检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2007年第4期15卷 574-578页

作者：朱骞张汇东葛菲菲缪勤曹瑞兵陈溥言徐汉坤公安部南京警犬研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达... 详细信息

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达载体pPICZaA-CaIL-2,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)X-33。PCR方法筛选重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达上清中有大小约20kD的目的条带,比实际分子量略大,推测蛋白可能发生糖基化。MTT法测定生物学活性结果表明,重组犬IL-2能够极显著地促进犬外周血淋巴细胞增殖。证明酵母表达的犬重组IL-2具有良好的生物学活性。

关键词：犬 IL-2基因毕赤酵母诱导表达生物学活性

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重组酵母鸡α干扰素的研制及其抗病毒活性测定

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中国免疫学杂志 2007年第9期23卷 829-832页

作者：蔡梅红曹瑞兵王传友盛洁潘璐琳陈溥言江苏大学食品与生物工程学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院中国人民解放军73081部队农副业基地

目的:通过酵母真核表达系统获得鸡α干扰素,并鉴定其抗病毒生物活性。方法:以ConA刺激4～10小时后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR方法克隆出鸡α干扰素成熟蛋白基因,通过EcoRI和XbaI两个酶切位点使该基因插入酵母表达载... 详细信息

目的:通过酵母真核表达系统获得鸡α干扰素,并鉴定其抗病毒生物活性。方法:以ConA刺激4～10小时后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR方法克隆出鸡α干扰素成熟蛋白基因,通过EcoRI和XbaI两个酶切位点使该基因插入酵母表达载体(pPICZa-A),并把线性化该重组酵母鸡α干扰素载体,通过电转化使鸡α干扰素基因整和到酵母(X33)基因组上,利用微量病变抑制法测定表达的鸡α干扰素的抗病毒活性。结果:实验结果表明重组酵母鸡α干扰素活性单位为10×48U/ml,具有较好的抗病毒效果。结论:实验研究结果表明重组酵母鸡α干扰素具有较好的抗病毒能力。

关键词：鸡α干扰素分泌表达抗病毒

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整合禽冠状病毒S糖蛋白的假型鼠白血病病毒

整合禽冠状病毒S糖蛋白的假型鼠白血病病毒

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：李鹏郑其升仇妍虹曹瑞兵张秋伟陈德胜陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室山西农业大学动科院南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

假病毒是指一种反转录病毒能够整合另外一种不同种类病毒的囊膜糖蛋白,从而形成具有外源性病毒的囊膜,而基因组保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复

关键词：禽冠状病毒鼠白血病病毒假型病毒糖蛋白

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重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用

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微生物学报 2006年第1期46卷 115-119页

作者：蔡梅红张素芳曹瑞兵郭伟玲陈溥言江苏大学生物与环境工程学院镇江212013 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院南京210095 山东潍坊华辰科技有限公司潍坊261061

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插... 详细信息

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上，得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ，经Bstx Ⅰ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中，通过PCR的方法来筛选重组酵母菌，在甲醇诱导表达后，SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验（微量病变抑制实验）和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。

关键词：鸡γ干扰素分泌表达临床应用

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副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧与兽医 2006年第3期38卷 5-7页

作者：王艳夏万田柏坤桃尹秀凤姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 江苏省高邮市畜牧兽医站江苏高邮225600

采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该... 详细信息

采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。

关键词：副猪嗜血杆菌 ELISA 抗体

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串联表达PRRSV GP3、GP4与GP5重组腺病毒的构建与免疫特性研究

串联表达PRRSV GP3、GP4与GP5重组腺病毒的构建与免疫特性研究

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：蒋文明姜平李玉峰王先炜南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

利用PER扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的GV3与GP4基因,按正确的读码框与GP5基因单独或同时串联, 成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-GP3-GP5、pShuttle-CMV-GP4-GP5、pShuttle-CMV-GP3-GP4-GP5。同时构建了单个基因的穿梭载体。PCR、测序鉴... 详细信息

利用PER扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的GV3与GP4基因,按正确的读码框与GP5基因单独或同时串联, 成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-GP3-GP5、pShuttle-CMV-GP4-GP5、pShuttle-CMV-GP3-GP4-GP5。同时构建了单个基因的穿梭载体。PCR、测序鉴定正确。Pme Ⅰ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组, 产生重组腺病毒DNA。将重组腺病毒DNA经Pac Ⅰ线性化后脂质体法转染HEK-293A细胞,包装成完整的腺病毒。IFA 和Western blot可以检测到GP3、GP4、GP5单个基因的重组腺病毒以及GP3与GP5、GP4与GP5、GP3、GP4与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确的表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明三种方式串联的重组腺病毒比单基因重组腺病毒可以诱导产生更强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应)。这说明三种方式串联的重组腺病毒具有更好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础。

