检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2004年第1期19卷 32-35页

作者：蔡梅红曹瑞兵周斌谈国蕾杨松陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 沈阳农业大学动物医学院辽宁沈阳110161

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱... 详细信息

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱性口炎病毒进行攻毒,测出鸡重组干扰素的活性单位为1.0?06U/mL,获得了满意结果。

关键词：非融合性表达病毒抑制鸡胚成纤维细胞鸡γ干扰素成熟蛋白基因

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CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 114-116页

作者：王晓泉姜平丁铲许家荣南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院家禽所江苏扬州225003

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBD... 详细信息

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

关键词：真核表达质粒 CpG寡核苷酸免疫传染性法氏囊病病毒

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猪流行性腹泻病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立

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中国病毒学 2004年第2期19卷 174-176页

作者：张素芳贾赟王敏秀倪艳秀何孔旺陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 沈阳农业大学动物医学院辽宁沈阳110161 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

Two pairs of primers were designed according to the N gene sequence of PEDV-CV777 strain in Genebank (No. AF353511). PCR amplification product of outer-primers was 1328bp, and the inter-primers amplification product was 538bp. With the primers, a nested PCR assay was established to detect PEDV. This method was sensitive and specific and could be used in PEDV diagnosis and epidemiological investigation.

关键词：猪流行性腹泻病毒嵌套式RT-PCR检测方法 PED 诊断方法分子生物学技术

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警惕非典型猪瘟的危害

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今日养猪业 2004年第1期 33-34页

作者：周斌吴增坚南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 210095 南京农业大学动物医学院 210095

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原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果

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中国农业科学 2004年第11期37卷 1677-1681页

作者：王永山陆承平周宗安薛家宾华东医学生物技术研究所南京210002 南京210014 南京210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室江苏省农业科学院兽医研究所南京210095华东医学生物技术研究所

为了检验大肠杆菌表达的兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)对兔的免疫保护效果,将34只清洁兔随机分成3组:单用免疫佐剂对照组(8只)、单用重组VP60组(8只)和重组VP60加免疫佐剂组(18只),分别经皮下注射,VP60的免疫剂量为每只每次400μg,... 详细信息

为了检验大肠杆菌表达的兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)对兔的免疫保护效果,将34只清洁兔随机分成3组:单用免疫佐剂对照组(8只)、单用重组VP60组(8只)和重组VP60加免疫佐剂组(18只),分别经皮下注射,VP60的免疫剂量为每只每次400μg,免疫2次,间隔7d。在第2次免疫7d后,VP60加免疫佐剂组的兔血清抗体水平显著高于单用VP60免疫组(ELISA1∶64000对比1∶4000/HI1∶128对比1∶16),表明免疫佐剂可明显加速重组VP60诱导抗体产生的进程,用RHDVNJ85强毒攻击,免疫佐剂对照组与单用VP60免疫组的实验兔均全部死亡(8/8和8/8),VP60加免疫佐剂组均全部存活,保护率为100%(18/18)。用RHDV血凝试验(HA)检测,死亡兔的肝脏组织液HA效价大于1∶512,而存活兔的肝脏组织液HA效价小于1∶2,肝脏组织触(涂)片检查和细菌培养均为阴性,证明病死兔系RHDV感染所致。用RHD重组亚单位疫苗在养兔场进行800只兔的田间免疫试验,安全有效,没有出现不良反应。对重组菌进行冻存、复苏、培养、诱导表达和质粒酶切分析,证明VP60基因在宿主菌内保持稳定。

关键词：兔出血症病毒重组衣壳蛋白(VP60) 免疫试验

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北方猪病流行与防制概览警惕非典型猪瘟的危害

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北方牧业 2004年第17期 13-13页

作者：周斌吴增竖南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

猪瘟是一种早已被人们熟知的疾病，由于是对猪的危害大，国际兽疫局将本病列入A类传染病，属国际重要的检疫对象。我国科学家于1954年已成功地研制出猪瘟兔化弱毒疫苗，并在世界上许多国家得到了广泛的应用，为控制和消灭猪瘟作出了巨... 详细信息

猪瘟是一种早已被人们熟知的疾病，由于是对猪的危害大，国际兽疫局将本病列入A类传染病，属国际重要的检疫对象。我国科学家于1954年已成功地研制出猪瘟兔化弱毒疫苗，并在世界上许多国家得到了广泛的应用，为控制和消灭猪瘟作出了巨大的贡献。

关键词：非典型猪瘟危害流行特点症状诊断病因防制

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上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染

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中国兽医学报 2003年第5期23卷 442-444页

作者：李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室江苏南京210095

上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪... 详细信息

上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪圆环病毒 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )部分基因的特异性 PCR引物 ,通过 RT- PCR和 PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出 PRRSV和 PCV- 2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查 ,证实上海地区出现PRRSV和 PCV-

关键词：上海地区猪繁殖呼吸综合征病毒 2型猪圆环病毒混合感染 RT-PCR PCR 症状流行病学

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Resp株单克隆抗体的研制

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畜牧与兽医 2003年第2期35卷 1-3页

作者：吴家强姜平蔡宝祥陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

利用Marc1 4 5细胞增殖和凝胶层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征 (PRRSV)Resp株 ,建立了酶联免疫吸附试验 (ELISA)单克隆抗体筛选技术。在猪肺泡巨噬细胞 (PAM)上增殖、浓缩、纯化PRRSV并免疫Balb/c小鼠 ,用PEG - 1 50 0进行细胞融合。结果... 详细信息

利用Marc1 4 5细胞增殖和凝胶层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征 (PRRSV)Resp株 ,建立了酶联免疫吸附试验 (ELISA)单克隆抗体筛选技术。在猪肺泡巨噬细胞 (PAM)上增殖、浓缩、纯化PRRSV并免疫Balb/c小鼠 ,用PEG - 1 50 0进行细胞融合。结果表明 ,细胞融合率为 70 6 % ,初检PRRSV抗体阳性率为 6 3 %。经 2次亚克隆获得了 2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其单抗间接荧光抗体试验 (IFA)可用于检测细胞培养物中的PRRSV抗原。

关键词： Resp株研制 PRRSV ELISA IFA 单克隆抗体猪繁殖呼吸综合征病毒间接荧光抗体试验

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流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

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中国人兽共患病杂志 2003年第5期19卷 31-35页

作者：杨耀武齐香荣陈德胜何孔旺陈溥言沈国顺南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095 江苏省农业科学院畜牧兽医研究所沈阳农业大学畜牧兽医学院动物医学系

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并... 详细信息

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 SA14-14-2株 E蛋白基因表达原核细胞抗原性基因克隆

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PRRS抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

PRRS抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：夏向荣黄灿平姜平王先炜李玉峰南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前危害养猪业的重要病原之一。由于PRRS尚无有效的治疗方法,主要依靠综合性防治,因此,及时确诊该病具有重要的理论与实践意义。PRRSV不同株存在抗原性差异,而其核衣壳蛋白(N蛋白)在大多分离株中具有... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前危害养猪业的重要病原之一。由于PRRS尚无有效的治疗方法,主要依靠综合性防治,因此,及时确诊该病具有重要的理论与实践意义。PRRSV不同株存在抗原性差异,而其核衣壳蛋白(N蛋白)在大多分离株中具有共同的抗原决定簇,猪感染PRRSV后

关键词：猪伪狂犬病 ELISA 酶标二抗家畜传染病学猪大肠杆菌病标准化研究检测方法

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