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南京农业大学学报 2025年第2期48卷 410-418页

作者：吴斌凤高兴孙乃岩仇亚伟张金秋苗晋锋南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene, STING)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起线粒体功能障碍的影响,为***引起的乳腺炎防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)和***... 详细信息

[目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene, STING)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起线粒体功能障碍的影响,为***引起的乳腺炎防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)和***(ATCC 29213)为研究对象,细胞试验分为对照组(Control、STING抑制剂C-176单独处理和线粒体分裂抑制剂Mdivi-1单独处理)、感染组(***)和2个处理组(C-176+***和Mdivi-1+***)。分别检测乳腺上皮细胞中STING通路的激活、线粒体功能相关蛋白的表达水平、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)以及线粒体形态的变化等。动物试验分为对照组(C57BL/6野生型WT小鼠和C57BL/6 STING基因敲除ΔSTING小鼠)、感染组(WT+***和ΔSTING+***),分别检测肝脏组织和乳腺组织中的总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase, NAGase)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)等生化指标。[结果]***感染乳腺上皮细胞导致STING通路激活,线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)Ser616位点磷酸化水平升高(P<0.05),线粒体融合蛋白1(mitofusion 1,MFN1)和线粒体融合蛋白2(mitofusion 2,MFN2)表达量降低(P<0.05);而C-176和Mdivi-1处理均降低了DRP1 Ser616的磷酸化水平(P<0.01),恢复了MFN1和MFN2的表达量(P<0.05),缓解***引起的线粒体碎片化;同时,C-176和Mdivi-1处理均显著抑制***感染诱导的乳腺上皮细胞中mROS水平升高和MMP的异常下降(P<0.05),以及mtDNA拷贝数的下降(P<0.05)。此外,缺失STING基因可以恢复***感染引起的小鼠肝脏和乳腺中T-AOC水平(P<0.01),降低NAGase活性与MDA含量(P<0.05)。[结论]抑制STING可以改善***感染乳腺上皮细胞诱导的线粒体功能障碍,缺失STING基因可以缓解***感染引起小鼠肝脏和乳腺的组织损伤和氧化应激。

关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌干扰素基因刺激因子线粒体功能障碍

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METTL3介导的GPX4 m6A修饰在乳房链球菌感染诱导牛乳腺上皮细胞铁死亡的机制研究

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南京农业大学学报 2025年

作者：闫家洵孙乃岩于睿刘家睿杨成森苗晋锋南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室

[目的] 乳房链球菌（Streptococcus uberis， S. uberis）感染是奶牛乳腺炎的重要诱因，但其通过表观转录调控诱导宿主细胞铁死亡的机制尚不明确。本研究旨在解析甲基转移酶样3（Methyltransferase like 3，简称METTL3）介导的m6A修饰... 详细信息

[目的] 乳房链球菌（Streptococcus uberis， S. uberis）感染是奶牛乳腺炎的重要诱因，但其通过表观转录调控诱导宿主细胞铁死亡的机制尚不明确。本研究旨在解析甲基转移酶样3（Methyltransferase like 3，简称METTL3）介导的m6A修饰在S. uberis感染诱导牛乳腺上皮细胞铁死亡中的作用，并筛选靶向METTL3的天然抑制剂。[方法] 以牛乳腺上皮细胞（MAC-T）为模型，通过S. uberis感染（MOI=10，5 h）构建铁死亡模型。采用CCK-8、激光共聚焦显微镜、生化检测(MDA、Fe2+、GSH)、Western blot、m6A dot-blot及放线菌素D阻断试验，分析METTL3对GPX4 mRNA稳定性及铁死亡的调控作用。结合虚拟筛选和分子对接技术，从天然产物库中筛选METTL3抑制剂，并通过RT-qPCR和Western blot验证其抗炎及抗铁死亡效果。[结果] S. uberis感染显著上调METTL3表达及细胞整体m6A水平（P<0.05），通过靶向GPX4 mRNA的m6A修饰降低其稳定性（P<0.01），抑制GPX4蛋白表达，引发脂质过氧化（MDA，GSH，P<0.01）和铁死亡。METTL3抑制剂(S-腺苷-L-高半胱氨酸，SAH，45 mmol·L-1)或siRNA敲低METTL3可恢复GPX4 mRNA稳定性（P<0.01）及蛋白表达（P<0.01），显著缓解铁死亡（P < 0.05）。分子对接显示积雪草苷与METTL3催化域（THR-319/ARG-379）具有高亲和力（结合能-15.0 kcal·mol?1），其处理显著抑制炎症因子（IL-1β、IL-6，P<0.01）并恢复GPX4表达（P<0.01）。[结论] S. uberis通过METTL3-m6A-GPX4轴诱导牛乳腺上皮细胞铁死亡；积雪草苷可通过靶向抑制METTL3缓解上述过程，为抗乳腺炎治疗提供新策略。

