检索结果-内蒙古大学图书馆

Genetic Variation of the ORF5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus in East China during 2008-2010

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Agricultural Science & Technology 2012年第6期13卷 1234-1239,1276页

作者：王小敏何孔旺张文文陈蔚茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒吕立新郭容利周俊明李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[Objective] A total of 260 swine samples of dead or sick pigs collected from 7 provinces （municipalities） Jiangsu, Anhui, Shanghai, Shandong, Zhejiang, Fujian and Jiangxi of China during 2008-2010 were detected for porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）. And the ORF5 genes of some isolates were amplified and sequenced for understanding the molecule epidemiology and the genetic evolution of PRRSV in East China. [Method] Using RT-PCR method, PRRSV was detected by RT-PCR from samples. The complete ORF5 genes of 36 PRRSV positive samples was amplified, sequenced and analyzed with other 15 strains available on GenBank. [Result] PRRSV was detected in 118/260 of the clinical samples, with a positive rate was 45.4%. Sequence analysis showed that the 36 isolates of this study belonged to the North American-type PRRSV strains and were closely related to the highly pathogenic PRRSV （HP-PRRSV） with 94.6%-100% amino acid sequence identities. The sequence analysis combined with the phylogenetic analysis indicated that all these North American-type PRRSV strains in East China were further divided into five subgenotypes, subgenotype Ⅲ showed closer identity with HPPRRSV; almost all subgenotypes were found to be variable in the primary neutralizing epitope; subgenotypes Ⅲ and IV had more glycosylation sites than others. Although these 36 isolates were collected from different provinces in East China, there were no obvious relations between the distribution of PRRSV and the region. [Conclusion] The PRRSV infection was widespread and HP-PRRSV was the popular strain in East China during 2008-2010. However some different genetic characteristics appeared in the genomes, the genetic evolution was relatively stable. There exists a cross-cutting phenomenon on the genetic relationship of PRRSV isolates obtained from different provinces. Subgenotypes IV and V only appeared in some provinces, but the distribution of PRRSV did not show apparent geographical characteristics.

关键词： Porcine reproductive and respiratory syndrome （PRRS） East China ORF5 gene Genetic variation

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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095

为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性，根据已发表cDv的N基因序列设计引物，用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因，进行克隆和序列分析，结果表明：该非典型CDV的N基... 详细信息

为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性，根据已发表cDv的N基因序列设计引物，用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因，进行克隆和序列分析，结果表明：该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96．6％～99．2％和97．9％～99．4％之间，与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93．2％～93．6％和96．4％～97．5％之间;在N基因系统发育进化树上，非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群，而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku，主要以包涵体的形式存在;用western blot分析，重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接EUSA检测方法具有良好的特异性。

关键词：非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析原核表达大肠杆菌

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猪蓝耳病免疫防控存在的问题与对策

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农村养殖技术 2012年第18期 24-24页

作者：姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪蓝耳病是猪场的一个“桶”，常会伴随猪链球菌、猪细小病毒、副猪嗜血杆菌病等的发生。母猪感染蓝耳病后的临床症状：母猪产仔弱、死胎、仔猪呼吸道症状等。

关键词：猪蓝耳病副猪嗜血杆菌病防控免疫猪细小病毒呼吸道症状猪链球菌临床症状

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适合猪圆环病毒2型敏感复制的PK15细胞株的克隆与鉴定

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中国兽医科学 2011年第1期41卷 14-18页

作者：陈念劬王先炜李玉峰姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的T... 详细信息

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的TCID50达10-7.0/mL,病毒效价和生产速度明显高于PK15母细胞,且没有支原体、猪圆环病毒1型、牛黏膜病病毒、猪瘟病毒和脑心肌炎病毒等外源性微生物污染,为PCV2体外增殖和生物学特性的研究奠定了重要基础。

关键词：猪圆环病毒2型 PK15细胞克隆

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4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

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中国兽医杂志 2011年第9期47卷 40-42页

作者：庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染... 详细信息

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。

关键词：猪瘟病毒抗体试剂盒商品化动物传染病世界动物卫生组织检测病毒感染

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2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析

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中国农业科学 2011年第18期44卷 3886-3894页

作者：王小敏何孔旺张文文陈蔚茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒吕立新郭容利周俊明李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方... 详细信息

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方法】利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。【结果】260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%-100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primary neutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008-2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。【结论】2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 华东地区 ORF5基因遗传变异

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鸭疫里氏杆菌地区流行株的分离与外膜蛋白A的变异性分析

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 562-568页

作者：毕振威王永山杨建朋欧阳伟张炜范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定... 详细信息

2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定结果相同,但致病力不同,AH1毒力最弱,对鸭的发病致死率仅为16.7%。序列分析结果显示,8株分离菌的外膜蛋白A(OmpA)基因的核苷酸序列同源性为96.9%～100%,氨基酸序列同源性为98.2%～100%。将8株RA与GenBank中登录的其他55株RA的OmpA进行变异性分析,结果其核苷酸序列同源性为89.6%～100%,氨基酸序列同源性为90.2%～100%。从系统发育进化树中可将这63株RA分为4个亚群,不同国家和地区的RA株在亚群中没有显示地域或时间特征,而是呈现出了互相交叉的现象,RA的OmpA差异与血清型、分离时间和分离地点没有必然的联系,本试验近期分离的8个RA株分布在2个亚群中。

关键词：鸭疫里氏杆菌分离外膜蛋白A 变异

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靶向传染性法氏囊病病毒VP1基因siRNA对病毒复制的抑制

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1404-1409页

作者：欧阳伟王永山刘小娟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP1基因保守区序列,选择设计了3个靶向VP1的小干扰RNA序列(siR-NA):VP1-siRNA668、VP1-siRNA1034和VP1-siRNA2250,化学合成DNA序列,体外转录合成siRNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后接种IBDV,分析siRNA对病毒复制的影响。结果显示,病毒接种后72h,3个VP1-siRNA转染组未出现明显的细胞病变(CPE),病毒滴度分别为102.75,102.00,101.75 TCID50/0.1mL,而siRNACON转染和单纯IBDV接种对照组均出现明显CPE,病毒滴度均为106 TCID50/0.1mL;用荧光定量RT-PCR分析VP1基因水平,3个VP1-siRNA转染组比对照组分别降低了73.10%,81.79%,90.28%。结果表明,本试验选择设计的3个siRNA具有明显抑制IBDV复制功能,其中2 250位点的siRNA抑制效果最明显,推测该区域是VP1基因的重要功能区,是新型抗IBDV药物与疫苗设计的重要靶标。

关键词： RNA干扰(RNAi) 小干扰RNA(siRNA) 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP1基因

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EHEC O157：H7二重PCR的建立及应用

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华北农学报 2011年第6期26卷 59-66页

作者：李丽张雪寒何孔旺姜平赵攀登叶青栾晓婷温立斌倪艳秀周俊明吕立新郭容利俞正玉茅爱华李彬王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以E... 详细信息

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%～99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%～100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。

关键词： O157:H7 二重PCR 方法建立细菌分离样品检测

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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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中国预防兽医学报 2011年第8期33卷 625-629页

作者：毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与... 详细信息

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6%～99.2%和97.9%～99.4%之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2%～93.6%和96.4%～97.5%之间;在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku,主要以包涵体的形式存在;用western blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。

关键词：犬瘟热病毒非典型核衣壳蛋白基因序列分析原核表达

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