化后,电击转化整合入 Pichia PastorisX-33 酵母菌,经高浓度 ZeocinTM 筛选、表型鉴定、诱导表达及表达产物的鉴定,得到高效表达 vp2 基因的酵母工程菌 X-33/ pPICZα-A-VP2。工程菌 72h 培养上清的 SDS-PAGE 电泳与免疫印迹结果显示,vp2 基因表达产物大小约为 55 kDa,比预期的 41kDa 大。凝胶薄层扫描结合 Bradford 蛋白质总含量测定结果表明,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 28%,表达量可达 23 mg/ L。间接 ELISA 结果表明重组表达产物能够有效地区分法氏囊病病毒标准阳性与阴性血清。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因片段 Pichia pastoris表达系统

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鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达及其产物纯化

鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达及其产物纯化

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：周斌齐香荣杨耀武芦银华陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

鸡胚致死孤儿病毒(CELOV)属于腺病毒科的禽腺病毒Ⅰ群中的Ⅰ型,为双股DNA病毒,无囊膜,20面体对称,基因组大小为43 804bp。该病毒能够在鸡肾细胞、鸡胚肝细胞等细胞上增殖,产生细胞变圆、折光性增强、脱落等病变。CELOV引起鸡胚的典型病... 详细信息

鸡胚致死孤儿病毒(CELOV)属于腺病毒科的禽腺病毒Ⅰ群中的Ⅰ型,为双股DNA病毒,无囊膜,20面体对称,基因组大小为43 804bp。该病毒能够在鸡肾细胞、鸡胚肝细胞等细胞上增殖,产生细胞变圆、折光性增强、脱落等病变。CELOV引起鸡胚的典型病变是胚胎死亡并随传代次数而增加,胚胎僵化,羊膜增厚,肝脏出现坏死灶或班驳样变,肾中尿酸盐沉淀。

关键词：鸡胚致死孤儿病毒五邻体原核表达抗原性家畜传染病学产物纯化

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猪细小病毒病诊断研究进展

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中国动物检疫 2005年第4期22卷 44-46页

作者：朱润芝陈溥言芦银华李宏全杨宏伟申红星郭小垒山西农业大学动物科技学院太谷030801 南京农业大学动物医学院农业部疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 中科院上海生命科学研究院上海200031

猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)是一类小DNA病毒，是引起猪繁殖障碍的主要病原之一，其危害主要表现为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等。由于被感染妊娠母猪... 详细信息

猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)是一类小DNA病毒，是引起猪繁殖障碍的主要病原之一，其危害主要表现为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等。由于被感染妊娠母猪临床症状不明显，其它猪感染后无明显临床症状。该病毒对理化因素有很强的抵抗力，广泛分布于世界各地并在大多数猪场呈地方性流行，严重地影响着养猪业的发展，该病的严重危害受到了国内外许多学者的关注，对PPV诊断方法及免疫防制的研究成为了热点之一。

关键词：猪细小病毒病 PPV 经产母猪免疫防制弱仔猪繁殖妊娠母猪感染后诊断研究阴性

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稳定表达LamR的RK13细胞系的建立及RHDV吸附能力的初步研究

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畜牧与兽医 2018年第8期50卷 44-48页

作者：黄萍宋艳华胡波魏后军范志宇仇汝龙陈萌萌薛家宾王芳 JUNG Yong-Sam 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014

为建立稳定表达层黏连蛋白受体（LamR）RK13细胞系（RK13-LamR）,并研究LamR蛋白在兔出血症病毒（RHDV）与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与... 详细信息

为建立稳定表达层黏连蛋白受体（LamR）RK13细胞系（RK13-LamR）,并研究LamR蛋白在兔出血症病毒（RHDV）与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染RK13细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达LamR蛋白的RK13细胞。通过间接免疫荧光试验（IFA）和Western blotting证明所获细胞株能够稳定表达LamR蛋白,将细胞株命名为RK13-LamR。以纯化的RHDV接种RK13-LamR细胞,IFA检测结果显示,LamR蛋白能促进RHDV对RK13细胞的吸附。本研究建立了RHDV相对敏感的细胞株,证实在RHDV吸附宿主细胞的过程中,LamR蛋白起到一定的作用。

关键词：慢病毒载体 Lam R RK13细胞兔出血症病毒

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一株鸭流感病毒(H5N1)生物学与免疫学特性研究

一株鸭流感病毒(H5N1)生物学与免疫学特性研究

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：许家荣李玉峰郑明球姜平南京农业大学动物医学院农业部诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部诊断与免疫重点开放实验室

正粘病毒科(Orthomyxoviridae)甲型流感病毒属(Influenzavirus A)甲型流感病毒(Type AInfluenza Viruses)是人、禽、猪、马、貂、海豹、鲸的病原。其中,感染禽类的流感病毒又被称“禽流感病毒”(Avian Influenza Viruses,AIV)。根据流... 详细信息

正粘病毒科(Orthomyxoviridae)甲型流感病毒属(Influenzavirus A)甲型流感病毒(Type AInfluenza Viruses)是人、禽、猪、马、貂、海豹、鲸的病原。其中,感染禽类的流感病毒又被称“禽流感病毒”(Avian Influenza Viruses,AIV)。根据流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)两个最重要的分类指标,甲型流感病毒可分为15个HA型和9个NA型。所有15个HA和9个NA组合的亚型(subtype)都在鸟类发现,因而,鸟类被认为是甲型流感病毒的自然宿主

关键词：尿囊液母源抗体鸭流感平均死亡时间免疫学特性禽流感病毒绒毛尿囊膜灭活疫苗尿囊腔接种最小致死量生物学

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类圆环病毒因子P1感染对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白mRNA转录的影响

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华北农学报 2010年第B08期25卷 7-11页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利俞正玉茅爱华倪艳秀张雪寒周俊明吕立新李彬王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的... 详细信息

为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,PKR mRNA转录在接种后8 d和40 d呈上调趋势;而2'-5'OAS2 mRNA在3 d和17 d下调,Mx1 mRNA也在接种后17 d下调;RNaseL mRNA转录水平则没有发生明显变化。研究揭示P1感染猪后,机体的抗病毒蛋白的功能受到了不同程度的影响。

关键词： P1 外周血单个核细胞抗病毒蛋白

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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测类猪圆环病毒因子P1

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华北农学报 2009年第4期24卷 31-35页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利周俊明钟书霖江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;... 详细信息

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段属于P1,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1的反应在101-108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1载量的方法,为P1致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。

关键词：类猪圆环病毒因子 P1 荧光定量PCR 熔解曲线检测

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2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

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畜牧与兽医 2005年第7期37卷 3-5页

作者：王继春何孔旺陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

检测了4株猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2, SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, SEZ)对猪、兔的致病性.SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏,前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+,后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株,作为对照,其毒力因子的表现型为MRP+EF·SLY+;SEZ-CY和SEZ-CN株均分离自发病猪并经鉴定.SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2～3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108 cfu;对兔(2～3只/组)的最小致死量分别为100～1 000、1 000、 100和105 cfu;SS2-D株108 cfu对猪不致死,对兔的最小致死量为108 cfu,而SS2-006444对猪、兔无致病性.显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致,可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2～4只/组),并致死,SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10 min即可检出细菌,此后2～4 h为无菌血症阶段,之后重新出现.

关键词：猪链球菌2型马链球菌兽疫亚种动物致病性毒力因子

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共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1129-1132页

作者：苏春霞段相国曹瑞兵郑洁陈溥言宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学检验学院临床免疫学检验系宁夏银川750004 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行... 详细信息

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。

关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒 VP1基因干扰素-α

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