检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2023年第2期46卷 316-323页

作者：李紫彤赵晨遥朱慧欣蓝培如王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本试验探究药物米非司酮的抗伪狂犬病毒(PRV)作用及其与另一种抗伪狂犬病毒药物氢醌的协同作用,为抗PRV药物的研究和临床应用奠定基础。[方法]用Western blot和qPCR等方法检测米非司酮及其与氢醌联用在体外对伪狂犬病毒复制的影... 详细信息

[目的]本试验探究药物米非司酮的抗伪狂犬病毒(PRV)作用及其与另一种抗伪狂犬病毒药物氢醌的协同作用,为抗PRV药物的研究和临床应用奠定基础。[方法]用Western blot和qPCR等方法检测米非司酮及其与氢醌联用在体外对伪狂犬病毒复制的影响及其影响的作用阶段,再通过小鼠攻毒保护试验进一步确认其抗病毒作用及与氢醌联用的协同作用。[结果]15μmol·L^(-1)米非司酮具有抗病毒作用,且随着浓度升高而增强,此作用发生于伪狂犬病毒复制早期。体内、体外试验结果表明,米非司酮(体内5μmol·L^(-1)、体外40 mg·kg^(-1))单独或与氢醌(体内5μmol·L^(-1)、体外50 mg·kg^(-1))联用均具有抗病毒作用,与氢醌具有协同抗病毒作用,同时能减轻单独用药对肝脏的损伤。[结论]米非司酮在病毒复制早期发挥抗病毒作用,与氢醌的联用具有更好的抗病毒效果,既减轻氢醌对肝脏的损伤,又弥补米非司酮药效上的不足。

关键词：猪伪狂犬病毒米非司酮抗病毒氢醌协同效应

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犬C群轮状病毒探针法实时荧光RT-LAMP方法的建立与应用

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 97-104页

作者：沈海潇李鑫杨德全葛菲菲王建黄士新姜平南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 上海市动物疫病预防控制中心上海201400

旨在建立一种检测犬C群轮状病毒(CRV C)的探针法实时荧光反转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。以病毒基因组的保守序列VP6为靶标,设计合成1组LAMP引物探针,对反应的各项参数进行优化后确定方法的特异性、敏感性等各项指标,进行临床样品... 详细信息

旨在建立一种检测犬C群轮状病毒(CRV C)的探针法实时荧光反转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。以病毒基因组的保守序列VP6为靶标,设计合成1组LAMP引物探针,对反应的各项参数进行优化后确定方法的特异性、敏感性等各项指标,进行临床样品检测以评估方法的实际效果。结果:该方法检测下限为7.71×10^(0) copies/μL,敏感性与荧光定量RT-PCR相当。重复试验结果的变异系数小于4.35%。与犬A群轮状病毒(CRV A)、犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬肠道冠状病毒(CCoV)和犬星状病毒(CaAstV)均无交叉反应。临床样品检测符合率试验表明,本方法与荧光定量RT-PCR方法的总体符合率达到了98.46%(64/65)。综上,本研究建立的探针法实时荧光RTLAMP方法具有反应快速、灵敏度高、特异性强、仪器成本低等优点,可用于CRV C快速检测、临床诊断与疫病监测。

关键词：探针法环介导等温扩增犬C群轮状病毒快速检测

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兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验

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中国兽医杂志 2019年第7期55卷 30-33,I0003,I0004页

作者：范志宇王芳胡波魏后军薛家宾姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试... 详细信息

为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。

关键词：兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗效力检验免疫期

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猪伪狂犬病毒引起PK-15细胞自噬的研究

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南京农业大学学报 2018年第4期41卷 701-707页

作者：许长萌王志建王咪刘倩玉王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬... 详细信息

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。

关键词：自噬猪伪狂犬病毒(PRV) LC3 自噬流复制 Beclin-1

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Sf9昆虫细胞系的致瘤性研究

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江苏农业科学 2019年第18期47卷 209-211页

作者：胡波王芳范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014

为确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,检测了Sf9细胞对裸鼠的致瘤性。将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和空白对照组,以各自细... 详细信息

