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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

江苏农业学报 2009年第2期25卷 291-295页

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚... 详细信息

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3，腹水效价均为1×10^11；C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2，腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示，F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明，c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带，而其它4株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定

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江苏农业学报 2009年第3期25卷 568-571页

作者：潘群兴王永山刘洁夏兴霞何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的... 详细信息

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。

关键词：肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性

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兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的制备及鉴定

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中国比较医学杂志 2009年第11期19卷 23-26页

作者：熊富强王芳范志宇恽时锋蔡少平林焱姜平南京军区南京总医院比较医学科南京210002 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

目的建立能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌(Bb)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后进一步建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体(McAb),用间接... 详细信息

目的建立能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌(Bb)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后进一步建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体(McAb),用间接ELISA、Western-blot等方法对McAb特性进行鉴定。结果获得两株能稳定分泌抗Bb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A7D5和D6B2,其小鼠腹水抗体效价分别为1∶409600和1∶102400;且不与兔大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌等兔的常见病原菌反应,特异性强。两株单抗亲和力实验表明A7D5亲和力略高于D6B2。ELISA相加试验表明它们针对相同的抗原表位。结论成功建立了两株能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,效价高、特异性强,为今后建立该菌的免疫检测技术建立奠定了基础。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21-40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21-40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPV VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Western-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性。电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子PPV:VLP(FMDV)。

关键词：猪O型口蹄疫细小病毒 T细胞表位肽 VP2蛋白生物活性

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重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建

重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛... 详细信息

将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21～40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,转化含有穿梭载体Bacmid的*** DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1:PPV VP2,转染昆虫草地夜蛾(Sf9)细胞,并在Sf9中进行了表达。用间接免疫荧光试验(IFA)、Western-blot分析,表达产物具有与PPV VP2天然蛋白相似的生物活性.电镜观察,表达的蛋白能够自我组装成病毒样粒子[PPV:VLP(FMDV)].

关键词：猪细小病毒口蹄疫病毒 VP2 PPV 重组杆状病毒细胞表位病毒样颗粒

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2... 详细信息

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为1×10～3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G11三株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,七株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌0157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌...

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

引言/目的:食源性病原微生物已成为当今不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。全世界每年至少有200万人死于以感染性腹泻为主的食源性疾病。在食源性病原微生物中,肠出血性大肠杆菌（EHEC）占有重要地位。O157:H7的感染... 详细信息

引言/目的:食源性病原微生物已成为当今不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。全世界每年至少有200万人死于以感染性腹泻为主的食源性疾病。在食源性病原微生物中,肠出血性大肠杆菌（EHEC）占有重要地位。O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点,已成为全球性的公共卫生问题,获得简便、快速、敏感、实用的O157:H7快速检测方法仍是当前食源性病原微生物防控研究亟需解决的问题。本研究旨在制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。材料与方法:将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP/20骨髓瘤细胞融合,建立分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株。结果与讨论:获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2bκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMκ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、2E7、B8、D3和H7细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为4×10～2～2.5×10～6。相加ELISA结果显示,D3和H7 mAbs对应相同的抗原表位,而其它五株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,2E7、H7和D3为抗EHEC-O157:H7特异性单克隆抗体,其它四株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,2E7、D3和H7三株mAbs在蛋白分子量35kD处有特异性条带,而mAbs B8则未显示蛋白带。本研究制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。同时,实验结果表明大肠杆菌的抗原成分十分复杂,不同血清型甚至同种血清型不同菌株之间存在着大量的共同抗原表位。

关键词：杂交瘤细胞株培养上清液人兽共患细菌病大肠杆菌食源性病原微生物动物源性新制剂单克隆抗体

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京 210095

将*** O157：H7(EHEC-O157：H7)用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞：与SP/20骨髓瘤细胞融合后，获得七株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是... 详细信息

将*** O157：H7(EHEC-O157：H7)用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞：与SP/20骨髓瘤细胞融合后，获得七株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ，IgMκ、IgMλ.、IgMκ和lgG2aκ。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10(3)，腹水效价均为1×10(11);C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10(1)％～2×10(2)，腹水效价均为1×10(3)。相加ELISA结果显示，F1、G9和G11三株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，七株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明，C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带，而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌单克隆抗体生物制剂病原菌检测人畜共患病

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弓形虫疫苗的研究进展

弓形虫疫苗的研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：孔猛孙佩元白昀邵国青江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京农业大学动物医学院

弓形虫病作为一种严重的人畜共患病,无论在畜牧业还是在公共卫生学上都有着重要的意义。本文就弓形虫疫苗的类型及研究现状作一综述,为进一步研究弓形虫疫苗提供参考。

关键词：弓形虫疫苗

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猪链球菌2型新的感染相关因子自溶素的鉴定与分析

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微生物学报 2008年第1期48卷 68-72页

作者：顾宏伟陆承平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据Sanger研究所公布的猪链球菌2型(SS2)P1/7株的自溶素序列,设计检测引物,取SS2我国2次流行株、其它临床分离株和参考株,及猪链球菌1型、1/2型、7型和9型,共33株,分别以其DNA为模板,PCR扩增。结果表明,SS2除无毒株T15阴性外,其他临床... 详细信息

根据Sanger研究所公布的猪链球菌2型(SS2)P1/7株的自溶素序列,设计检测引物,取SS2我国2次流行株、其它临床分离株和参考株,及猪链球菌1型、1/2型、7型和9型,共33株,分别以其DNA为模板,PCR扩增。结果表明,SS2除无毒株T15阴性外,其他临床分离株27株(含人源2株)均阳性;其它猪链球菌为,SS7阳性,SS1、SS1/2和SS9均阴性。同时设计引物向两侧扩增,以四川流行株ZY05719和江苏流行株HA9801的DNA为模板,扩增自溶素ORF完整的编码基因,软件分析结果显示,该基因含有6个重复的"GBS_Bsp-like"域和1个"N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶"域,与SS2欧洲株有较高同源性(99.8%),但与SS2加拿大株差异较大。在DNASTAR分析所编码蛋白的抗原性的基础上,另设计引物,以ZY05719株DNA为模板,PCR扩增具有良好免疫原性的片段基因,并定向克隆至表达载体pET30a(+)中,进行重组表达,SDS-PAGE和Western blot表明,所获得重组自溶素具有良好反应原性。

关键词：猪链球菌2型感染相关因子自溶素

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