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上海市寄生虫学会2012学术年会

作者：洪炀李祥瑞林矫矫李学珍傅志强石耀军陆珂杨健美朱传刚苑纯秀李浩中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095

克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(Sj TOM34),并对其生物特性进行初步研究.应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析.应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育...

克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(Sj TOM34),并对其生物特性进行初步研究.应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析.应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况.构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况.获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1083bp.

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日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

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2012年全国农学博士后学术论坛

作者：洪炀李祥瑞林矫矫李学珍傅志强石耀军陆珂杨健美朱传刚苑纯秀李浩中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点开放实验室，国家防治动物血吸虫病专业实验室，上海 200241 南京农业大学动物医学院，南京 210095 中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点开放实验室，国家防治动物血吸虫病专业实验室，上海 200241 南京农业大学动物医学院，南京 210095

背景：线粒体的外膜转运酶通过主动运输的方式将这些线粒体前体蛋白运输到线粒体内，在线粒体前体蛋白进入线粒体的过程中发挥着重要的作用。日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因（SjTOM34）可能对其生长发育具有重要作用。方法：应用RT-... 详细信息

背景：线粒体的外膜转运酶通过主动运输的方式将这些线粒体前体蛋白运输到线粒体内，在线粒体前体蛋白进入线粒体的过程中发挥着重要的作用。日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因（SjTOM34）可能对其生长发育具有重要作用。方法：应用RT-PCR方法从42d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因，并进行生物信息学分析。应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况。构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒，并在大肠杆菌中进行表达，Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况，利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况。结果：获得了SjTOM34的基因序列，其开放阅读框（ORF）为1083bp。该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达，其中在35d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达，重组蛋白在上清和沉淀中都有存在，并且具有较好的免疫原性，在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在，并且主要分布在虫体的实质组织中。结论与意义：获得了日本血吸虫SjTOM34基因，初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况，及在成虫中的分布，为进一步研究该基因的生物学功能及作用机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因基因克隆作用机制

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纳米磷酸钙作为猪瘟多肽疫苗佐剂的研究

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 63-67页

作者：郭沛王霄旸薛飞群江善祥陆泳良王昊欣中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095 华南农业大学兽医学院广州510642

为了探索纳米磷酸钙(NCaP)作为猪瘟多肽疫苗佐剂的可行性,本研究利用猪瘟多肽疫苗作为抗原,制备纳米磷酸钙吸附猪瘟多肽疫苗。将制备好的疫苗免疫兔后,分别检测兔抗体水平和攻毒后体温变化情况。检测结果显示,纳米磷酸钙对猪瘟多肽吸附... 详细信息

为了探索纳米磷酸钙(NCaP)作为猪瘟多肽疫苗佐剂的可行性,本研究利用猪瘟多肽疫苗作为抗原,制备纳米磷酸钙吸附猪瘟多肽疫苗。将制备好的疫苗免疫兔后,分别检测兔抗体水平和攻毒后体温变化情况。检测结果显示,纳米磷酸钙对猪瘟多肽吸附率达70%;免疫后纳米磷酸钙佐剂组抗体水平低于弗氏佐剂,但与游离猪瘟多肽疫苗组相比,有较大提高;除弗氏佐剂组外,所有实验兔均有体温升高现象,纳米磷酸钙佐剂组体温升高的时间与空白组相比推迟16 h。结果表明,NCaP作为佐剂相对游离猪瘟多肽可提高其免疫效果,但其诱导的抗体水平低于弗氏佐剂组。

关键词：纳米磷酸钙猪瘟多肽疫苗佐剂

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血吸虫疫苗研究现状和发展方向

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北京农业 2011年第12期 81-83页

作者：李东朱珠张旻韩彦辉上海师范大学生命与环境科学学院南京农业大学动物医学院中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室

血吸虫疫苗的研究工作已经进行了很长一段时间,发现了一批有价值的候选疫苗分子。同时通过改进和优化免疫途径,血吸虫疫苗的免疫保护力正在逐步提高。随着研究的日益深入,对血吸虫疫苗的免疫机制等了解更加透彻,距离研制出能诱导高的、... 详细信息

血吸虫疫苗的研究工作已经进行了很长一段时间,发现了一批有价值的候选疫苗分子。同时通过改进和优化免疫途径,血吸虫疫苗的免疫保护力正在逐步提高。随着研究的日益深入,对血吸虫疫苗的免疫机制等了解更加透彻,距离研制出能诱导高的、稳定的免疫保护力的疫苗分子的目标将越来越近。

