检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2011年第1期41卷 14-18页

作者：陈念劬王先炜李玉峰姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的T... 详细信息

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的TCID50达10-7.0/mL,病毒效价和生产速度明显高于PK15母细胞,且没有支原体、猪圆环病毒1型、牛黏膜病病毒、猪瘟病毒和脑心肌炎病毒等外源性微生物污染,为PCV2体外增殖和生物学特性的研究奠定了重要基础。

关键词：猪圆环病毒2型 PK15细胞克隆

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用单克隆抗体展示猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白在菌体表面的形态和分布

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中国农业科学 2004年第1期37卷 143-147页

作者：曾巧英陆承平兰州730070 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院

用猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1全菌免疫Balb/c小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 / 0细胞融合 ,以电泳纯溶菌酶释放蛋白 (MRP)为抗原 ,间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化 ,剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆 ,获得 3株特异针... 详细信息

用猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1全菌免疫Balb/c小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 / 0细胞融合 ,以电泳纯溶菌酶释放蛋白 (MRP)为抗原 ,间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化 ,剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆 ,获得 3株特异针对MRP的单克隆抗体细胞株 3A3、4D5和 6B4。将HA980 1和HEp 2细胞共孵育 ,使细菌粘附于细胞表面 ,用 3株MRP单克隆抗体联合介导FITC标记HA980 1菌体表面的MRP ,激光共聚焦显微观察 ,代表MRP的荧光图像显示 ,MRP是一线形表面大分子 ,一端锚定在细胞壁 ,另一端向空中伸展 ,其分布状态有单在和丛集 2种

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白单克隆抗体激光共聚焦显微术

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抗猪SIgA单克隆抗体的研制

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 390-393页

作者：吴胜昔姜平李玉峰南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG... 详细信息

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为79.7%,第2次融合率为60.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体,初检阳性率分别为4.1%、16.8%。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实,所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,CA6分泌抗体属IgM、κ型,而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。

关键词：猪SIgA 单克隆抗体层析技术

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猪伪狂犬病毒引起PK-15细胞自噬的研究

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南京农业大学学报 2018年第4期41卷 701-707页

作者：许长萌王志建王咪刘倩玉王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬... 详细信息

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。

关键词：自噬猪伪狂犬病毒(PRV) LC3 自噬流复制 Beclin-1

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上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染

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中国兽医学报 2003年第5期23卷 442-444页

作者：李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断和免疫重点实验室江苏南京210095

上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪... 详细信息

上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪圆环病毒 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )部分基因的特异性 PCR引物 ,通过 RT- PCR和 PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出 PRRSV和 PCV- 2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查 ,证实上海地区出现PRRSV和 PCV-

关键词：上海地区猪繁殖呼吸综合征病毒 2型猪圆环病毒混合感染 RT-PCR PCR 症状流行病学

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脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

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中国兽医学报 2015年第2期35卷 242-246页

作者：蒋康富白娟李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和... 详细信息

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P<0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P>0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。

关键词：脑心肌炎病毒灭活疫苗免疫效力

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猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

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畜牧与兽医 2009年第10期41卷 70-72页

作者：倪莅文刘珂夏叶罗丽双刘晓东桂红兵庞然周斌陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件,结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上,大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化,Western-blo... 详细信息

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件,结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上,大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化,Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性。将融合蛋白与福氏佐剂制成亚单位疫苗后免疫试验小鼠,并与E2 A/D蛋白、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)进行免疫效果比较,结果显示E2 A/D-GM-CSF亚单位疫苗免疫小鼠后能够产生抗猪瘟抗体,并且抗体水平明显高于E2-A/D免疫组和HCLV免疫组。研究表明GM-CSF经融合表达后对E2-A/D蛋白有显著的免疫增强作用。

关键词：猪瘟病毒 E2基因粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子原核表达免疫增强

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猪链球菌2型溶血素重组亚单位疫苗的研制

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畜牧与兽医 2009年第10期41卷 57-59页

作者：吉利伟蔡伟刚刘民星杨秋实孔建涛范红结南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列,利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列,设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板,PCR扩增后定向克隆至pET-3... 详细信息

根据已报道的猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)重要毒力因子溶血素的基因序列,利用DNAstar软件选择抗原性好的一段基因序列,设计并合成该段序列的1对特异性引物。以四川强毒株ZY05719的基因组为模板,PCR扩增后定向克隆至pET-32 a表达载体中;重组质粒转化至原核系统大肠杆菌B21中,经诱导表达目的蛋白后,利用小鼠进行免疫效果的测定和佐剂筛选,结果使用ISA206佐剂的溶血素(Hly)蛋白亚单位疫苗保护率高。

关键词：猪链球菌2型溶血素克隆原核表达免疫效果

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2015-2016年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征的分子流行病学调查

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畜牧与兽医 2017年第6期49卷 153-156页

作者：徐晓杰张乔亚谈晨白娟姜平南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,所有的毒株均属美洲型,分为4个亚型,其中2个毒株形成一个新的亚型Ⅳ;6个毒株与美国NADC30株有高度同源性,形成了亚型Ⅲ。研究表明我国PRRSV毒株存在遗传多样性,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了理论依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因亚型

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4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

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中国兽医杂志 2011年第9期47卷 40-42页

作者：庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染... 详细信息

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。

关键词：猪瘟病毒抗体试剂盒商品化动物传染病世界动物卫生组织检测病毒感染

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