关键词： PRRSV GP3 GP4 GP5 重组腺病毒体液免疫细胞免疫

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抗猪SIgA单克隆抗体的研制

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 390-393页

作者：吴胜昔姜平李玉峰南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG... 详细信息

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为79.7%,第2次融合率为60.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体,初检阳性率分别为4.1%、16.8%。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实,所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,CA6分泌抗体属IgM、κ型,而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。

关键词：猪SIgA 单克隆抗体层析技术

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猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导血管内皮细胞融合

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中国农业科学 2005年第4期38卷 821-825页

作者：曾巧英陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 南京210095

猪链球菌2型(SS2)主要引起人和猪的脑膜炎,但其毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)对构成血脑屏障的微血管内皮细胞有何致病作用迄今不明。为此分离仔兔脾微血管内皮细胞(SMEC),纯化后用SV40-T 抗原转化后用作试验的细胞模型。将单层SMEC 和... 详细信息

猪链球菌2型(SS2)主要引起人和猪的脑膜炎,但其毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)对构成血脑屏障的微血管内皮细胞有何致病作用迄今不明。为此分离仔兔脾微血管内皮细胞(SMEC),纯化后用SV40-T 抗原转化后用作试验的细胞模型。将单层SMEC 和电泳纯MRP 溶液共孵育,染色后,光镜观察,发现MRP 可诱导SMEC发生两种典型形态学变化:致密细胞单层中出现巨大空洞而呈网状;空洞内有细胞融合,形成多核巨细胞,随后巨细胞核极度浓缩释出,巨细胞消失。研究结果表明, MRP 单独足以破坏大脑的血管内皮细胞屏障。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白细胞融合细胞凋亡血管内皮细胞

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乙脑E蛋白与结核杆菌HSP70的融合蛋白对BALB/c小鼠特异性免疫的影响

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微生物学报 2005年第3期45卷 441-445页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 中国预防医学科学院病毒研究所北京100052

研究酵母表达的乙脑病毒(JapaneseEncephalitisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70 (hsp70 )形成的融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹膜内注射蛋白的方法免疫小鼠,以直接免疫E蛋白主要抗原片段和以E蛋白主要... 详细信息

研究酵母表达的乙脑病毒(JapaneseEncephalitisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70 (hsp70 )形成的融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹膜内注射蛋白的方法免疫小鼠,以直接免疫E蛋白主要抗原片段和以E蛋白主要抗原片段和单独表达的hsp70两者均以5 0pmol的量进行混合后的蛋白免疫的小鼠作为对照,用半定量RT PCR检测细胞免疫因子IL 2mRNA的水平,IL 2是细胞介导的免疫反应和巨噬细胞激活中的关键分子,MTT法检测淋巴细胞的增殖情况以及通过ELISA检测抗体水平,从这3个方面来评价融合与未融合蛋白以及等量混合后的免疫效果。结果E蛋白主要抗原片段与结核杆菌hsp70重组后,mIL 2 ,淋巴细胞的增殖以及抗体水平均较重组前明显升高,因此,以乙脑E

关键词：乙脑病毒E蛋白主要抗原片段结核杆菌热休克蛋白70 mIL-2 淋巴细胞的增殖抗体水平

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乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌hsp70在毕赤酵母中的融合表达

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中国人兽共患病杂志 2005年第12期21卷 1081-1085页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武高小飞陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 中国预防医学科学院

目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,***70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZα-A... 详细信息

目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,***70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建E蛋白基因主要抗原片段与hsp70的融合表达载体,融合基因以酶切位点BamHⅠ连接,用电穿孔法转化酵母X-33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果E蛋白基因与hsp70的融合表达载体构建成功,SDS-PAGE显示,其相对分子质量为114kD,与实际大小相符,经凝胶薄层扫描分析,表达量为33mg/L,经Western印迹验证,有良好的抗原性。结论E-hsp70融合蛋白在酵母中的表达为下一步研究hsp70是否能作为E蛋白免疫时的理想佐剂作准备。

关键词：乙型脑炎E蛋白主要抗原片段结核杆菌热休克蛋白70 融合巴斯德毕赤酵母抗原性

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