检索结果-内蒙古大学图书馆

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析

中国农业科学 2011年第18期44卷 3886-3894页

作者：王小敏何孔旺张文文陈蔚茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒吕立新郭容利周俊明李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方... 详细信息

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方法】利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。【结果】260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%-100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primary neutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008-2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。【结论】2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 华东地区 ORF5基因遗传变异

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鸭疫里氏杆菌地区流行株的分离与外膜蛋白A的变异性分析

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 562-568页

作者：毕振威王永山杨建朋欧阳伟张炜范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定... 详细信息

2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定结果相同,但致病力不同,AH1毒力最弱,对鸭的发病致死率仅为16.7%。序列分析结果显示,8株分离菌的外膜蛋白A(OmpA)基因的核苷酸序列同源性为96.9%～100%,氨基酸序列同源性为98.2%～100%。将8株RA与GenBank中登录的其他55株RA的OmpA进行变异性分析,结果其核苷酸序列同源性为89.6%～100%,氨基酸序列同源性为90.2%～100%。从系统发育进化树中可将这63株RA分为4个亚群,不同国家和地区的RA株在亚群中没有显示地域或时间特征,而是呈现出了互相交叉的现象,RA的OmpA差异与血清型、分离时间和分离地点没有必然的联系,本试验近期分离的8个RA株分布在2个亚群中。

关键词：鸭疫里氏杆菌分离外膜蛋白A 变异

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靶向传染性法氏囊病病毒VP1基因siRNA对病毒复制的抑制

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1404-1409页

作者：欧阳伟王永山刘小娟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP1基因保守区序列,选择设计了3个靶向VP1的小干扰RNA序列(siR-NA):VP1-siRNA668、VP1-siRNA1034和VP1-siRNA2250,化学合成DNA序列,体外转录合成siRNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后接种IBDV,分析siRNA对病毒复制的影响。结果显示,病毒接种后72h,3个VP1-siRNA转染组未出现明显的细胞病变(CPE),病毒滴度分别为102.75,102.00,101.75 TCID50/0.1mL,而siRNACON转染和单纯IBDV接种对照组均出现明显CPE,病毒滴度均为106 TCID50/0.1mL;用荧光定量RT-PCR分析VP1基因水平,3个VP1-siRNA转染组比对照组分别降低了73.10%,81.79%,90.28%。结果表明,本试验选择设计的3个siRNA具有明显抑制IBDV复制功能,其中2 250位点的siRNA抑制效果最明显,推测该区域是VP1基因的重要功能区,是新型抗IBDV药物与疫苗设计的重要靶标。

关键词： RNA干扰(RNAi) 小干扰RNA(siRNA) 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP1基因

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EHEC O157：H7二重PCR的建立及应用

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华北农学报 2011年第6期26卷 59-66页

作者：李丽张雪寒何孔旺姜平赵攀登叶青栾晓婷温立斌倪艳秀周俊明吕立新郭容利俞正玉茅爱华李彬王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以E... 详细信息

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%～99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%～100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。

关键词： O157:H7 二重PCR 方法建立细菌分离样品检测

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抗猪(嗜血)支原体MSG1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

抗猪(嗜血)支原体MSG1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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第五届(秋季)南京农业大学畜牧兽医学术年会猪业峰会——规模猪场疫病综合防控研讨会

作者：张长莹李玉峰曹彦琼宋艳华陈闻姜平南京农业大学动物医学院/动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京 210095

以原核表达纯化的猪(嗜血)支原体MSGl蛋白免疫BALB/c小鼠，运用细胞融合技术筛选分泌针对MSG1蛋白抗体的融合细胞。通过间接ELISA方法筛选获得2株能稳定分泌抗体的融合细胞株，分别命名为1A7和3G6，Westem blot结果证明这2株细胞分泌的... 详细信息