关键词：血吸虫疫苗保护力

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甘肃省庆阳地区泰勒虫病流行趋势及分子特征分析

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中国兽医科学 2020年第8期50卷 946-951页

作者：罗金谭阳春仇晓飞马雨楠黄学智禹晓宁梁会锋李军岗李利娟程保伟吴泽功倪军许肖枫殷宏罗建勋李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 北京大学肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所实验动物室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 泾源县六盘山畜牧兽医工作站宁夏固原756400 郏县畜牧局河南郏县467100

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一... 详细信息

泰勒虫引起的泰勒虫病作为危害畜牧养殖业的重要血液原虫疾病受到人们的广泛重视。因此,调查清楚某地域泰勒虫流行对于该病的早期预防有着积极的意义。本研究通过对位于陕西、甘肃、宁夏三省区的交汇处的庆阳地区蜱虫分布的调查,并进一步进行了蜱所携带的泰勒虫进行了分子鉴定。结果显示,庆阳地区蜱虫优势种以长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)为主,兼有小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicum anatolicum),青海血蜱(***)的分布。其传播的泰勒虫主要是瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),东方泰勒虫(T. orientalis),环形泰勒虫(T. annulata)以及感染羊的吕氏泰勒虫(T. luwenshuni),尤氏泰勒虫(T. uilenbergi)等,此外还有泰勒虫未定种(Theileria sp.)的寄生。统计显示在收集的300头份牛血液中瑟氏泰勒虫感染率高达74.58%,东方泰勒虫感染率72.36%,环形泰勒虫感染率12.54%。收集的200头份羊血液中吕氏泰勒虫感染率63.58%,尤氏泰勒虫感染率53.62%。而长角血蜱感染泰勒虫的感染率高达87.76%,小亚璃眼蜱感染率为47.62%,青海血蜱感染率46.43%。由此可见,庆阳地区蜱虫分布虽然较为单一,但其传播的泰勒虫病原具有多样性,值得注意的是不论家畜还是蜱虫对于泰勒虫的感染均较高。这为当地的该疾病的防控带来了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题;其次杀蜱也是防控泰勒虫病极其有效的方法。

关键词：蜱梨形虫泰勒虫庆阳

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喹烯酮和喹乙醇致人源肝细胞毒性研究

喹烯酮和喹乙醇致人源肝细胞毒性研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：班曼曼张可煜江善祥薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室南京农业大学动物医学院

【目的】为评价我国市场上主要使用的两种喹噁啉兽药——喹烯酮和喹乙醇对人肝细胞的细胞毒性影响。喹噁啉-1,4-二氧化物衍生物是研究较早的一类抗菌化合物,这类药物都具有明显的提高饲料报酬、促进动物生长和广谱抗菌的作用,作为兽药... 详细信息

