检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：胡波范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

本论文目的是为了确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,试验将本实验室保存的Sf9细胞培养成生长良好的单层,作为原始细胞种子1代,连续传代培养至60代,进行细胞传代研究。按照2010版《中国兽药典》对Sf9细胞库细胞进行致瘤性检... 详细信息

本论文目的是为了确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,试验将本实验室保存的Sf9细胞培养成生长良好的单层,作为原始细胞种子1代,连续传代培养至60代,进行细胞传代研究。按照2010版《中国兽药典》对Sf9细胞库细胞进行致瘤性检测。对Sf9细胞系对裸鼠的致瘤性进行了检测,将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别设为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和不作任何处理的空白对照组,以各自细胞悬液皮下接种裸鼠。分别于3周和12周观察接种部位是否有肿瘤形成,并进行病理组织学检查。试验结果表明:每代细胞生长为致密单层时间为48～54小时,细胞上清pH值为6.2左右,与原始培养基相比,pH值基本无变化;显微镜检查各代细胞形态基本一致。建立了Sf9细胞的原始细胞库(第5代)、基础细胞库(第10代)、工作细胞库(第15代),并规定生产用细胞自行传代不超过30代,最高限制代次细胞为60代。致瘤性分析结果显示,接种后3周,阳性对照Hep-2细胞组裸鼠注射部位有米粒大小的结节形成,病理组织学检查为鳞状细胞癌。而阴性对照CEF细胞组和Sf9细胞组注射部位未见结节,接种后12周,经病理组织学检查,CEF细胞组和Sf9细胞组均无肿瘤形成。结论:基础代次和最高限制代次Sf9细胞均不具有致瘤性,Sf9细胞可用于疫苗生产。

关键词： Sf9细胞致瘤性裸鼠

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2015-2016年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征的分子流行病学调查

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畜牧与兽医 2017年第6期49卷 153-156页

作者：徐晓杰张乔亚谈晨白娟姜平南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,所有的毒株均属美洲型,分为4个亚型,其中2个毒株形成一个新的亚型Ⅳ;6个毒株与美国NADC30株有高度同源性,形成了亚型Ⅲ。研究表明我国PRRSV毒株存在遗传多样性,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了理论依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因亚型

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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型猪体共感染发病模型的建立

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中国兽医科学 2016年第5期46卷 573-578页

作者：游术梅张乔亚孙涛朱雪蛟王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻毒后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重并于不同时间采血,攻毒后第21天剖杀所有猪,荧光定量PCR检测血清中病毒血症和组织中病毒载量。结果表明,PCV2+PRRSV共感染组猪的临床症状最严重,并死亡2头。病理变化主要表现为肺出血、明显的间质性肺炎,淋巴组织及淋巴细胞缺失严重,淋巴滤泡中出现大量核浓缩深染的淋巴细胞;PCV2单独感染组与PRRSV单独感染组猪的临床症状轻微,仅出现短暂性体温升高;空白对照组未出现症状。病毒血症检测结果显示,两种病毒共感染组猪的血清中PCV2与PRRSV含量均高于单独感染组。本研究成功建立了PRRSV与PCV2猪体人工共感染发病模型,为PRRSV与PCV2协同致病机理研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型混合感染断奶仔猪多系统衰竭综合征

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猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株PCR鉴别方法的建立

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中国兽医科学 2016年第7期46卷 814-820页

作者：孙涛董静白娟徐璇王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒（PRV）变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36... 详细信息

猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒（PRV）变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36区域的基因序列设计了2对引物,建立两步法PCR。第一步PCR针对UL44区域,区分出经典毒株（疫苗株HB98除外）感染与变异毒株感染。第二步PCR针对UL36区域,区分出HB98株与伪狂犬病病毒变异毒株。两步法PCR的敏感度分别达到2~20TCID50和50TCID50病毒量。对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、日本脑炎病毒、脑心肌炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核酸应用此方法进行扩增,结果均为阴性。该方法与猪伪狂犬病病毒国家标准PCR检测方法的符合率达到91%,可用于实验室快速诊断。

关键词：伪狂犬病病毒变异毒株 HB98 两步法PCR

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猪细小病毒2型VP蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2015年第2期45卷 118-125页

