检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第5期57卷 99-106页

作者：赵桐潘梦娇刘克森白娟马梓承刘星南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为制备伪狂犬病病毒(PRV)VHS蛋白单克隆抗体,通过原核表达系统将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得pET-32a-VHS重组质粒,成功制备了PRV VHS重组蛋白,将纯化后的蛋白作为免疫原接种BALB/c雌鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和3... 详细信息

为制备伪狂犬病病毒(PRV)VHS蛋白单克隆抗体,通过原核表达系统将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得pET-32a-VHS重组质粒,成功制备了PRV VHS重组蛋白,将纯化后的蛋白作为免疫原接种BALB/c雌鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和3轮亚克隆获得了2株PRV VHS蛋白的单克隆抗体,分别命名为1H8和4C3。使用间接ELISA方法检测,2株VHS单抗细胞均能稳定分泌抗体,且腹水抗体效价均达到1∶409 600。1H8和4C3的轻链均属于Kappa型,重链皆为IgG1亚类。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)显示,2株杂交瘤细胞株分泌的单抗均能与PRV病毒蛋白发生特异性反应。通过VHS蛋白的截短表达和Western blot鉴定出1H8单抗可以识别抗原表位^(241)VAPEDVKLKY^(250),单抗4C3可以识别抗原表位^(103)RADGDGAADAPP^(114)。本研究制备出2株VHS的单克隆抗体,鉴定出2个新的抗原表位,为后续研究PRV VHS蛋白功能及其在病毒感染和免疫应答中的作用提供了重要依据。

关键词：伪狂犬病病毒 VHS蛋白单克隆抗体抗原表位

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宿主细胞敲除G3BP2基因对塞内卡病毒复制的影响

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畜牧与兽医 2025年第1期57卷 91-97页

作者：郭承意董钰蓓温家成延君芳高雁怩姜平白娟南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Ras GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白2(G3BP2)基因敲除的293T细胞系,并初步探讨了G3BP2基因缺失对于塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)增殖的影响。采用激光共聚焦试验观察病毒感染是否引起应激颗粒的产生... 详细信息

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Ras GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白2(G3BP2)基因敲除的293T细胞系,并初步探讨了G3BP2基因缺失对于塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)增殖的影响。采用激光共聚焦试验观察病毒感染是否引起应激颗粒的产生;设计、构建靶向G3BP2基因的px459-sgRNA表达载体并转染进293T细胞;通过嘌呤霉素压力筛选以及亚克隆得到细胞株,经过Western blot、基因测序的方式鉴定细胞株;CCK-8法测定细胞增殖速度;Western blot、RT-qPCR、噬斑试验分别检测SVA感染后病毒蛋白VP1的表达水平、VP1的拷贝数和细胞上清液的病毒滴度;设计并构建SVA核糖体进入位点(IRES)的双荧光素酶报告系统,双荧光素酶报告试验测定病毒启动子的启动活性。结果:病毒感染引起应激颗粒的产生;筛选得到1株G3BP2基因缺失10 bp的293T细胞系(HEK 293T G3BP2^(-/-)),其细胞活力与未敲除细胞相比无显著差异;Western blot、RT-qPCR、噬斑试验均显示G3BP2敲除后显著抑制了病毒的增殖;双荧光素酶报告试验表明G3BP2敲除后下调了病毒的翻译启动活性。综上,本研究获得了1株HEK 293T G3BP2^(-/-)细胞系,该细胞通过下调病毒的启动活性抑制病毒的增殖,为进一步探讨G3BP2对SVA复制的影响奠定基础。

关键词： G3BP2基因基因敲除塞内卡病毒A 复制

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2023年江苏地区屠宰场健康猪源猪链球菌致病与耐药特征

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微生物学报 2025年第1期65卷 211-224页

作者：许杨王瑞光彭泽仁吴宗福南京农业大学动物医学院江苏南京210014 农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210014 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京210014 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的常见致病菌,也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情,大量生猪死亡的同时,也导致14人感染死亡。因此,对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查,具有公共卫生意义。【... 详细信息