关键词： METTL3 乳房链球菌铁死亡 m6A修饰积雪草苷

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染料木黄酮缓解棕榈酸诱导的鸡胚原代肝细胞脂代谢紊乱的机制研究

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南京农业大学学报 2025年

作者：贺复亚王慧慧公苹赵淑娟马海田李龙龙南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室

[目的]本文旨在探究染料木黄酮（GEN）对棕榈酸（PA）诱导的鸡胚原代肝细胞脂代谢紊乱的调控作用及潜在机制。[方法]选用不同浓度GEN预处理PA诱导的鸡胚原代肝细胞，随后采用G蛋白偶联雌激素受体（GPR30）或AMP-依赖性蛋白激酶（AMPK）... 详细信息

[目的]本文旨在探究染料木黄酮（GEN）对棕榈酸（PA）诱导的鸡胚原代肝细胞脂代谢紊乱的调控作用及潜在机制。[方法]选用不同浓度GEN预处理PA诱导的鸡胚原代肝细胞，随后采用G蛋白偶联雌激素受体（GPR30）或AMP-依赖性蛋白激酶（AMPK）的抑制剂或拮抗剂等预处理鸡胚原代肝细胞，采用比色法检测细胞活力及甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）含量，采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测脂代谢和线粒体功能相关因子的表达水平。[结果]与对照组相比，0.3 mmol·L-1PA处理36 h以及0.4和0.5 mmol·L-1PA处理24～48 h显著降低鸡胚原代肝细胞活力；GEN处理显著缓解PA诱导的鸡胚原代肝细胞TG和TC含量的增加；GEN处理显著增加PA诱导的鸡胚原代肝细胞脂肪分解相关基因的表达，而明显降低脂肪合成相关基因的表达；GEN通过激活AMPK减少脂肪酸合成相关因子的活性，增加脂肪酸分解和线粒体氧化损伤相关因子的表达；GEN通过激活GPR30诱导AMPK信号的活化。[结论]GEN通过激活GPR30-AMPK信号通路调节脂肪代谢和线粒体氧化损伤途径中关键因子的表达，最终缓解PA诱导的鸡胚原代肝细胞脂代谢紊乱和线粒体氧化损伤。

关键词：染料木黄酮脂肪肝出血综合征鸡胚原代肝细胞脂代谢紊乱 AMPK信号通路

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大豆黄酮影响青春期小鼠乳腺发育的潜在机制

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 36-43页

作者：谢娜娜黄心河张亚锋张源淑韩正康南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠,探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制,为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠,随... 详细信息