【目的】为评价我国市场上主要使用的两种喹噁啉兽药——喹烯酮和喹乙醇对人肝细胞的细胞毒性影响。喹噁啉-1,4-二氧化物衍生物是研究较早的一类抗菌化合物,这类药物都具有明显的提高饲料报酬、促进动物生长和广谱抗菌的作用,作为兽药和饲科添加剂被广泛用于促进牛、猪、鱼类等动物的生长。喹噁啉类药物中,与喹烯酮、喹乙醇具有相似化学结构的二氧喹噁啉及它的代谢物因具有潜在的突变毒性而停止了商业化生产。其他喹噁啉类药物尤其是我国一类新兽药喹烯酮是否存在潜在的相关毒性危害也引起广泛的关注。【方法】本研究应用永生化的人肝细胞Chang Liver和L-02细胞进行细胞生长抑制实验,以测定喹乙醇和喹烯酮在不同剂量、不同作用时间对这两种肝细胞增殖的影响。同时,采用单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)测定了这两种药物对这两种细胞染色体DNA的损伤。【结果】本研究中,0.93-60μg/mL剂量喹烯酮对Chang Liver细胞作用4h,细胞抑制率从11.12%上升至36.42%;作用24h,抑制率从11.38%上升至73.29%,15μg/mL时细胞抑制率50.31%。0.93-60μg/mL剂量喹烯酮对L-02细胞作用4h,细胞抑制率从3.28%上升至13.47%;作用24h,抑制率从2 8.89%上升至76.51%,3.75μg/mL时细胞抑制率51.11%。2.5-320μg/mL剂量喹乙醇对Chang Liver细胞作用4h,细胞抑制率从2.26%上升至9.58%,作用24h,抑制率从9.58%上升至31.88%:2.5-320μg/mL剂量喹乙醇对L-02细胞作用4h,细胞抑制率从1.39%上升至37.11%,作用24h,抑制率从4.23%上升至39.7%。由此可见,喹烯酮和喹乙醇对Chang Liver和L-02细胞的生长抑制作用与药物作用时间和剂量成正相关;喹烯酮对细胞的抑制作用比喹乙醇大,ChangLiver和L-02细胞对这两种药物的敏感性差别不大。单细胞凝胶电泳实验中,与对照组相比,喹烯酮和喹乙醇加药组两株细胞的Tail DNA%、Tail Length和OTM等检测值都高于对照组,且差异极显著(P<0.01);随着药物剂量的增加,TailDNA%、Tail Length和OTM等值不断上升,显示出药物剂量与细胞DNA损伤呈正相关性:在相同剂量下。喹乙醇对Chang Liver和L-02细胞的Tail DNA%、Tail Length和OTM等值都较喹烯酮高,而两株细胞中L-02细胞的Tail DNA%、Tail Length和OTM等测定指标的数值都较Chang Liver细胞小。【结论】喹烯酮和喹乙醇对人源肝细胞有一定的细胞毒性,其对细胞DNA的损伤作用值得进一步研究,研究该类药物以及它们的代谢物对遗传调控的分子靶标的作用将更具有重要意义。

关键词：喹烯酮喹乙醇 Chang Liver细胞 L-O2细胞细胞毒性

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高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中癸氧喹酯的残留

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中国农学通报 2013年第8期29卷 21-25页

作者：王中艳罗浩师张丽芳江善祥费陈忠张可煜郑文丽王霄旸薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院/兽医药理与毒理实验室南京210095

为建立一种快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),以应用于癸氧喹酯(DEC)在鸡蛋中的残留检测,并将该方法用于残留消除规律的研究。将8只健康蛋鸡连续饲喂添加癸氧喹酯(浓度为27.2mg/kg)的饲料10天后,分别在停药后第1、2、3、5... 详细信息

为建立一种快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),以应用于癸氧喹酯(DEC)在鸡蛋中的残留检测,并将该方法用于残留消除规律的研究。将8只健康蛋鸡连续饲喂添加癸氧喹酯(浓度为27.2mg/kg)的饲料10天后,分别在停药后第1、2、3、5、8、11天收集鸡蛋匀浆,用乙腈:乙酸乙酯(1:1)提取,OasisTMHLB固相萃取柱净化,以0.1%甲酸水:乙腈(30/70,v/v)作为流动相,XTerraC18色谱柱洗脱,质谱多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明:该方法的灵敏度高,检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.2、0.8μg/kg,DEC在0.8～240μg/kg浓度范围内线性良好,相关系数R2>0.993,回收率在90.7%～101.8%之间,RSD<11.4%;消除试验结果表明:鸡蛋中DEC最高残留浓度出现在停药后第3天,随着时间的推移,鸡蛋中癸氧喹酯的残留浓度逐渐降低,到第8天时该药的残留浓度达到欧洲委员会规定的允许浓度水平(20μg/kg)。本方法简便可靠,可满足检验实际需求。

关键词：癸氧喹酯高效液相色谱-串联质谱鸡蛋残留消除

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血吸虫疫苗研究现状和发展方向

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北京农业（下旬刊） 2011年第8期 38-40页

作者：李东朱珠张旻韩彦辉上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 南京农业大学动物医学院南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

关键词：血吸虫疫苗保护力

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抗球虫新化合物纳川珠利的一般毒理学研究

抗球虫新化合物纳川珠利的一般毒理学研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：费陈忠林洋张涛薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室农业部动物寄生虫病学重点开放实验室南京农业大学动物医学院济源市畜牧局

【目的】三嗪类抗球虫药物是目前已知用药浓度最低的抗球虫药物,本研究室在对此类药物深入研究的基础上,发现新化合物纳川珠利具有确切的抗鸡球虫活性,为进一步了解该化合物的一般毒理学特性,提供临床合理用药依据。【方法】本急性毒性... 详细信息

