检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2005年第B04期25卷 244-248页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 中国预防医学科学院北京100052

构建乙型脑炎E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosis hear shock protein70,***70)的肽连接区(Binding domain)基因融合表达载体,利用酵母表达系统,为下一步研究肽连接区是否能增强乙型脑炎E蛋白主要抗... 详细信息

构建乙型脑炎E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosis hear shock protein70,***70)的肽连接区(Binding domain)基因融合表达载体,利用酵母表达系统,为下一步研究肽连接区是否能增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性作准备。以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建,以酶切位点BamHI连接这2个基因,用电穿孔法转化酵母X-33,Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区的融合表达载体构建成功,SDS-PAGE显示,其相对分子质量为 68kDa,与实际大小相符且为分泌表达,表达量约为97mg／L,经Western印迹验证,抗原性较好。将用同样的酵母表达载体表达的乙脑E蛋白主要抗原片段(另文发表)与上述融合蛋白均以50pmol．的量分别对6-8周龄的:BALB／c小鼠进行腹膜内注射,3周后进行第二次免疫,从淋巴细胞的增殖和抗体滴度两个方面进行比较,最后得出E-BD融合蛋白在免疫效果方面比乙脑E蛋白主要抗原片段效果要好,在试验中肽连接区可以增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性。

关键词：乙脑E蛋白主要抗原片段结核杆菌hsp70肽连接区巴斯德毕赤酵母淋巴细胞的增殖

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细菌CpG DNA对鸡接种禽流感病毒H9亚型灭活苗的免疫增强作用

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中国兽医学报 2005年第2期25卷 135-138页

作者：崔义邦何孔旺陆承平郭爱珍南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室华中农业大学动物医学院病毒室湖北武汉430070

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ... 详细信息

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ,大肠杆菌牦牛株核酸作为佐剂 ,免疫接种于试验鸡 ,用 XTT法检测 T、B淋巴细胞增殖反应 ,并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示 ,在细菌核酸佐剂组 ,鸡的血凝抑制抗体水平和 T、B淋巴细胞增殖反应均显著高于抗原单独免疫组 (P<0 .0 5 ) ,而免疫组均显著高于空白组 (P<0 .0 5 ) ;细菌核酸佐剂组的抗体滴度峰值略高于白油佐剂组 (P>0 .0 5 ) ,但 T、B淋巴细胞增殖指数峰值显著高于白油佐剂组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,大肠杆菌牦牛株核酸可显著增强免疫鸡对禽流感病毒 H9亚型灭活疫苗的免疫反应。

关键词：鸡禽流感病毒H9亚型灭活苗免疫增强作用细菌核酸免疫佐剂

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猪细小病毒病、伪狂犬病、猪繁殖和呼吸综合征及疫苗的研究进展

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农村养殖技术（新兽医） 2005年第8期 32-34页

作者：许家荣陆承平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室

猪细小病毒、伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒是引起种猪病毒性繁殖障碍的主要病原，且多发生混合感染。目前，这3种疾病在我国均有流行，并已有单苗可供预防接种，该文就猪细小病毒病、伪狂犬病、猪繁殖和呼吸综合征及疫苗的研究... 详细信息

猪细小病毒、伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒是引起种猪病毒性繁殖障碍的主要病原，且多发生混合感染。目前，这3种疾病在我国均有流行，并已有单苗可供预防接种，该文就猪细小病毒病、伪狂犬病、猪繁殖和呼吸综合征及疫苗的研究进展进行综述。

关键词：猪细小病毒病伪狂犬病猪繁殖和呼吸综合征疫苗免疫工作病原症状表现

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PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

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畜牧与兽医 2005年第11期37卷 7-10页

作者：夏向荣柏庆荣柏坤桃黄灿平姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 江苏省高邮市畜牧兽医站江苏高邮225600

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测... 详细信息

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。

关键词： PRRSV 抗体诊断竞争ELISA

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兔出血症病毒中国早期流行毒株NJ85衣壳蛋白基因的分子结构特征及其表达应用

兔出血症病毒中国早期流行毒株NJ85衣壳蛋白基因的分子结构特征及...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：王永山陆承平周宗安陈兴祥薛家宾南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室

兔出血症(Rabbit Hemorrhagic Disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV)所致的兔的一种急性、败血性、高度致死性传染病。该病于1984年发现,其后在世界其它地区相继发生。迄今,国内外各养兔地区仍有存在... 详细信息

关键词：兔出血症病毒流行毒株分子结构特征抗体水平壳蛋白中国早期

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兔出血症病毒中国早期流行毒株NJ85衣壳蛋白基因的分子结构特征及其表达应用

兔出血症病毒中国早期流行毒株NJ85衣壳蛋白基因的分子结构特征及...

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：王永山陆承平周宗安陈兴祥薛家宾南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室

兔出血症(Rabbit Hemorrhagic Disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV)所致的兔的一种急性、败血性、高度致死性传染病。该病于1984年发现,其后在世界其它地区相继发生。迄今,国内外各养兔地区仍有存在...