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠,探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制,为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠,随机均分为3组:对照组,腹腔注射无菌的PBS;DZ处理组,腹腔注射DZ(100 mg·kg^(-1));阳性对照组,腹腔注射E2(0.2 mg·kg^(-1)),每组16只。分别在饲养至21和28 d,每组随机选取8只,采集血液,测定血液中E2含量,处死后摘取乳腺,测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。取同侧部位乳腺制作组织学切片,免疫组化检测核增殖抗原蛋白(PCNA)的表达,Western blot法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和D3(cyclin D3)、ERβ蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,DZ处理显著增加饲养21~28 d小鼠体重及采食量;增加21 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量,但未达到显著水平(P>0.05);显著增加28 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量(P<0.05);E2处理血液中E2含量均极显著增加。DZ处理对饲养21 d小鼠乳腺指数影响较小,显著增加饲养28 d小鼠乳腺指数(P<0.05);E2处理具有相同趋势(P<0.05)。HE染色结果显示,DZ和E2处理均极显著增加饲养21和28 d小鼠乳腺组织小叶内的导管数(P<0.01)和乳腺组织PCNA阳性细胞数(P<0.01)。Western blot结果显示,DZ及E2处理均可上调小鼠乳腺组织cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达,显著上调饲养28 d小鼠cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达(P<0.05)。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺发育,促进乳腺细胞增殖和分裂,这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。

关键词：大豆黄酮(DZ) 雌二醇(E2) 青春期小鼠乳腺发育细胞周期

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衣康酸二甲酯对H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍的调节作用及机制研究

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 28-35页

作者：闫巍元张锐马海田南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-1... 详细信息

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-12细胞)为研究对象,试验分为对照组(NC)、0.5 mmol·L^(-1)DMI处理组、150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组和0.5 mmol·L^(-1)DMI+150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组。分别检测AML-12细胞中ATP含量、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)等生化指标,并用免疫印迹法检测AMP-依赖性蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子蛋白的表达水平。[结果]0~0.5 mmol·L^(-1)DMI和0~150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)对细胞活力无显著影响。DMI处理显著抑制H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞中mROS水平升高以及MMP的异常下降,以及ATP含量和mtDNA拷贝数的下降(P<0.01)。DMI处理极显著抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠肝细胞中p-AMPK、NAD-依赖性去乙酰化酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白水平的下降(P<0.01),而AMPK抑制剂Compound C预处理则可逆转这一效应。[结论]DMI通过激活AMPK-SIRT1-PGC1α信号通路缓解H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍。

关键词：衣康酸二甲酯线粒体功能障碍 AMPK-SIRT1-PGC1α信号轴

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植物雌激素大豆黄酮对小鼠乳腺上皮细胞乳成分合成和细胞增殖的影响及机制

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畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 417-429页

作者：黄心河李浩楠周潇徐佳婧张源淑韩正康南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室南京210095

本试验旨在研究植物雌激素大豆黄酮(daidzein, DZ)对小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev乳糖、乳蛋白、乳脂肪合成及细胞增殖的影响,探讨相关的调节作用。首先用不同浓度DZ(0~1 000μmol·L^(-1))处理EpH4-Ev细胞6、12、24、48 h,通过检测细... 详细信息

本试验旨在研究植物雌激素大豆黄酮(daidzein, DZ)对小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev乳糖、乳蛋白、乳脂肪合成及细胞增殖的影响,探讨相关的调节作用。首先用不同浓度DZ(0~1 000μmol·L^(-1))处理EpH4-Ev细胞6、12、24、48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度及时间;试验分为对照组(0μmol·L^(-1) DZ处理)、低浓度组(10μmol·L^(-1) DZ处理)、中浓度组(20μmol·L^(-1) DZ处理)、高浓度组(40μmol·L^(-1) DZ处理),并以生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,37℃、5%CO_(2)培养12 h后,进行如下试验:(1)测定细胞及分泌上清中甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量及脂滴染色变化;(2)检测细胞增殖与凋亡相关蛋白、乳成分合成相关蛋白的表达变化;(3)检测PI3K/AKT-mTOR信号通路关键蛋白的磷酸化水平;(4)流式细胞技术分析细胞凋亡率与细胞周期分布情况。结果显示:(1)与对照组相比,2.5~80.0μmol·L^(-1 ) DZ处理后,细胞活力极显著提高(P<0.01),其中20μmol·L^(-1 )DZ处理提高效果最为显著,结合实验室前期结果,选择DZ作用的低、中和高浓度分别为10、20和40μmol·L^(-1),作用时间为12 h。(2)与对照组相比,中浓度及高浓度组DZ及E2处理后极显著提高了EpH4-Ev细胞及分泌上清中TG和GLU的含量,促进了脂滴的合成(P<0.01)。(3)与对照组相比,不同浓度DZ处理后葡萄糖转运载体1(GLUT1)和β-酪蛋白(β-casein)的表达均极显著升高(P<0.01),同时DZ及E2处理后均提高脂肪酸合成酶(FASN)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达。(4)与对照组相比,不同浓度DZ及E2处理后均增加了G2/M期和S期的细胞占比,上调了增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1、D3、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,同时中浓度DZ组极显著增加了Bcl-2/Bax比值(P<0.01),细胞凋亡率降低。(5)三个浓度DZ及E2处理后均上调了PI3K/AKT-mTOR信号通路中p-PI3K、p-mTOR、p-AKT的磷酸化水平。结果表明:DZ处理可促进乳腺上皮细胞的增殖及乳成分的合成。其机制与上调细胞增殖蛋白的表达、降低细胞凋亡率,激活PI3K/AKT-mTOR通路有关。