【目的】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的常见致病菌,也是一种人畜共患病原。江苏曾于1998年暴发猪链球菌疫情,大量生猪死亡的同时,也导致14人感染死亡。因此,对江苏地区屠宰场健康猪进行猪链球菌感染调查,具有公共卫生意义。【方法】于2023年采集江苏两地屠宰场健康猪扁桃体,进行猪链球菌分离鉴定和血清分型,通过所分离菌株对斑马鱼和小鼠毒力测定、药敏试验及耐药基因检测,探究猪链球菌分离菌株的致病和耐药特征。【结果】2023年7月采集江苏昆山地区扁桃体样本,阳性率为50.85%(30/59),分离鉴定出62株猪链球菌,其中分离率最高为31型(12.90%,8/62),其次为19型(11.29%,7/62)、NCL2型(8.06%,5/62)等;2023年7月、11月采集江苏丹阳地区扁桃体样本,阳性率为60.71%(34/56),分离鉴定出77株猪链球菌,其中分离率最高为16型(11.69%,9/77),其次为9型(10.39%,8/77)、21型(10.39%,8/77)、31型(10.39%,8/77)等。两地分离株对林可酰胺类(98.56%,137/139)、大环内酯类(95.68%,133/139)、四环素类(96.40%,134/139)抗生素耐药率较高;97.84%(136/139)的菌株属于多重耐药菌株。所有菌株对头孢噻肟、万古霉素敏感。根据分离株来源及血清型选择42株(昆山市18株,丹阳市24株)代表菌株进行斑马鱼毒力测定,攻毒剂量为3×106 CFU/尾时,有7株菌对斑马鱼致病力强,致死率≥80.00%。选择致死率≥80.00%且死亡趋势与强度对照无显著差异的3株代表菌株(分别为血清1型、3型、23型)进行小鼠试验,致死率均≥80.00%。【结论】江苏地区健康猪扁桃体的猪链球菌携带率较高(55.65%,64/115),97.84%(136/139)的分离株为多重耐药菌株,血清1型、3型、23型分离株致病力强,值得关注。

关键词：猪链球菌屠宰场江苏耐药特征致病特征

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猪链球菌检测技术研究进展

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微生物学报 2025年第3期65卷 883-897页

作者：李繁彭泽仁刘荣启孙洁吴宗福深圳市动植物疫病预防控制中心广东深圳南京农业大学动物医学院江苏南京农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室江苏南京深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,能够引发猪的脑膜炎、败血症、关节炎等多种疾病,给养猪业带来严重的经济损失。此外,该菌也能感染人类,导致疾病甚至死亡,是重要的人兽共患病原菌。因此,建立准确、快速、灵敏且简便的检... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是猪的重要致病菌,能够引发猪的脑膜炎、败血症、关节炎等多种疾病,给养猪业带来严重的经济损失。此外,该菌也能感染人类,导致疾病甚至死亡,是重要的人兽共患病原菌。因此,建立准确、快速、灵敏且简便的检测技术对于猪链球菌病的防控至关重要。目前,国内外已开发出多种猪链球菌检测技术,包括传统的微生物学、分子生物学、免疫学方法,以及基于纳米材料的免疫传感器、CRISPR-Cas12a系统、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱等新型检测技术。本综述概述了上述技术的原理、应用及其优缺点,并探讨了猪链球菌检测技术未来的发展方向,旨在为猪链球菌病的防控提供重要参考。

关键词：猪链球菌免疫学检测分子生物学检测方法 CRISPR-Cas12a 免疫传感器

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非洲猪瘟病毒蛋白pS183L的原核表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 112-117页

作者：余群邹艳丽陈欢刘珊苗雨润任炜杰王振忠何佳依高晓宇钱莺娟吴晓东郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后... 详细信息

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 pS183L 多克隆抗体

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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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畜牧与兽医 2025年第4期57卷 101-106页

作者：司安琪王淑娟张永强王筱真任炜杰郑龙三包静月王志亮南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266032

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化... 详细信息

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化,利用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在进行4次免疫后,取加强免疫后的小鼠脾脏进行细胞融合,经阳性克隆筛选后,获得了2株能够稳定分泌抗CP312R蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blot和间接免疫荧光(IFA)等试验对所获得的单克隆抗体的特异性进行鉴定,Western blot结果显示,制备的2株单克隆抗体均能与CP312R蛋白发生特异性反应;IFA结果显示,2株单克隆抗体均能与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)产生特异性绿色荧光。综上,本研究制备的2株单克隆抗体,为非洲猪瘟血清学诊断方法及疫苗的研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 CP312R蛋白单克隆抗体原核表达

