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第四届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

随机抽取某规模猪场70头不同日龄阶段的猪血清样品，经中和抗体试验验证后，再使用4种商品化试剂盒进行猪瘟抗体检测，通过中和抗体试验和4种试剂盒之间阳性率和符合度的比较分析，希望了解各种试剂盒的敏感性和特异性，明确各种试剂盒... 详细信息

随机抽取某规模猪场70头不同日龄阶段的猪血清样品，经中和抗体试验验证后，再使用4种商品化试剂盒进行猪瘟抗体检测，通过中和抗体试验和4种试剂盒之间阳性率和符合度的比较分析，希望了解各种试剂盒的敏感性和特异性，明确各种试剂盒的应用范畴。并根据不同的生产情况，有针对性地选择试剂盒，进行临床猪血清样品的检测与监测。

关键词：猪瘟病毒抗体 ELISA试剂盒结果符合率

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2009～2010年华东部分地区猪圆环病毒病血清学调查

2009～2010年华东部分地区猪圆环病毒病血清学调查

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第四届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：赵津周斌张小敏庞然何丹妮陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

为了了解华东地区近两年来猪圆环病毒的流行情况，以便更好的控制猪圆环病毒病。应用韩国JBT(PCV2-ELISA)试剂盒对2009年1月～2010年9月送检的华东(包括河南)5个省(直辖市)的55个规模化猪场(均未免疫商品化猪圆环病毒疫苗)的826份猪血... 详细信息

为了了解华东地区近两年来猪圆环病毒的流行情况，以便更好的控制猪圆环病毒病。应用韩国JBT(PCV2-ELISA)试剂盒对2009年1月～2010年9月送检的华东(包括河南)5个省(直辖市)的55个规模化猪场(均未免疫商品化猪圆环病毒疫苗)的826份猪血清样品进行PCV2抗体水平检测。结果显示：送检血清中阳性数为507份，阳性率占61.38％;2009和2010年送检样品的阳性率分别为35.33％和80.63％，表明圆环病毒血清抗体阳性率逐年呈现明显上升趋势;对不同生长阶段的猪群检测结果分析表明，圆环病毒抗体阳性率随猪龄的增长而升高，且不同生长阶段猪群圆环病毒抗体抗体阳性率有明显差异。

关键词：猪圆环病毒病血清学调查抗体水平 ELISA方法

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PRRS抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

PRRS抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会

作者：夏向荣黄灿平姜平王先炜李玉峰南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室(南京卫岗)

本研究利用大肠杆菌表达的重组N蛋白作为包被抗原,以本室研制的高特异性兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立了间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体,同时优化反应条件,为最终形成诊断试剂盒提供可能.

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒核衣壳蛋白 PRRS抗体 ELISA检测方法

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检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：周斌沈婷张丽颖陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

本试验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株(SA14-14-2)作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA 方法。应用该方法对江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集的1089份血样进行JEV血清流行... 详细信息

本试验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株(SA14-14-2)作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA 方法。应用该方法对江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集的1089份血样进行JEV血清流行病学调查，检测结果表明华东地区JEV抗体阳性率为68.2％，其中种猪和商品猪抗体阳性率分别为82.1％和62.6％。随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较分析,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92％和96.4％，两种方法的符合率为95.6％。又与JEVNS1蛋白包被建立的ELISA比较，两者的符合率为97.7％。结果显示本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，适于大规模猪场进行JEV血清流行病学调查。

关键词：猪乙型脑炎病毒间接ELISA法血清流行病学调查弱毒疫苗株诊断抗原检测技术

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猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：倪莅文刘珂夏叶罗丽双刘晓东桂红兵庞然周斌陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件，结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上，大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化，Western-b... 详细信息

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件，结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上，大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化，Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性。将融合蛋白与福氏佐剂制成亚单位疫苗后免疫试验小鼠，并与E2 A/D蛋白、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)进行免疫效果比较，结果显示E2 A/D-GM-CSF亚单位疫苗免疫小鼠后能够产生抗猪瘟抗体，并且抗体水平明显高于E2-A/D免疫组和HCLV免疫组。研究表明GM-CSF经融合表达后对E2-A/D蛋白有显著的免疫增强作用。

关键词：猪瘟病毒 E2基因集落刺激因子融合表达免疫增强弱毒疫苗

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江苏1例猪增生性肠炎的PCR鉴定和16S rRNA序列的克隆分析

江苏1例猪增生性肠炎的PCR鉴定和16S rRNA序列的克隆分析

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：周斌吴龙成康乐黄艺珠魏建超陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森... 详细信息

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森氏菌，命名为江苏株(JSAV-1株)。将其16S rRNA基因克隆到pMD-18 T载体上并进行测序鉴定。应用DNAstar序列分析软件对分离株的16S rRNA基因和其推导氨基酸序列与GenBank中的公布的胞内劳森氏菌的16S rRNA进行序列比对，确定JSAR-1株与GenBank上已公布的胞内劳森氏菌序列同源性为98.9％。结果表明本PCR方法特异性好，为实验室鉴定胞内劳森氏菌提供了一种简单、容易操作的手段。

关键词：猪增生性肠炎胞内劳森氏菌 16S rRNA基因序列分析特异性引物 PCR测序分离鉴定

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猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：吉利伟蔡伟刚刘民星杨秋实孔建涛范红结南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pE... 详细信息

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pET-32a表达载体中;重组质粒转化至原核系统大肠杆菌B21中，经诱导表达目的蛋白后，利用小鼠进行免疫效果的测定和佐剂筛选，结果使用ISA206佐剂的溶血素(Hly)蛋白亚单位疫苗保护率高。

关键词：猪链球菌2型溶血素蛋白亚单位疫苗免疫效果特异性引物

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H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制

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江苏农业学报 2018年第2期34卷 368-373页

作者：刘青涛李银刘娜杨婧韩凯凯刘宇卓赵冬敏黄欣梅田宇杰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;... 详细信息

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P<0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P<0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒鸡免疫抑制

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验

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中国兽医杂志 2019年第7期55卷 30-33,I0003,I0004页

作者：范志宇王芳胡波魏后军薛家宾姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试... 详细信息

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗效力检验免疫期

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2009～2010年华东地区猪圆环病毒2型的基因型分析

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1037-1042页

作者：王小敏张文文何孔旺茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应... 详细信息

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应用DNAStar软件对获得的10株PCV全长基因和GenBank中的参考毒株进行序列分析和系统进化树分析。结果表明210份病料中107份为PCV2阳性,36份为PCV2a基因型,97份为PCV2b基因型,检出率分别为17.1%和46.2%,两个基因型的共感染率为12.4%。10株分离株的序列分析结果表明,华东地区PCV2流行毒株之间的核苷酸同源性为96.3%～99.9%,与GenBank其他PCV2参考毒株的同源性为95.0%～99.9%。系统进化树分析表明中国华东地区PCV2存在3种基因型:PCV2a、PCV2b和PCV2c。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) 序列分析基因型华东地区

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