检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2019年第8期49卷 983-989页

作者：高莹白娟宋中宝姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

以猪瘟病毒石门株E2囊膜糖蛋白基因序列为基础,构建了3种重组杆状病毒rAc-E2、rAc-E2oKm和rAc-HE2oKm。Western-blot和间接免疫荧光试验结果显示,这3种重组杆状病毒均可正确表达重组E2蛋白,与E2蛋白和His的单克隆抗体均有良好的抗原反... 详细信息

以猪瘟病毒石门株E2囊膜糖蛋白基因序列为基础,构建了3种重组杆状病毒rAc-E2、rAc-E2oKm和rAc-HE2oKm。Western-blot和间接免疫荧光试验结果显示,这3种重组杆状病毒均可正确表达重组E2蛋白,与E2蛋白和His的单克隆抗体均有良好的抗原反应特性,其中rAc-HE2oKm可分泌表达重组E2蛋白,可形成病毒样颗粒,可诱导免疫仔猪产生高水平抗体和中和抗体,免疫效果与猪瘟活疫苗相当,为猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白亚单位疫苗

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非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 105-111页

作者：王燕邹艳丽何佳依刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢钱莺娟贾红吴晓东冯志新郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、... 详细信息

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 pK205R蛋白间接ELISA 杆状病毒表达

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羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其初步应用

羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其初步应用

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：勾倩倩钱莺娟印春生南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室中国兽医药品监察所

羊痘（Capripox）是由羊痘病毒（Capripoxvirus）引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织列为必须报告的动物疫病。羊痘病毒为痘病毒科（Poxviridae）羊痘病毒属（Capripoxvirus）成员,包括绵羊痘病毒（Sheeppoxvi... 详细信息

羊痘（Capripox）是由羊痘病毒（Capripoxvirus）引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病,被世界动物卫生组织列为必须报告的动物疫病。羊痘病毒为痘病毒科（Poxviridae）羊痘病毒属（Capripoxvirus）成员,包括绵羊痘病毒（Sheeppoxvirus）、山羊痘病毒（Goatpoxvirus）和牛结节性皮肤病病毒（Lump skin disease virus）。山羊和绵羊都易感染此病毒,羔羊感染后能够引起较高的死亡率,妊娠母羊甚至引起流产。该病对畜牧养殖业和国际贸易产生严重的影响。本研究建立一种方便快捷的荧光定量PCR检测方法,对该病毒进行高效、准确的鉴别诊断。共分为以下四部分:1.选择羊痘病毒保守区的ORF74号基因作为目的基因。利用Beacon designer 8设计多条引物和探针,经过Blast和分析,扩增片段为92bp。在探针的5’端用RED标记,3’端用MGB标记。2.提取山羊痘病毒疫苗株AV41株的核酸,用设计的上下游引物进行目的片段的扩增,之后将其连接于pTopo-Blunt载体,用DH5α进行转化,建立质粒标准品。3.利用正交法优化引物和探针的浓度,选取Ct值较低和荧光信号强度较高所对应的的引物和探针浓度为最佳反应体系。4.建立荧光定量标准曲线,分析扩增效率,并对其敏感性,特异性和重复性进行测定。结果表明,标准曲线斜率-3.436,相关系数R为0.9999,扩增效率达到95.45%。将质粒进行10倍系列连续稀释经检测该方法能检出最低拷贝数为9拷贝数/1,以蓝舌病病毒、小反刍兽疫病毒、布氏杆菌、羊口疮病毒、羊腐败梭菌的核酸为模板进行特异性检测,仅有羊痘病毒有扩增曲线,表明该方法特异性良好。检测其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法重复性良好。最后采集发病羊的病料,提取DNA进行检测,均能检出病毒核酸,阴性对照未检出。表明所建立的基于ORF74基因建立的实时荧光定量PCR检测方法适用于羊痘病毒的快速检测。

关键词：羊痘实时荧光定量PCR ORF74基因

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链球菌神经氨酸酶的作用机制及酶活性的测定技术

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微生物学报 2019年第3期59卷 433-441页

作者：范玉凤刘广锦南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

神经氨酸酶不仅存在于流感病毒,在细菌中也有分布。细菌的神经氨酸酶可裂解宿主体内糖结合物末端的神经氨酸残基,有助于细菌实现在宿主体内的定殖、穿透和扩散,是细菌重要的毒力因子之一。链球菌是自然界广泛存在的人畜共患的病原菌,在... 详细信息