为确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,检测了Sf9细胞对裸鼠的致瘤性。将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和空白对照组,以各自细胞悬液皮下接种裸鼠。在接种后21 d和84 d观察接种部位肿瘤形成情况,并进行病理组织学检查。结果显示,接种后21 d,Hep-2细胞组裸鼠注射部位形成米粒大小结节,经病理组织学检查为鳞状细胞癌,而CEF细胞组和Sf9细胞组注射部位均无结节。接种后84 d,经病理组织学检查,CEF细胞组和Sf9细胞组均无肿瘤形成。本研究表明基础代次和最高限制代次Sf9细胞均不具有致瘤性,Sf9细胞可用于疫苗生产。

关键词： Sf9细胞致瘤性裸鼠疫苗安全性

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稳定表达LamR的RK13细胞系的建立及RHDV吸附能力的初步研究

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畜牧与兽医 2018年第8期50卷 44-48页

作者：黄萍宋艳华胡波魏后军范志宇仇汝龙陈萌萌薛家宾王芳 JUNG Yong-Sam 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014

为建立稳定表达层黏连蛋白受体（LamR）RK13细胞系（RK13-LamR）,并研究LamR蛋白在兔出血症病毒（RHDV）与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与... 详细信息

为建立稳定表达层黏连蛋白受体（LamR）RK13细胞系（RK13-LamR）,并研究LamR蛋白在兔出血症病毒（RHDV）与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染RK13细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达LamR蛋白的RK13细胞。通过间接免疫荧光试验（IFA）和Western blotting证明所获细胞株能够稳定表达LamR蛋白,将细胞株命名为RK13-LamR。以纯化的RHDV接种RK13-LamR细胞,IFA检测结果显示,LamR蛋白能促进RHDV对RK13细胞的吸附。本研究建立了RHDV相对敏感的细胞株,证实在RHDV吸附宿主细胞的过程中,LamR蛋白起到一定的作用。

关键词：慢病毒载体 Lam R RK13细胞兔出血症病毒

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血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

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华北农学报 2018年第5期33卷 106-110页

作者：刘娜刘青涛李银杨婧李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片... 详细信息

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。

关键词：血清4型禽腺病毒六邻体蛋白原核表达

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H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制

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江苏农业学报 2018年第2期34卷 368-373页

作者：刘青涛李银刘娜杨婧韩凯凯刘宇卓赵冬敏黄欣梅田宇杰江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;... 详细信息

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P<0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P<0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒鸡免疫抑制

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小反刍兽疫病毒液相芯片检测方法的建立及初步应用

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畜牧与兽医 2018年第11期50卷 69-73页

作者：阮智杨胡波宋艳华魏后军范志宇吴晓东王芳钱莺娟南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心山东青岛266032

为建立小反刍兽疫病毒（PPRV）液相芯片检测方法,根据Gen Bank上公布的PPRV的N蛋白基因序列高度保守区设计引物与探针;对探针进行C12臂修饰后与荧光编码微球偶联,将偶联后的探针与PPRV的PCR产物进行杂交,在Bio-Plex系统上读取荧光信号,... 详细信息

为建立小反刍兽疫病毒（PPRV）液相芯片检测方法,根据Gen Bank上公布的PPRV的N蛋白基因序列高度保守区设计引物与探针;对探针进行C12臂修饰后与荧光编码微球偶联,将偶联后的探针与PPRV的PCR产物进行杂交,在Bio-Plex系统上读取荧光信号,建立了小反刍兽疫病毒液相芯片检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了研究,最终用建立的方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法只与PPRV基因的PCR产物反应,而不与其他病毒基因反应,可检出的最低基因拷贝数为5. 78×104copies/m L,表明该方法具有良好的特异性与敏感性。利用该方法对25份临床样本进行检测,共检出阳性样本15份,与传统PCR方法检测结果一致。本研究建立了小反刍兽疫病毒的快速液相芯片检测方法,为进一步建立多种外来动物疫病的液相芯片检测方法奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫外来病原液相芯片检测方法

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2015-2016年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征的分子流行病学调查

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畜牧与兽医 2017年第6期49卷 153-156页

作者：徐晓杰张乔亚谈晨白娟姜平南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,所有的毒株均属美洲型,分为4个亚型,其中2个毒株形成一个新的亚型Ⅳ;6个毒株与美国NADC30株有高度同源性,形成了亚型Ⅲ。研究表明我国PRRSV毒株存在遗传多样性,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了理论依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因亚型

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