【目的】三嗪类抗球虫药物是目前已知用药浓度最低的抗球虫药物,本研究室在对此类药物深入研究的基础上,发现新化合物纳川珠利具有确切的抗鸡球虫活性,为进一步了解该化合物的一般毒理学特性,提供临床合理用药依据。【方法】本急性毒性研究先通过反复预试验确定LD～LD区间范围,并依之分组,确定组间比,试验选用18～22 g的小鼠70只随机分为7组,每组10只,雌雄各半,各组用药量分别为350,455,592,769,1000,1300和1689 mg/kg体重对小鼠经口1次灌服,给药后连续观察7 d,统计死亡率,分别以改良寇氏法和机率单位加权回归法（Bliss法）计算LD50值及其95%可信限范围。蓄积毒性试验选用15-18g的小鼠60只,给药组40只,0.5%羧甲基纤维素钠对照组20只,雌雄各半,每天一次灌胃给药,起始剂量为0.1个LD,采用剂量递增连续染毒法来评价药物的蓄积毒性,试验期间观察小鼠的一般表现并按时称重,当实验动物累积死亡达50%时停止给药,记录小鼠死亡数并计算蓄积系数（K）。蓄积毒性试验停止给药后,从试验组和对照组中分别随机抽取小鼠10只,雌雄各半,每只1次经口灌服1个LD剂量的供试物,统计动物死亡率,观察小鼠对化合物的耐受性。【结果】该化合物采用寇氏改良法计算的LD为768mg/kg,95%可信限为644～916mg/kg,采用机率单位加权回归法（Bliss法）计算的LD为769mg/kg,95%可信限为615～960mg/kg,两种方法的计算结果基本一致,根据相关分类标准属于中毒类,其急性毒性明显高于同类代表药物地克珠利,但其LD值仍然在靶动物鸡体内推荐使用剂量的百倍以上。该化合物计算的蓄积系数为4.26,属于中等蓄积,说明其在动物体内代谢和清除较快,可作为抗球虫饲料添加剂使用。耐受性试验中试验组和对照组的小鼠死亡率分别为40%和20%,经χ检验,两组死亡率差异无统计学意义（P>0.05）。【结论】可初步认为该新化合物的毒性较低,在临床上应用相对安全,具有较好的成药性基础。

关键词：鸡球虫病三嗪化合物纳川珠利急性毒性蓄积毒性

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羊肌肉组织中安乃近代谢产物残留量的测定

羊肌肉组织中安乃近代谢产物残留量的测定

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张崇张丽芳江善祥费陈忠王霄旸郑文丽肖遂薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室南京210095

[目的]建立一种可同时测定羊肌肉组织中安乃近代谢产物：4-甲氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine,MAA)、氨基安替比林(aminoantipyrine,AA)、甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine,FAA)和乙酰氨基安替比林(4-aeetylaminoantipyrine,AAA)残留量的高效液相色谱串联质谱检测方法.[方法]羊肌肉组织用碱性乙腈提取,过OASIS MAX固相萃取小柱净化,用高效液相色谱串联质谱测定.色谱柱为Waters Atlantis HILIC Silica,通过流动相0.1％甲酸铵水溶液+乙腈梯度分离,用电喷雾-串联质谱正离子模式和多反应监测模式进行定性定量分析,用外标法定量.[结果]MAA、FAA、AAA在羊肌肉组织中4-200 μg/kg的添加范围内线性良好,AA在40-2000μg/kg的添加范围内线性良好;在5、50、100的添加水平,MAA、FAA、AAA在羊的肌肉组织中回收率在79.5％～ 119.0％的范围内;在50、500、1000的添加水平,AA的回收率在75％～ 109.7％的范围内,MAA、FAA、AAA在肌肉组织各个浓度的日内相对标准偏差(RSD)均小于12.1％,日间标准偏差均小于16.7％;AA在肌肉组织各个浓度的日内相对标准偏差(RSD)均小于7.1％,日间相对标准偏差小于10.2％.MAA,FAA,AAA在肌肉组织中的检测限均为2μg/kg,定量限为5μg/kg;AA在肌肉组织中的检测限为20μg/kg,定量限为50μg/kg.[结论]建立了在羊肌肉组织中安乃近四个代谢物的高效液相色谱串联质谱分析方法,本方法灵敏度高,重现性良好,且经济、高效,各项方法学考察均符合残留检测的要求.

关键词：安乃近残留 HPLC-MS/MS

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