神经氨酸酶不仅存在于流感病毒,在细菌中也有分布。细菌的神经氨酸酶可裂解宿主体内糖结合物末端的神经氨酸残基,有助于细菌实现在宿主体内的定殖、穿透和扩散,是细菌重要的毒力因子之一。链球菌是自然界广泛存在的人畜共患的病原菌,在多种链球菌中均可检测出神经氨酸酶。肺炎链球菌的神经氨酸酶研究最为透彻,该菌可产生3种神经氨酸酶(NanA,NanB,NanC),NanA不但可以发挥酶的催化作用,分解唾液酸残基,暴露细菌的黏附受体,还能不依赖酶活基团,辅助细菌感染宿主细胞;NanB催化后产物可作为细菌的碳源;NanC可辅助细菌入侵脑部。在无乳链球菌和猪链球菌中,神经氨酸酶的活性一直未得到确切的验证,可能是由于它们的荚膜均含有神经氨酸,所以其神经氨酸酶的活性逐渐在进化中丧失。另外一些链球菌,例如化脓链球菌和C、G、L群链球菌,其神经氨酸酶的底物偏好相近,均对唾液类黏蛋白的催化活性较强,利于链球菌在含唾液类黏蛋白的组织中扩散。在口腔链球菌和血链球菌中,神经氨酸酶破坏血液成分中的神经氨酸链。由此可见,神经氨酸酶的特异性催化作用与链球菌在宿主体内的定植部位密切相关。此外,随着科技的发展,对神经氨酸酶的活性检测,也由早期的硫代巴比妥法,转为现在的荧光值和吸光度的测定,更为便捷和敏感。本文旨在对链球菌的神经氨酸酶的作用机制、与毒力关系及酶活测定方法等研究进展作一综述,为从事相关研究的科学工作者提供参考。

关键词：链球菌神经氨酸酶致病性酶活性

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黑龙江省三地蜱体内Q热病原的感染情况和分子特征

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中国兽医科学 2021年第11期51卷 1385-1391页

作者：罗金李静张高峰刘佩雯罗文蔚苏小玲任巧云刘文阁曹润来刁培文孙世弟关贵全罗建勋殷宏李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中农威特生物科技股份有限公司青海西宁8100001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 甘肃省兰州新区农林水务局甘肃兰州730300 青海省动物疫病预防控制中心甘肃兰州7300701

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率... 详细信息

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率。采用Neighbor-Joining方法构建遗传进化树,分析不同地域不同蜱种来源贝氏柯克斯体的遗传进化关系。形态学鉴定结果表明,收集的蜱种主要包括日本血蜱(n=102)、全沟硬蜱(n=97)、森林革蜱(n=150)以及嗜群血蜱(n=112)。其中,日本血蜱的贝氏柯克斯体感染率高达12%,嗜群血蜱的贝氏柯克斯体感染率为6%,而全沟硬蜱及森林革蜱的贝氏柯克斯体感染率均为4%。基于16S rRNA序列分析表明,贝氏柯克斯体是一类高度保守的病原,不同地方株之间序列差异不显著。且贝氏柯克斯体与多个变形菌有着较近的亲缘关系,特别是G-变形菌在长期的进化过程中,有一支分化为贝氏柯克斯体,另外一支依然保持了G-变形菌的分子特征。基于上述分析,贝氏柯克斯体作为一种重要的人兽共患病原,可在多种蜱体内广泛存在,但其感染率略有不同。该病原的存在会给当地家畜及人的活动造成潜在的危害,为该病原的防控提出了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题。其次,杀蜱也是防控Q热病原极其有效的方法。

关键词：蜱贝氏柯克斯体 Q热流行病学调查

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非洲猪瘟流行病学及其在中国扩散的因素分析

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病毒学报 2019年第3期35卷 512-522页

作者：张睿黄旖童鲍晨沂 JUNGYong Sam 许家荣钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室南京210000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度传染性和致死性疫病。2018年8月1日,国家外来动物疫病中心接到辽宁省沈阳市发生疑似ASF病例的报告,经官方确认后于201... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度传染性和致死性疫病。2018年8月1日,国家外来动物疫病中心接到辽宁省沈阳市发生疑似ASF病例的报告,经官方确认后于2018年8月3日向世界动物卫生组织(OIE)通报为我国首例非洲猪瘟。截至2019年4月22日,中国已相继暴发了129起ASF疫情,共计扑杀102万头猪。由于尚无针对ASF的有效疫苗,其传播媒介广泛分布及复杂的相互作用使得防控局势变得更为严峻。扑杀猪群和切断病毒的传播路径是目前减缓疫情传播的主要手段。因此,对ASF流行病学特点及其扩散因素的深刻理解,有助于病毒扩散模型的建立和进一步防控措施的实施。

