检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2011年第2期27卷 70-74页

作者：顾真庆冯志新王占伟刘茂军王海燕白昀邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 南京天邦生物科技有限公司南京211102

聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是一种能够检测DNA突变的分子生物学分析技术,具有快速、简便、灵敏与适于大样本筛选的特点,近年来被广泛应用于生命科学领域的研究。对PCR-SSCP技术在微生物检测研究领域的应用和发展作简要的... 详细信息

聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是一种能够检测DNA突变的分子生物学分析技术,具有快速、简便、灵敏与适于大样本筛选的特点,近年来被广泛应用于生命科学领域的研究。对PCR-SSCP技术在微生物检测研究领域的应用和发展作简要的介绍。

关键词： PCR-SSCP 微生物检测

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猪圆环病毒病流行动态与防制研究进展

猪圆环病毒病流行动态与防制研究进展

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第二届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：姜平南京农业大学动物医学院，农业部动物疫病诊断与免疫重点开发实验室，江苏　南京　210095

猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒2型引起的猪的一种新的传染病，其临床表现多种多样，主要特征为体质下降、生长发育不良、消瘦、贫血、黄胆、呼吸困难、渗出性皮炎、腹泻、母猪繁殖障碍。本文介绍了猪圆环病毒病的国内外流行动态、... 详细信息

猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒2型引起的猪的一种新的传染病，其临床表现多种多样，主要特征为体质下降、生长发育不良、消瘦、贫血、黄胆、呼吸困难、渗出性皮炎、腹泻、母猪繁殖障碍。本文介绍了猪圆环病毒病的国内外流行动态、病原特性、诊断和预防措施。

关键词：猪圆环病毒病流行动态病原特性预防措施

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鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2014年第2期22卷 58-64页

作者：侯湾湾韩先干王少辉王小兰岳嘉蘋曹守林范红结于圣青南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛... 详细信息

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后制备小鼠腹水单克隆抗体。共获得2株稳定分泌鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G2B6和1G2F10。2株单克隆抗体均为IgG1亚类。腹水单克隆抗体ELISA效价达到1:102 400。Western blot检测结果表明2株单克隆抗体均能与鸭疫里默氏杆菌血清1、2和10型菌株发生特异性结合,而与禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌和禽巴氏杆菌菌株无反应性。本研究成功制备了稳定性好、特异性强的鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体,为进一步研制基于抗体检测鸭疫里默氏杆菌抗原的试剂盒奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌 GroEL蛋白单克隆抗体

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兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立

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江苏农业学报 2010年第1期26卷 120-125页

作者：熊富强王芳恽时锋林焱范志宇胡波赵宁江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京军区南京总医院比较医学科江苏南京210002 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴... 详细信息

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。

关键词：支气管败血波氏杆菌免疫血清单克隆抗体双夹心ELISA

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引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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中国兽医科学 2010年第2期40卷 130-134页

作者：曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京军区军事医学研究所江苏南京210002

将从安徽省传染性腔上囊病(IBD)免疫失败的病鸡腔上囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了原核表达质粒pGEX-VP2,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,结果呈阳性反应;SDS-PAG... 详细信息

将从安徽省传染性腔上囊病(IBD)免疫失败的病鸡腔上囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了原核表达质粒pGEX-VP2,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,结果呈阳性反应;SDS-PAGE分析结果显示,重组VP2融合蛋白的分子质量为68ku,表达量约占菌体总蛋白量的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;Western-blotting结果显示,重组VP2蛋白与IBDV抗体发生反应,形成一条特异性蛋白带,表明获得的重组蛋白具有良好的抗原反应性。

关键词：传染性腔上囊病病毒 VP2基因原核表达

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5株乳酸菌的分离鉴定与生物学特性研究

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江苏农业科学 2011年第1期39卷 390-392页

作者：王晓丽王永山诸玉梅朱小翠刘小娟周宇王冉江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏南京210014

从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究。结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为粪肠球菌,RFT、RST为屎肠球菌。... 详细信息

从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究。结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为粪肠球菌,RFT、RST为屎肠球菌。其中RS菌株具有较好的耐酸性、一定的胆盐耐受力,对温度敏感;RB、RFT、RST、RO菌株对模拟肠液具有较强的耐受力,45~55℃处理30 min不影响其生长;5个菌株对大肠杆菌O157和沙门氏菌的抑菌率均达到98%~100%,可作为优良的益生菌候选菌。

关键词：乳酸菌分离鉴定生物学特性

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传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合基因的构建及其表达产物分析

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 879-883页

作者：刘小娟王永山欧阳伟张海彬王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京军区军事医学研究所江苏南京210002

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)... 详细信息

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将编码IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达重组质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。经SDS-PAGE分析,重组嵌合体蛋白的分子量约29 ku,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;Western blot结果表明,重组嵌合体蛋白可与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带;重组嵌合体蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约100 nm～120 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到1∶200。本实验成功构建了5epis与HBcAg嵌合体基因,并在大肠杆菌中高效表达,具有IBDV抗原反应性的重组病毒样颗粒嵌合体蛋白,为研究其表位型基因工程疫苗提供了新途径。

关键词：传染性法氏囊病病毒抗原表位乙肝病毒核心抗原(HBcAg) 嵌合体

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类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

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华北农学报 2011年第3期26卷 32-36页

作者：温立斌何孔旺杨汉春刘梦雅江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院北京100094 香港中文大学中国香港

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对... 详细信息

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。

关键词：类猪圆环病毒因子肺泡巨噬细胞抗原加工和递呈相关分子共刺激分子实时定量PCR

来源：评论

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检测K88^+肠毒素性大肠杆菌PCR方法的建立

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畜牧与兽医 2002年第12期34卷 7-9页

作者：陆桂平华荣虹张书霞何孔旺江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠... 详细信息

以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠伤寒沙门氏杆菌 ,链球菌 ,金黄色葡萄球菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该检测方法的敏感度可达 1 0个细菌。用此方法对 1 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,结果有 2株阳性 ;与血清学检测的结果一致。结果表明此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床K88+

关键词：肠毒素性大肠杆菌 K88菌毛基因 PCR 检测方法腹泻

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鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达及其产物纯化

鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达及其产物纯化

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会

作者：周斌齐香荣杨耀武芦银华陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室(南京) 沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系(沈阳)

本文将鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达,通过Ⅲa蛋白检测动物机体内的抗体水平和感染率,以便进行CELOV流行病学调查.

关键词：鸡胚致死孤儿病毒 Ⅲa蛋白原核表达克隆

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