作者：何玉王广操张梦岩李玉峰白娟姜平王先炜南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1... 详细信息

为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的工作浓度为1∶20 000,检测的临界值为0.400 5(D450nm≥0.400 5判定为阳性)。特异性试验证明,与猪细小病毒1型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒O型血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性试验变异系数均小于10%。应用此方法对采自江苏省的480份临床血清样本进行了检测,PPV2抗体阳性率为31%。试验结果表明,tVP蛋白能很好地获得表达,以此蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床血清PPV2抗体的检测。

关键词：猪细小病毒2型重组截短的VP蛋白原核表达间接酶联免疫吸附试验

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脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

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中国兽医学报 2015年第2期35卷 242-246页

作者：蒋康富白娟李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和... 详细信息

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P<0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P>0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。

关键词：脑心肌炎病毒灭活疫苗免疫效力

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致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

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中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 48-55页

作者：何再平王权陈永军刘迎春韩先干王少辉白雪瑞刘永杰蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性... 详细信息

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。

关键词：副溶血弧菌种特异性基因溶血素基因多重PCR 检测

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副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用

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中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 56-62页

作者：李欣彤陈永军刘迎春白雪瑞王少辉韩先干刘永杰王权蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子。本研究根据已发表基因序列(Gen Bank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧菌SHJLA株基因组DNA为模板,... 详细信息

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子。本研究根据已发表基因序列(Gen Bank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧菌SHJLA株基因组DNA为模板,扩增编码TDH蛋白的基因,克隆至表达质粒p ET28a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为576 bp。重组原核表达质粒p ET28a-tdh转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导可表达分子量约为27 k Da的融合蛋白,主要以包涵体形式表达。对包涵体进行复性,Western blot分析表明经过复性后的重组蛋白能够被感染副溶血弧菌SHJLA株的小鼠血清识别。重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1:256 000以上。将该多抗初步应用于斑点-ELISA(DotELISA)方法的建立,TDH阳性的致病性副溶血弧菌检测到阳性斑点,而TDH阴性的副溶血弧菌及其他细菌未检测到特异性斑点。本研究可为深入研究TDH的蛋白功能,建立致病性副溶血弧菌免疫学快速诊断方法以及保护性疫苗的研制提供研究基础。

关键词：副溶血弧菌直接溶血素蛋白表达斑点-ELISA

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脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

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第九届南京农业大学畜牧兽医学术年会暨生猪标准化与生产效益持续提升研讨会

作者：蒋康富白娟李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验.结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性EL1SA抗体、中和抗体和淋... 详细信息

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验.结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性EL1SA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P＜0.01).而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P＞0.05).采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90％,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础.

关键词：猪脑心肌炎病毒灭活疫苗免疫保护效力

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7间接ELISA抗体检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7间接ELISA抗体检测方法的建立

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上海市畜牧兽医学会2015年学术年会

作者：战晓燕李玉峰姜平上海农林职业技术学院上海201699 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏210095

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)重组非结构蛋白NSP7作为包被抗原,优化反应条件,建立了用于检测PRRSV抗体的间接ELISA方法.抗原最适包被浓度为0.4 μ g/ml,37℃包被2h,封闭剂为1％BSA,37℃封闭3h,血清最适稀释度为1∶100,37℃作用1h...

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)重组非结构蛋白NSP7作为包被抗原,优化反应条件,建立了用于检测PRRSV抗体的间接ELISA方法.抗原最适包被浓度为0.4 μ g/ml,37℃包被2h,封闭剂为1％BSA,37℃封闭3h,血清最适稀释度为1∶100,37℃作用1h,酶标SPA最佳稀释度1∶20,000,37℃作用30min,底物最佳反应时间为37℃ 10min.设定阴、阳性对照,采用S/P比值作为判定标准,若S/P≥0.4,判为阳性;若S/P＜0.3,判为阴性.该法与圆环病毒2型等其它6种常见猪病原抗体没有交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数分别小于9％和8％,表明该法具有较好的特异性和重复性.与IDEXX公司的PRRSV抗体检测试剂盒比较,其相对敏感性、特异性分别为90.0％、95.0％,符合率达92.0％,检测结果无显著性差异.

关键词：

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