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非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 105-111页

作者：王燕邹艳丽何佳依刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢钱莺娟贾红吴晓东冯志新郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、... 详细信息

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 pK205R蛋白间接ELISA 杆状病毒表达

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副猪格拉瑟菌感染的研究进展

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畜牧与兽医 2025年第06期 121-127页

作者：杨凯一李玉峰南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点开放实验室

副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)是一种常见于猪上呼吸道的共生菌，在一定条件下可侵入宿主并引发严重的全身性疾病，表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等。GPS常与其他病原菌如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒... 详细信息

副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)是一种常见于猪上呼吸道的共生菌，在一定条件下可侵入宿主并引发严重的全身性疾病，表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等。GPS常与其他病原菌如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等混合感染，严重危害生猪特别是保育期仔猪的健康。在现代化猪场中，该病频繁发生，对养猪行业造成了严重的经济损失。本文综述了GPS感染的临床病理特征、流行病学、诊断、预防和治疗等方面的最新研究进展，旨在为副猪格拉瑟病的临床诊治及科学研究提供参考。

关键词：副猪格拉瑟菌流行病学诊断防控

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猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

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畜牧与兽医 2025年第06期 98-104页

作者：张金霞曹莹张昊文刘德鹏李铎王晓冉田似报吴香菊齐静周萌王先炜杜以军南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室山东省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽生物组学重点实验室济南市企业服务中心

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3... 详细信息

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物，定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点，构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达；通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果：猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功；猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性，促进STING K63连接的多聚泛素化修饰，而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词：猪TRIM56 E3泛素连接酶定点突变 STING

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EAEC噬菌体PNJ1809-11和PNJ1809-13作为环境消毒剂的杀菌效果评估

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微生物学报 2021年第7期61卷 2018-2030页

作者：钱新杰李一昊曾颃殷晗杰王瑜欣黄豪圣巩倩雯李德志薛峰汤芳戴建君南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

【目的】分析2株肠聚集性大肠杆菌(EAEC)CVCC232噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性,并对其作为环境消毒剂的杀菌效果进行评估。【方法】透射电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13的形态;通过宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长... 详细信息

【目的】分析2株肠聚集性大肠杆菌(EAEC)CVCC232噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性,并对其作为环境消毒剂的杀菌效果进行评估。【方法】透射电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13的形态;通过宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、对pH和温度耐受性的测定分析PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性;比较2株噬菌体的体外杀菌效果和喷雾、雾化处理后的杀菌效果;检测噬菌体在模拟养殖环境下的耐受性,及喷雾处理的噬菌体制剂在模拟养殖环境下的杀菌效果和对宿主菌生物被膜的清除效果;分析宿主菌的抗性突变率。【结果】电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13均为肌尾病毒科噬菌体;PNJ1809-11可裂解155株大肠杆菌,PNJ1809-13可裂解46株大肠杆菌;噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的最佳感染复数(MOI)均为10,最适pH均为7;与PNJ1809-13相比,PNJ1809-11具有较好的热稳定性;在模拟的封闭装置中,将两株噬菌体分别经喷雾、雾化处理后,二者对宿主菌的杀灭效果均可达99%以上;对人工污染的粪便表面细菌的杀灭效果均达到99%以上。噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13及两者的混合制剂(噬菌体鸡尾酒)对宿主菌CVCC232形成的生物被膜的裂解效率分别为78%、30%和83%。噬菌体PNJ1809-11在养殖温度、粪便pH以及阳光照射下,其耐受性均强于PNJ1809-13。宿主菌对PNJ1809-11、PNJ1809-13的抗性突变率分别为2.5×10^(-3)和1.0×10^(-3)。【结论】综上,噬菌体PNJ1809-11的环境耐受力更强,噬菌体鸡尾酒对生物被膜的裂解效果更好,提示噬菌体PNJ1809-13或噬菌体鸡尾酒经喷雾处理后具有作为环境杀菌剂的潜力。

关键词：噬菌体噬菌体鸡尾酒消毒剂耐受性生物被膜

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