关键词：非洲猪瘟(ASF) 非洲猪瘟病毒(ASFV) 流行病学扩散因素产业链

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非洲猪瘟病毒p30单克隆抗体的制备和鉴定

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中国兽医科学 2020年第8期50卷 976-981页

作者：杨莎莎苗雨润薄宗义王振忠谭凯鲍晨沂吴晓东陈鸿军郑龙三钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Ro... 详细信息

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Rosetta后,经IPTG诱导表达和镍柱纯化;将纯化后的重组p30蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合和间接ELISA方法,筛选出了2株能够稳定分泌抗p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,并通过制备腹水的方法获得单克隆抗体;最后经Western-blot和IFA试验鉴定,其均能与ASFV感染细胞发生特异性反应。本研究为ASFV感染的诊断和致病机制研究提供了重要材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30蛋白单克隆抗体

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H9N2亚型禽流感病毒NA和M2基因的克隆与表达

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畜牧与兽医 2019年第5期51卷 121-127页

作者：郝珊珊郑阳余远楠张则蔡佳希宗嫚嫚冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部"动物健康与食品安全"国际合作联合实验室江苏南京210095

旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体... 详细信息

旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体,将M2基因克隆至pET28a原核表达载体,成功构建了pcold1-NA和pET28a-M2重组质粒,并成功表达出相应的融合蛋白。然后对表达的融合蛋白进行纯化,并采用免疫印迹验证其免疫反应性。本试验为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒致病机制及检测技术奠定了基础。

关键词： H9N2禽流感病毒 NA基因 M2基因原核表达

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CBL蛋白表达对H9N2亚型禽流感病毒细胞中复制及感染细胞凋亡的影响

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畜牧与兽医 2019年第5期51卷 108-113页

作者：郑阳郝珊珊张则蔡佳希宗嫚嫚余远楠田晓宁冯秀丽南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部"动物健康与食品安全"国际合作联合实验室江苏南京210095

CBL蛋白是一种E3泛素连接酶,在免疫调控、信号传导调节和对多种刺激的反应中起重要作用。本研究的主要目的是探讨真核表达的CBL蛋白对H9N2禽流感病毒增殖及感染细胞的凋亡情况的影响。荧光显微镜下观察真核表达重组载体EGFP-CBL在MDCK... 详细信息

CBL蛋白是一种E3泛素连接酶,在免疫调控、信号传导调节和对多种刺激的反应中起重要作用。本研究的主要目的是探讨真核表达的CBL蛋白对H9N2禽流感病毒增殖及感染细胞的凋亡情况的影响。荧光显微镜下观察真核表达重组载体EGFP-CBL在MDCK细胞内正常表达,qPCR结果证实禽流感病毒H9N2亚型感染的转染EGFP-CBL重组载体的MDCK细胞内病毒滴度明显少;Western blot结果证实禽流感病毒H9N2亚型感染的转染EGFP-CBL重组载体的MDCK细胞36 h,其凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值较大;流式分析结果显示转染EGFP-CBL重组载体的MDCK的早期凋亡细胞的比例少,暗示CBL蛋白能够一定程度上抑制MDCK细胞的凋亡。该结果表明CBL蛋白能在一定程度上抑制H9N2禽流感病毒在MDCK细胞的扩增,并且抑制细胞的凋亡,为深入研究CBL蛋白抗病毒细胞机制提供了重要的试验依据。

关键词： CBL 真核表达 H9N2亚型病毒细胞凋亡

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黄连素抑制猪流行性腹泻病毒复制和组装

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1829-1835页

作者：叶跃天郇文彬陈欢钱莺娟 JUNG Yong-sam 戴建君南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋... 详细信息

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。

关键词： PEDV 黄连素复制组装细胞凋亡

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