检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2004年第2期24卷 114-116页

作者：王晓泉姜平丁铲许家荣南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院家禽所江苏扬州225003

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBD... 详细信息

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

关键词：真核表达质粒 CpG寡核苷酸免疫传染性法氏囊病病毒

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传染性腔上囊病病毒HN01超强毒株VP2基因的克隆和序列分析

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 62-66页

作者：贾赟王旭东赵玉军陈溥言沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52 70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDVVP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT PCR扩增出了1.45kb的cDNA产物,将扩... 详细信息

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52 70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDVVP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT PCR扩增出了1.45kb的cDNA产物,将扩增的IB DVHN01株VP2基因克隆于pMD18 T载体上,获得了pMD18 T VP2重组质粒。将IBDVHN01株VP2基因序列测定结果与已发表的其他IBDV毒株VP2基因序列进行分析比较,绘出系统进化树。结果表明,HN01株与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM、香港超强毒株HK46等非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。

关键词：传染性腔上囊病病毒 HN01超强毒株 VP2基因克隆序列分析

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鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定

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中国病毒学 2004年第1期19卷 32-35页

作者：蔡梅红曹瑞兵周斌谈国蕾杨松陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 沈阳农业大学动物医学院辽宁沈阳110161

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱... 详细信息

以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组。通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间。把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱性口炎病毒进行攻毒,测出鸡重组干扰素的活性单位为1.0?06U/mL,获得了满意结果。

关键词：非融合性表达病毒抑制鸡胚成纤维细胞鸡γ干扰素成熟蛋白基因

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鸡马立克氏病病毒糖蛋白gB基因的表达及基因免疫

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中国病毒学 2003年第3期18卷 275-278页

作者：丁巧玲李建军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开发实验室江苏南京210095 佛山科技学院动物医学系广东南海528231

将马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)gB基因插入真核表达载体pcDNA3中,经酶切和PCR鉴定为正向插入了gB基因的重组质粒,命名为pcDNA3-gB。体外转染COS-7细胞,经间接免疫荧光染色证实转染pcDNA3-gB后的COS-7细胞内有糖蛋白B... 详细信息

将马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)gB基因插入真核表达载体pcDNA3中,经酶切和PCR鉴定为正向插入了gB基因的重组质粒,命名为pcDNA3-gB。体外转染COS-7细胞,经间接免疫荧光染色证实转染pcDNA3-gB后的COS-7细胞内有糖蛋白B的表达。用pcDNA3-gB对AA肉用雏鸡腿部肌肉注射,进行一免。间隔2周后,用pcDNA3-gB再加强免疫一次。之后2周攻毒,观察免疫保护效果。结果表明,MDV gB基因DNA免疫可以诱导鸡体产生免疫保护,免疫保护指数为72.2％。

关键词：鸡马立克氏病病毒糖蛋白 gB基因表达基因免疫

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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生物工程学报 2010年第5期26卷 595-603页

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 南京军区军事医学研究所南京210002

将近期引起传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒p... 详细信息

将近期引起传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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几种PCR方法在克隆鸭肠炎病毒未知基因中的应用

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1842-1848页

作者：潘华奇曹瑞兵陈溥言刘磊王书锦潘光炎胡江春中国科学院沈阳应用生态研究所辽宁沈阳110016 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

以DEV基因组DNA为模板，用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR，获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段，DNA序列分析发现包含9个开放阅读框，将这些序列提交GenBank分别获得的登录... 详细信息

以DEV基因组DNA为模板，用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR，获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段，DNA序列分析发现包含9个开放阅读框，将这些序列提交GenBank分别获得的登录号为：EF554396～EF554403。结果表明，多种PCR方法联合使用可以高效的实现对鸭肠炎病毒未知基因的克隆。

关键词：鸭肠炎病毒未知基因简并PCR Targeted gene walking PCR 热不对称交错PCR Long—PCR

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致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

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中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 48-55页

作者：何再平王权陈永军刘迎春韩先干王少辉白雪瑞刘永杰蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性... 详细信息

根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。

关键词：副溶血弧菌种特异性基因溶血素基因多重PCR 检测

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副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用

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中国动物传染病学报 2015年第6期23卷 56-62页

作者：李欣彤陈永军刘迎春白雪瑞王少辉韩先干刘永杰王权蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子。本研究根据已发表基因序列(Gen Bank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧菌SHJLA株基因组DNA为模板,... 详细信息

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子。本研究根据已发表基因序列(Gen Bank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧菌SHJLA株基因组DNA为模板,扩增编码TDH蛋白的基因,克隆至表达质粒p ET28a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为576 bp。重组原核表达质粒p ET28a-tdh转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导可表达分子量约为27 k Da的融合蛋白,主要以包涵体形式表达。对包涵体进行复性,Western blot分析表明经过复性后的重组蛋白能够被感染副溶血弧菌SHJLA株的小鼠血清识别。重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1:256 000以上。将该多抗初步应用于斑点-ELISA(DotELISA)方法的建立,TDH阳性的致病性副溶血弧菌检测到阳性斑点,而TDH阴性的副溶血弧菌及其他细菌未检测到特异性斑点。本研究可为深入研究TDH的蛋白功能,建立致病性副溶血弧菌免疫学快速诊断方法以及保护性疫苗的研制提供研究基础。

关键词：副溶血弧菌直接溶血素蛋白表达斑点-ELISA

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疫苗制造新技术

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中国家禽 2002年第5期24卷 1-5页

作者：姜平丁铲南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省家禽科学研究所

传统疫苗是用于传染性疾病的,但新技术已将其扩展到非传染性疾病疫苗、治疗性疫苗和生理调控疫苗。本文将使您对各种不同类型的疫苗的主要制造技术、关键问题及其免疫目的有一个全面的了解。

关键词：疫苗制造技术免疫学技术主动性疫苗被动性疫苗活疫苗死疫苗 DNA疫苗

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PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

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畜牧与兽医 2005年第11期37卷 7-10页

作者：夏向荣柏庆荣柏坤桃黄灿平姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 江苏省高邮市畜牧兽医站江苏高邮225600

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测... 详细信息

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。

关键词： PRRSV 抗体诊断竞争ELISA

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