检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2013年第5期41卷 156-158页

作者：刘宇卓刘飞李银黄欣梅赵冬敏韩凯凯江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

取鹅细小病毒(GPV)LH株毒液,通过氯仿去除杂蛋白,用氯化钠与聚乙二醇-6000相结合方法粗提后,经蔗糖密度梯度离心纯化。通过PCR方法对不同浓度蔗糖溶液进行检测,取纯化毒液进行蛋白电泳及电镜观察,并无菌接种12日龄鹅胚,对死亡胚尿囊液进... 详细信息

取鹅细小病毒(GPV)LH株毒液,通过氯仿去除杂蛋白,用氯化钠与聚乙二醇-6000相结合方法粗提后,经蔗糖密度梯度离心纯化。通过PCR方法对不同浓度蔗糖溶液进行检测,取纯化毒液进行蛋白电泳及电镜观察,并无菌接种12日龄鹅胚,对死亡胚尿囊液进行PCR鉴定。试验结果显示:浓缩纯化后的GPV主要分布在50%～65%蔗糖浓度区间,病毒的蛋白含量为216μg/L;电镜观察结果表明,病毒粒子分为实心和空心2种,直径大小在20～22 nm;经SDS-PAGE电泳可看到多个条带,主要蛋白大小与病毒蛋白VP1、VP2和VP3相对应。纯化后的病毒接种敏感鹅胚仍可致其100%死亡,死亡胚具有特征性的病变,尿囊液经PCR鉴定,呈GPV核酸阳性。本试验所用方法获得的纯化GPV病毒液的纯度高且保持了该病毒的毒力特性,是一种方便可行的纯化该病毒的方法。

关键词：鹅细小病毒蔗糖密度梯度纯化生物学特性

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1株鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

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江苏农业科学 2011年第6期39卷 374-376页

作者：钮慧敏李银黄欣梅刘宇卓张敬峰李彤彤刘飞李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻... 详细信息

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻毒死亡鸭体内分离到Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。

关键词：鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定序列分析病毒回归试验

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H9N2亚型禽流感病毒的纯化及间接ELISA方法的建立

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江苏农业科学 2011年第4期39卷 264-266页

作者：牛囡囡李银刘宇卓刘飞叶焕春李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将H9N2亚型禽流感病毒FT株病毒液经过红细胞吸附释放法纯化后作为ELISA包被抗原,建立H9N2亚型禽流感抗体间接ELISA方法。试验结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速检测禽流感抗体提供了便利途径。

关键词： H9N2亚型禽流感间接ELISA 抗体红细胞吸附释放法

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鹅副粘病毒HN蛋白的原核表达与免疫学鉴定

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浙江农业学报 2012年第2期24卷 217-220页

作者：李彤彤李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓张敬峰刘飞李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

以GenBank登录的鹅源副粘病毒GPMV ZJI株基因组全序列为模板,在HN基因开放阅读框上下游设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到HN基因,将目的基因克隆至pET32a表达载体上,转化至BL21中,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表... 详细信息

以GenBank登录的鹅源副粘病毒GPMV ZJI株基因组全序列为模板,在HN基因开放阅读框上下游设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到HN基因,将目的基因克隆至pET32a表达载体上,转化至BL21中,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达。由结果可知,通过RT-PCR法扩增出HN基因,大小与预期一致。SDS-PAGE和Western-blot均得到预期条带,说明pET32a表达载体在BL21中成功表达了HN蛋白,为后续相关免疫学研究奠定基础。

关键词：鹅副粘病毒 HN基因原核表达

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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江苏农业学报 2009年第2期25卷 291-295页

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚... 详细信息

将*** O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎，免疫BALB／c小鼠，制备免疫脾细胞；与SP2／0骨髓瘤细胞融合后，获得7株分泌抗*** O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株，分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3，腹水效价均为1×10^11；C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2，腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示，F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位，而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明，c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带，而其它4株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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猪肺炎支原体基因组学研究进展

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中国兽医杂志 2010年第4期46卷 63-65页

作者：祝永琴刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

一个生物的全部DNA序列称作该生物的基因组(geneome),基因(gene)是基因组中有关蛋白质遗传信息的编码单位。基因组学是关于基因组结构、基因功能以及基因组比较的一门科学。[第一段]

关键词：基因组学猪肺炎支原体 DNA序列基因组结构基因组比较遗传信息基因功能蛋白质

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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定

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江苏农业学报 2009年第3期25卷 568-571页

作者：潘群兴王永山刘洁夏兴霞何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的... 详细信息

利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在***21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在***21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。

关键词：肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性

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兔出血症病毒双夹心ELISA检测方法的建立

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江苏农业学报 2011年第3期27卷 571-576页

作者：董婷王芳熊富强王先炜范志宇胡波王敏敏李洪广江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点歼放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立特异性好、敏感度高、稳定可靠的检测兔出血症病毒的双夹心ELISA方法。该试验制备了兔出血症病毒多抗和小鼠腹水单抗,并将他们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感度试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并同时用双... 详细信息

为建立特异性好、敏感度高、稳定可靠的检测兔出血症病毒的双夹心ELISA方法。该试验制备了兔出血症病毒多抗和小鼠腹水单抗,并将他们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感度试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并同时用双夹心ELISA和血凝试验(HA)对52份待测兔肝脏样品进行检测,比较这两种方法的符合率。结果显示:兔出血症病毒多抗最佳稀释度为1∶400,浓度为19.50 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为2.86 mg/L。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高。对52份待检兔肝脏样品的检测结果显示:双夹心ELISA和HA试验的阳性检出率分别为82.7%(43/52)和75.0%(39/52),双夹心ELISA与HA试验的符合率为90.7%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。以上试验结果表明该双夹心ELISA方法是检测RHDV的一种特异、敏感、快速、经济的免疫学检测技术。

关键词：兔出血症病毒双夹心ELISA 多抗单抗

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反向疫苗学在猪病疫苗研究中的应用

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畜牧与兽医 2011年第11期43卷 96-99页

作者：缪芬芳白方方王海燕刘茂军熊祺琰冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反... 详细信息

反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反向疫苗学的基本流程,并对近几年反向疫苗学在猪病病原微生物方面的研究进展进行了综述。

关键词：反向疫苗学基因组病原微生物猪病疫苗

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性

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江苏农业学报 2011年第6期27卷 1300-1304页

作者：赵攀登张雪寒何孔旺姜平卢维彩栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬王小敏郭容利周俊明吕立新俞正玉茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。... 详细信息

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin蛋白质 Tir-Tccp蛋白质免疫原性小鼠

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