检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2006年第3期29卷 83-87页

作者：殷国庆唐家琪陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室南京军事医学科学院江苏南京210002

在脑膜炎奈瑟球菌(NM)菌血症家兔模型中,用细胞组织化学法观察5%碳酸氢钠溶液对心肌细胞器变性的影响。24只家兔均分为对照组、NM组、碳酸氢钠组(Sb组)、高渗盐水组(Hs组)。其中NM组、Sb组、Hs组动物分别静脉注射1.0×***-1的NM;对... 详细信息

在脑膜炎奈瑟球菌(NM)菌血症家兔模型中,用细胞组织化学法观察5%碳酸氢钠溶液对心肌细胞器变性的影响。24只家兔均分为对照组、NM组、碳酸氢钠组(Sb组)、高渗盐水组(Hs组)。其中NM组、Sb组、Hs组动物分别静脉注射1.0×***-1的NM;对照组动物静注生理盐水1 ***-1。60 m in后,所有动物都静脉注射等量液体(3.3 ***-1):对照组、NM组为生理盐水,Sb组为5%碳酸氢钠,Hs组为3.5%氯化钠。NM攻击120 m in后处死动物,观察心肌细胞超微结构,检测碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活性变化。结果显示:菌体攻击引起心肌形态学改变,心肌内碱性磷酸酶分布异常,溶酶体增多;注射碳酸氢钠加重心肌损伤,表现为溶酶体损伤,膜细胞器变性。提示:对NM感染性休克的家兔用5%碳酸氢钠治疗,会加重心肌细胞细胞器变性。

关键词：家兔败血症碳酸氢钠脑膜炎奈瑟菌心肌细胞酸性磷酸酶碱性磷酸酶细胞组化染色

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海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响

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畜牧与兽医 2009年第10期41卷 66-69页

作者：吴鹏王珏周斌曹瑞斌顾金燕张羽陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 安徽科技学院安徽凤阳233100

研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染... 详细信息

研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染色，显微观察并摄影。结果：7日龄和42日龄试验组的胸腺指数高于同日龄的对照组，差异极显著（P〈0．01）；7日龄试验组腔上囊的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）；35日龄试验组脾脏的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）。1～6周龄试验组中，胸腺、腔上囊和脾脏的组织结构也有不同程度的变化。其中脾的组织结构变化比较明显．尤其是脾小体变化甚为明显。试验表明：添加海生素能部分增加肉鸡免疫器官指数，促进免疫器官发育。

关键词：海生素从肉鸡免疫器官组织结构

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重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用

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微生物学报 2006年第1期46卷 115-119页

作者：蔡梅红张素芳曹瑞兵郭伟玲陈溥言江苏大学生物与环境工程学院镇江212013 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院南京210095 山东潍坊华辰科技有限公司潍坊261061

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插... 详细信息

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上，得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ，经Bstx Ⅰ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中，通过PCR的方法来筛选重组酵母菌，在甲醇诱导表达后，SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验（微量病变抑制实验）和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。

关键词：鸡γ干扰素分泌表达临床应用

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我国部分地区新城疫病毒的流行现状分析

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兽医大学学报 2003年第3期23卷 218-221页

作者：刘华雷王永坤严维巍朱国强陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 ... 详细信息

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 9株 NDV的遗传进化树 ,分析其毒株间的遗传进化关系。序列分析表明 ,所扩增的目的片段长度为 5 35 bp,所分离的毒株在分裂位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R- R- Q/ R- K/ R- R- F1 1 7,均相当于 NDV的强毒株。通过遗传进化树分析表明 ,1 6株分离株中有 1 3株为基因型 NDV,说明目前基因型 NDV所引起的新城疫在国内呈流行趋势。

关键词：新城疫病毒流行现状 RT-PCR 基因

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家蝇防御素抗菌肽Des-hf突变体的抑菌活性

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农业生物技术学报 2008年第1期16卷 85-89页

作者：李鹏仇妍虹李腩郑其升曹瑞兵周斌张秋伟陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室河北农业大学动物科技学院山西农业大学动科院

采用PCR定点突变技术,将家蝇(Musca domestica)防御素抗菌肽成熟肽段的基因(des-hf)第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精氨酸(R),构成第一个突变体des-hf-MU1;采用同样的方法在des-hf基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K)... 详细信息

采用PCR定点突变技术,将家蝇(Musca domestica)防御素抗菌肽成熟肽段的基因(des-hf)第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精氨酸(R),构成第一个突变体des-hf-MU1;采用同样的方法在des-hf基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K),构成第2个突变体des-hf-MU2。采用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对上述2个突变体进行表达。抗菌特性表明,抗菌肽突变体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较好的抑菌活性。琼脂孔扩散法检测des-hf-MU1和des-hf-MU2的抑菌效价比des-hf分别提高了2.4和8.0倍。酸稳定性试验显示,抗菌肽突变体在pH值为5～6时活性最高,热稳定性试验显示des-hf-MU1和des-hf-MU2100℃加热10min后仍具有抑菌活性。显示了两抗菌肽突变体具有良好的应用前景。

关键词：家蝇防御素抗菌肽突变体抑菌活性防御素

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传染性腔上囊病病毒HN01超强毒株VP2基因的克隆和序列分析

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 62-66页

作者：贾赟王旭东赵玉军陈溥言沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52 70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDVVP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT PCR扩增出了1.45kb的cDNA产物,将扩... 详细信息

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52 70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDVVP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT PCR扩增出了1.45kb的cDNA产物,将扩增的IB DVHN01株VP2基因克隆于pMD18 T载体上,获得了pMD18 T VP2重组质粒。将IBDVHN01株VP2基因序列测定结果与已发表的其他IBDV毒株VP2基因序列进行分析比较,绘出系统进化树。结果表明,HN01株与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM、香港超强毒株HK46等非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。

关键词：传染性腔上囊病病毒 HN01超强毒株 VP2基因克隆序列分析

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CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 114-116页

作者：王晓泉姜平丁铲许家荣南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院家禽所江苏扬州225003

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBD... 详细信息

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

关键词：真核表达质粒 CpG寡核苷酸免疫传染性法氏囊病病毒

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鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定

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中国病毒学 2004年第1期19卷 32-35页

作者：蔡梅红曹瑞兵周斌谈国蕾杨松陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 沈阳农业大学动物医学院辽宁沈阳110161

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱... 详细信息

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱性口炎病毒进行攻毒,测出鸡重组干扰素的活性单位为1.0?06U/mL,获得了满意结果。

关键词：非融合性表达病毒抑制鸡胚成纤维细胞鸡γ干扰素成熟蛋白基因

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致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

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中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 48-55页

作者：何再平王权陈永军刘迎春韩先干王少辉白雪瑞刘永杰蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性... 详细信息

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。

关键词：副溶血弧菌种特异性基因溶血素基因多重PCR 检测

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其识别表位分析

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微生物学通报 2008年第12期35卷 1915-1919页

作者：周俊明何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4... 详细信息

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株腹水型单克隆抗体间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210和100×28。经Western-blot分析表明,4株单抗与硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白均具有特异性反应,并且通过4种IMPDH全基因分片段缺失表达的融合蛋白,分析了4株单抗所识别抗原决定簇的差异性,发现1A8、1F2、2D2识别表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627bp^790bp之间,2D12识别表位的编码基因则集中在IMPDH基因片段的411bp^790bp之间。猪链球菌2型中IMPDH单克隆抗体的获得及相应表位分析为研究IMPDH蛋白的生物学活性及免疫学活性奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 IMPDH 单克隆抗体表位

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