以原核表达纯化的猪(嗜血)支原体MSGl蛋白免疫BALB/c小鼠，运用细胞融合技术筛选分泌针对MSG1蛋白抗体的融合细胞。通过间接ELISA方法筛选获得2株能稳定分泌抗体的融合细胞株，分别命名为1A7和3G6，Westem blot结果证明这2株细胞分泌的抗体能够与重组MSGl蛋白发生特异性反应。细胞上清和腹水中的ELISA抗体效价分别为1：4096、1：1024和1：1638400、1：51200，其单抗亚类鉴定均属于IgG1，轻链为K型。抗原识别位点分析结果表明，2株单抗所识别的抗原位点相同。猪(嗜血)支原体MSGl蛋白特异性单克隆抗体的制备成功，为制备免疫诊断试剂盒和致病机制的研究奠定了基础。

关键词：猪附红细胞体病猪(嗜血)支原体 MSG1蛋白单克隆抗体

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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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中国预防兽医学报 2011年第8期33卷 625-629页

作者：毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与... 详细信息

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6%～99.2%和97.9%～99.4%之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2%～93.6%和96.4%～97.5%之间;在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku,主要以包涵体的形式存在;用western blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。

关键词：犬瘟热病毒非典型核衣壳蛋白基因序列分析原核表达

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兔出血症病毒双夹心ELISA检测方法的建立

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江苏农业学报 2011年第3期27卷 571-576页

作者：董婷王芳熊富强王先炜范志宇胡波王敏敏李洪广江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点歼放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立特异性好、敏感度高、稳定可靠的检测兔出血症病毒的双夹心ELISA方法。该试验制备了兔出血症病毒多抗和小鼠腹水单抗,并将他们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感度试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并同时用双... 详细信息

为建立特异性好、敏感度高、稳定可靠的检测兔出血症病毒的双夹心ELISA方法。该试验制备了兔出血症病毒多抗和小鼠腹水单抗,并将他们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感度试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并同时用双夹心ELISA和血凝试验(HA)对52份待测兔肝脏样品进行检测,比较这两种方法的符合率。结果显示:兔出血症病毒多抗最佳稀释度为1∶400,浓度为19.50 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为2.86 mg/L。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高。对52份待检兔肝脏样品的检测结果显示:双夹心ELISA和HA试验的阳性检出率分别为82.7%(43/52)和75.0%(39/52),双夹心ELISA与HA试验的符合率为90.7%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。以上试验结果表明该双夹心ELISA方法是检测RHDV的一种特异、敏感、快速、经济的免疫学检测技术。

关键词：兔出血症病毒双夹心ELISA 多抗单抗

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2009～2010年华东地区猪圆环病毒2型的基因型分析

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1037-1042页

作者：王小敏张文文何孔旺茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应... 详细信息

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应用DNAStar软件对获得的10株PCV全长基因和GenBank中的参考毒株进行序列分析和系统进化树分析。结果表明210份病料中107份为PCV2阳性,36份为PCV2a基因型,97份为PCV2b基因型,检出率分别为17.1%和46.2%,两个基因型的共感染率为12.4%。10株分离株的序列分析结果表明,华东地区PCV2流行毒株之间的核苷酸同源性为96.3%～99.9%,与GenBank其他PCV2参考毒株的同源性为95.0%～99.9%。系统进化树分析表明中国华东地区PCV2存在3种基因型:PCV2a、PCV2b和PCV2c。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) 序列分析基因型华东地区

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1株鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

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江苏农业科学 2011年第6期39卷 374-376页

作者：钮慧敏李银黄欣梅刘宇卓张敬峰李彤彤刘飞李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻... 详细信息

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻毒死亡鸭体内分离到Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。

关键词：鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定序列分析病毒回归试验

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H9N2亚型禽流感病毒的纯化及间接ELISA方法的建立

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江苏农业科学 2011年第4期39卷 264-266页

作者：牛囡囡李银刘宇卓刘飞叶焕春李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将H9N2亚型禽流感病毒FT株病毒液经过红细胞吸附释放法纯化后作为ELISA包被抗原,建立H9N2亚型禽流感抗体间接ELISA方法。试验结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速检测禽流感抗体提供了便利途径。

关键词： H9N2亚型禽流感间接ELISA 抗体红细胞吸附释放法

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