检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第2期33卷 32-38页

作者：贾赟张素芳周斌王旭东王川庆赵玉军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室河南农业大学牧医学院沈阳农业大学畜牧兽医学院

　用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)地方分离株HN01,经处理后接种SPF鸡,36h后接种鸡开始发病,发病率为100%,死亡率为70%以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化,如肌肉、腺胃、心脏出血,法氏囊水肿且多呈"... 详细信息

　用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)地方分离株HN01,经处理后接种SPF鸡,36h后接种鸡开始发病,发病率为100%,死亡率为70%以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化,如肌肉、腺胃、心脏出血,法氏囊水肿且多呈"紫葡萄"样外观。经血清学试验、毒力试验、鸡胚接种试验、分子生物学和电镜形态学观察均证明该分离物为超强毒株,从而证明河南省鸡群中存在不同于IBDV一般强毒株、经典株和变异株的超强毒株。通过对IBDV不同毒株VP2基因高变区氨基酸序列的聚类分析发现,HN01与华南超强毒株G9201、欧洲超强毒株UK661关系最接近,而与HK46,OKYM,D6948,UPM92-04和KS等毒株关系依次渐远。

关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株分离鉴定 VP2 序列分析系统进化树

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犬白细胞介素2在毕赤酵母中的诱导表达及生物活性的测定

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农业生物技术学报 2007年第4期15卷 574-578页

作者：朱骞张汇东葛菲菲缪勤曹瑞兵陈溥言徐汉坤公安部南京警犬研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达... 详细信息

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达载体pPICZaA-CaIL-2,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)X-33。PCR方法筛选重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达上清中有大小约20kD的目的条带,比实际分子量略大,推测蛋白可能发生糖基化。MTT法测定生物学活性结果表明,重组犬IL-2能够极显著地促进犬外周血淋巴细胞增殖。证明酵母表达的犬重组IL-2具有良好的生物学活性。

关键词：犬 IL-2基因毕赤酵母诱导表达生物学活性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

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生物工程学报 2008年第9期24卷 1573-1581页

作者：李祥健张建武吕健余丹丹姚火春袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区... 详细信息

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征高致病性猪蓝耳病感染性克隆嵌合病毒候选疫苗

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志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1227-1233页

作者：苏良科严亚贤陆承平上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min... 详细信息

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。

关键词：大肠杆菌O157:H7 Stx2噬菌体 ΦMin27(△stx∷cat) 感染特性

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Stx2噬菌体溶原对大肠杆菌运动性及其相关基因表达的影响

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微生物学报 2014年第7期54卷 737-745页

作者：曹冬梅吉文汇严亚贤王恒安孙建和陆承平上海交通大学农业与生物学院、上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院、农业部动物疫病诊断与免疫开放重点实验室江苏南京210095

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD... 详细信息

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD及MG1655△fliE,并将flhDC片段、fliA片段、fliD片段和fliE片段连接pUC18后分别转化相应的突变株,得到相应的互补菌株。通过Stx2噬菌体ΦMin27的感染获得各缺失株的溶原株MG1655△flhDCФMin27、MG1655△fliAФMin27、MG1655△fliDФMin27及MG1655△fliEФMin27。随后测定了野生株、缺失株、互补株和溶原株的运动能力,并通过荧光定量PCR分析了flhDC缺失前后野生株和溶原株其他运动相关基因表达量的变化。【结果】Stx2噬菌体ФMin27溶原感染可促进MG1655的fliA和fliD基因的表达,增强宿主菌MG1655的运动特性;MG1655在flhDC基因缺失的状态下,fliA和fliD基因的表达同步出现上调,但运动性未发生变化,而MG1655△flhDC溶原菌丧失了运动特性,基因转录水平检测发现MG1655△flhDCФMin27与MG1655△flhDC相比,fliA和fliD基因的表达同步出现显著下调,而对fliE基因的表达几乎没有影响。fliA、fliD和fliE单个基因的缺失对大肠杆菌MG1655和Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的运动性几乎没有影响。【结论】提示fliA和fliD基因共同参与了鞭毛运动的调控,flhDC基因可影响噬菌体溶原菌株的运动性,为进一步研究噬菌体溶原与宿主基因之间的相互调节作用提供理论依据。

关键词：大肠杆菌 Stx2噬菌体溶原菌 flhDC 运动性

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细菌DNA可显著增强豚鼠接种猪链球菌溶血素的免疫效果

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中国免疫学杂志 2004年第7期20卷 477-479,497页

作者：唐泰山郭爱珍陆承平许冬青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 南京中医药大学基础医学院南京210029

目的 :研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果。方法 :用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合 ,免疫 10日龄豚鼠 ,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态。结... 详细信息

目的 :研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果。方法 :用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合 ,免疫 10日龄豚鼠 ,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态。结果 :经组间单因素相关性分析 ,大肠杆菌DNA、合成CpG ODN和弗氏佐剂均能明显地增强豚鼠特异的体液免疫与细胞免疫 ,其中 ,所用大肠杆菌DNA的刺激溶血抑制抗体的活性与合成CpG ODN相当 (P >0 0 5 ) ,脾淋巴细胞刺激活性与弗氏佐剂相当 (P >0 0 5 )。结论 :所提取的大肠杆菌DNA具有强烈的免疫刺激作用。

关键词：细菌DNA 免疫增强猪链球菌溶血素豚鼠

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检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立

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中国人兽共患病杂志 2001年第4期17卷 57-59页

作者：倪艳秀何孔旺王继春何家惠还红华陆承平姚火春江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院

根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏... 详细信息

根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎霉形体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,7株呈EF阳性 ,1株呈EF 阳性 ,1株呈EF阴性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果 1份为阳性。实验结果表明此法特异性和敏感性均很高。

关键词：猪链球菌2型胞外因子 PCR

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检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2001年第1期23卷 20-22页

作者：倪艳秀何孔旺王继春何家惠还红华陆承平姚火春江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院

根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试... 详细信息

根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株从病猪体内分离的猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,8株呈阳性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可作为MRP快速诊断和流行病学调查的手段。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白 PCR 检测方法

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疫苗制造新技术

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中国家禽 2002年第5期24卷 1-5页

作者：姜平丁铲南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省家禽科学研究所

传统疫苗是用于传染性疾病的,但新技术已将其扩展到非传染性疾病疫苗、治疗性疫苗和生理调控疫苗。本文将使您对各种不同类型的疫苗的主要制造技术、关键问题及其免疫目的有一个全面的了解。

关键词：疫苗制造技术免疫学技术主动性疫苗被动性疫苗活疫苗死疫苗 DNA疫苗

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猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第11期20卷 943-946页

作者：徐淑菲何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)胞外蛋白因子(extracellularfactorprotein,EF)的基因(epf)序列,设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-H的基因组为模板,扩增epf基因1585-2547位序列,进行T/A克隆,转化入宿主菌DH5α中。提取阳性克隆质粒进行双酶切并纯化,将目的片段向克隆到表达载体pET-32a中组氨酸的下游,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导可表达分子量约为53000的融合蛋白。免疫转印分析表明,该融合蛋白具有EF的抗原表位。

关键词：猪链球菌2型毒力因子克隆表达

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