兔出血症(Rabbit Hemorrhagic Disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV)所致的兔的一种急性、败血性、高度致死性传染病。该病于1984年发现,其后在世界其它地区相继发生。迄今,国内外各养兔地区仍有存在或流行,是养兔业的严重威胁。本研究用分子克隆技术从具有良好免疫原性的RHDV中国早期流行毒株NJ85中成功克隆病毒衣壳蛋白(VP60)全长基因,序列测定该基因长度为1740 nt,编码579 aa,并在GenBank注册(GenBank AccessionAY269825)。运用GenBank数据库、生物信息学和结构生物学方法,全面系统地分析了17年来世界各地

关键词：

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乙脑病毒E-Hsp70与E-肽连接区对小鼠特异性免疫的比较

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中国病毒学 2005年第4期20卷 357-361页

作者：葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095 中国预防医学科学院病毒病研究所北京100052

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与... 详细信息

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的融合蛋白以及该抗原肽与Hsp70上的一个功能域-肽连接区(Peptidebindingdomain,以下简称BD)融合形成的蛋白,用这三种蛋白分别免疫BALB/c小鼠,以酵母单独表达的E蛋白主要抗原片段免疫作为对照,比较它们对小鼠抗E蛋白主要抗原片段特异性的细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹腔内注射蛋白的方法免疫小鼠,主要从IL-2的mRNA水平,淋巴细胞的增殖和抗体滴度这三个方面进行比较,最后我们得出E-BD融合蛋白在免疫效果方面比E-Hsp70略好一些,所以在本试验中肽连接区是完全可以代替Hsp70独立行使其佐剂功能。

关键词：乙脑病毒E蛋白主要抗原片段结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70) 肽连接区淋巴细胞的增殖

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用单克隆抗体展示猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白在菌体表面的形态和分布

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中国农业科学 2004年第1期37卷 143-147页

作者：曾巧英陆承平兰州730070 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院

用猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1全菌免疫Balb/c小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 / 0细胞融合 ,以电泳纯溶菌酶释放蛋白 (MRP)为抗原 ,间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化 ,剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆 ,获得 3株特异针... 详细信息

用猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1全菌免疫Balb/c小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 / 0细胞融合 ,以电泳纯溶菌酶释放蛋白 (MRP)为抗原 ,间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化 ,剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆 ,获得 3株特异针对MRP的单克隆抗体细胞株 3A3、4D5和 6B4。将HA980 1和HEp 2细胞共孵育 ,使细菌粘附于细胞表面 ,用 3株MRP单克隆抗体联合介导FITC标记HA980 1菌体表面的MRP ,激光共聚焦显微观察 ,代表MRP的荧光图像显示 ,MRP是一线形表面大分子 ,一端锚定在细胞壁 ,另一端向空中伸展 ,其分布状态有单在和丛集 2种

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白单克隆抗体激光共聚焦显微术

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猪链球菌2型对扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用

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微生物学报 2004年第4期44卷 523-525页

作者：曾巧英陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院兰州730070

猪链球菌 2型 (SS2 )是重要的人畜共患病病原体 ,溶菌酶释放蛋白 (MRP)是SS2的主要毒力因子之一。用天然表达MRP的江苏分离株HA980 1和不表达MRP的上海分离株SH0 0 6 4 4 4 ,研究SS2对仔兔扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用。黏附计数结... 详细信息

猪链球菌 2型 (SS2 )是重要的人畜共患病病原体 ,溶菌酶释放蛋白 (MRP)是SS2的主要毒力因子之一。用天然表达MRP的江苏分离株HA980 1和不表达MRP的上海分离株SH0 0 6 4 4 4 ,研究SS2对仔兔扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用。黏附计数结果表明 ,HA980 1 (MRP+ )和SH0 0 6 4 4 4 (MRP- )均能对扁桃腺上皮细胞高水平黏附。扫描和透射电镜均观察到HA980 1的高水平黏附现象 ,黏附部位是细胞膜和细胞微绒毛 ,并观察到细胞膜上有链球菌正处于内化过程中。裂解记数结果表明 ,HA980 1有低度侵袭力 ,SH0 0 6 4 4 4未检测到侵袭力。结果提示 ,扁桃腺是SS2的定殖器官和感染门户 ;MRP+ 菌株黏附后直接侵入细胞内是其穿过扁桃腺上皮细胞屏障的机制之一。

关键词：细胞侵袭细胞黏附扁桃腺上皮细胞猪链球菌细菌培养

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猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达

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中国病毒学 2004年第6期19卷 636-638页

作者：任雪枫胡志华谈国蕾周斌徐学清郑其升张晓勇陈德胜陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

Using a pair of specific primers designed according to the relevant nucleotide sequences from GenBank, the main antigen domain for VP2 gene of Porcine parvovirus was ampilified with PCR method using the genomic DNA as template. The PCR product was cloned into the expression vector pIREShyg to get a recombinant eukaryotic expression plasmid pIREShyg-VP2, which was then transfected into the CHO-K1 cells. The expressed product was detected by IFA after the positive cell clone was selected with hygromycin. The result revealed that the main antigen domain for VP2 gene of porcine parvovirus was stably expressed in CHO-K1 cells.

关键词：猪细小病毒 VP2蛋白潮霉素 CHO-K1细胞

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