检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2009年第11期45卷 41-43页

作者：钟登科魏建超张训海路振香安徽科技学院动物科学学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室安徽凤阳233100 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)引起猪的以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎为特征的传染病。该病在全世界均有发生,通常见于5－8周龄的猪,发病率一般在10%－15%,严重时死亡率可达50%。近10年来此病在... 详细信息

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)引起猪的以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎为特征的传染病。该病在全世界均有发生,通常见于5－8周龄的猪,发病率一般在10%－15%,严重时死亡率可达50%。近10年来此病在规模化猪场的感染率和所致的死亡率日益增高,已为危害养猪业较严重的细菌性疾病之一。[第一段]

关键词：副猪嗜血杆菌病诊断方法实验室规模化猪场细菌性疾病纤维素性死亡率浆膜炎

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猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2009年第2期30卷 5-8页

作者：刘亚彬何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存... 详细信息

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9~798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位。4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白。免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位。

关键词：猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶结构域活性染色

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白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF2基因真核双表达质粒的构建

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南京农业大学学报 2009年第1期32卷 100-104页

作者：潘群兴何孔旺温立斌郭容利黄克和江苏省农业科学院兽医研究所／农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2... 详细信息

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因 IL-2基因 DNA疫苗

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临床堪萨斯分枝杆菌89株的鉴定和分型研究

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中华检验医学杂志 2009年第1期32卷 73-75页

作者：陈超徐鹏高谦姜平梅建南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 200095 上海市疾病预防控制中心结核病防制科复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室

分枝杆菌属内除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌（non—tuberculosis mycobacteria，NTM），其数目迄今报道已达150种以上，且有不断增加的趋势。目前的研究表明NTM是一类广泛存在的环境分枝杆菌，人可从环... 详细信息

分枝杆菌属内除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌（non—tuberculosis mycobacteria，NTM），其数目迄今报道已达150种以上，且有不断增加的趋势。目前的研究表明NTM是一类广泛存在的环境分枝杆菌，人可从环境中感染NTM而患病。我国结核病流行病学调查显示，在肺病患者标本中检出NTM的比例呈现逐年增加的趋势。

关键词：非结核分枝杆菌 tuberculosis 结核分枝杆菌复合群分型鉴定萨斯临床麻风分枝杆菌

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检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：周斌沈婷张丽颖陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

本试验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株(SA14-14-2)作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA 方法。应用该方法对江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集的1089份血样进行JEV血清流行... 详细信息

本试验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株(SA14-14-2)作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA 方法。应用该方法对江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集的1089份血样进行JEV血清流行病学调查，检测结果表明华东地区JEV抗体阳性率为68.2％，其中种猪和商品猪抗体阳性率分别为82.1％和62.6％。随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较分析,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92％和96.4％，两种方法的符合率为95.6％。又与JEVNS1蛋白包被建立的ELISA比较，两者的符合率为97.7％。结果显示本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，适于大规模猪场进行JEV血清流行病学调查。

关键词：猪乙型脑炎病毒间接ELISA法血清流行病学调查弱毒疫苗株诊断抗原检测技术

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江苏1例猪增生性肠炎的PCR鉴定和16S rRNA序列的克隆分析

江苏1例猪增生性肠炎的PCR鉴定和16S rRNA序列的克隆分析

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：周斌吴龙成康乐黄艺珠魏建超陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森... 详细信息

根据GenBank公布的引起猪增生性肠炎的胞内劳森氏菌的16S rRNA基因的序列，设计并合成一对特异性引物。应用建立的PCR方法从江苏地区疑似患有猪增生性肠炎病猪的8份血便样品中，鉴定出3份样品中存在胞内劳森氏菌。随机选取1份胞内劳森氏菌，命名为江苏株(JSAV-1株)。将其16S rRNA基因克隆到pMD-18 T载体上并进行测序鉴定。应用DNAstar序列分析软件对分离株的16S rRNA基因和其推导氨基酸序列与GenBank中的公布的胞内劳森氏菌的16S rRNA进行序列比对，确定JSAR-1株与GenBank上已公布的胞内劳森氏菌序列同源性为98.9％。结果表明本PCR方法特异性好，为实验室鉴定胞内劳森氏菌提供了一种简单、容易操作的手段。

关键词：猪增生性肠炎胞内劳森氏菌 16S rRNA基因序列分析特异性引物 PCR测序分离鉴定

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猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：倪莅文刘珂夏叶罗丽双刘晓东桂红兵庞然周斌陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件，结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上，大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化，Western-b... 详细信息

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件，结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上，大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化，Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性。将融合蛋白与福氏佐剂制成亚单位疫苗后免疫试验小鼠，并与E2 A/D蛋白、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)进行免疫效果比较，结果显示E2 A/D-GM-CSF亚单位疫苗免疫小鼠后能够产生抗猪瘟抗体，并且抗体水平明显高于E2-A/D免疫组和HCLV免疫组。研究表明GM-CSF经融合表达后对E2-A/D蛋白有显著的免疫增强作用。

关键词：猪瘟病毒 E2基因集落刺激因子融合表达免疫增强弱毒疫苗

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猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

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第三届南京农业大学畜牧兽医学术年会

作者：吉利伟蔡伟刚刘民星杨秋实孔建涛范红结南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pE... 详细信息

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列，利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列，设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板，PCR扩增后定向克隆至pET-32a表达载体中;重组质粒转化至原核系统大肠杆菌B21中，经诱导表达目的蛋白后，利用小鼠进行免疫效果的测定和佐剂筛选，结果使用ISA206佐剂的溶血素(Hly)蛋白亚单位疫苗保护率高。

关键词：猪链球菌2型溶血素蛋白亚单位疫苗免疫效果特异性引物

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 291-295页

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚... 详细信息

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3，腹水效价均为1×10^11；C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2，腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示，F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明，c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带，而其它4株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定

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江苏农业学报 2009年第3期25卷 568-571页

作者：潘群兴王永山刘洁夏兴霞何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的... 详细信息

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。

关键词：肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性

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