关键词：植物雌激素大豆黄酮小鼠乳腺上皮细胞乳成分合成乳腺上皮细胞的增殖

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二脒那秦通过内源性激活ACE2抑制AngⅡ-TGF-β1通路缓解小鼠肺纤维化

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畜牧兽医学报 2023年第6期54卷 2631-2640页

作者：曹西月纪晓霞张崇昊张亚峰陈雨涛张源淑南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照... 详细信息

本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)和二脒那秦处理组(DIZE组)。除CON组外,其余2组小鼠一次性气管内注射博来霉素(5 mg·kg^(-1))建立肺纤维化损伤模型。造模1 d后,DIZE组小鼠给予DIZE[15 mg·(kg·d)^(-1)]灌胃处理,CON组和MOD组小鼠同等剂量灌胃生理盐水。连续灌胃28 d,采血后,处死所有小鼠,取肺组织,进行如下试验:(1)肺组织称重,计算小鼠肺系数;HE和Masson染色观察肺病理组织学变化;碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的含量;(2)间接ELISA法检测血清中AngⅡ和Ang 1-7含量;(3)RT-qPCR及Western blot法检测肺组织中纤维化相关因子基因和蛋白等的表达水平。结果表明:(1)与CON组相比,MOD组小鼠肺系数及羟脯氨酸含量极显著或显著升高(P<0.01&P<0.05);肺组织出现明显病理变化,主要表现肺泡塌陷,炎性细胞浸润,肺泡间隔充血、增厚,有大量胶原纤维沉积。经DIZE处理后肺系数及羟脯氨酸含量显著或极显著降低(P<0.05&P<0.01);肺纤维化程度明显减轻;(2)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中ACE2蛋白表达下调,血清中AngⅡ含量极显著升高(P<0.01),Ang 1-7含量极显著降低(P<0.01);DIZE处理逆转了以上变化;(3)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中Col1a1和Col3a1基因表达极显著上调(P<0.01),α-SMA及TGF-β1基因和蛋白表达均极显著上调(P<0.01),上皮细胞的特征蛋白E-cadherin蛋白表达极显著下调(P<0.01);与MOD组相比,DIZE组缓解了以上变化。一次性气管内注射博来霉素,28 d后可成功诱导小鼠肺纤维化损伤,高水平的AngⅡ可能协同TGF-β1参与了小鼠的肺纤维化;DIZE可能通过内源性激活ACE2,降低AngⅡ的高水平,对小鼠的肺纤维化具有一定的缓解作用。

关键词：小鼠二脒那秦血管紧张素转化酶2 AngⅡ-TGF-β1通路肺纤维化

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乳房链球菌感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1766-1776页

作者：卢劲晔高亚兵韩心茹刘钰臻赵家玉江苏农牧科技职业学院泰州225300 南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,***)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢... 详细信息

代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,***)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响,本研究以***和乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)为研究对象,采用靶向氨基酸代谢组学技术对细胞中的氨基酸进行定量分析,并采用RT-qPCR和Western blot方法对关键氨基酸——精氨酸代谢通路关键酶进行验证。结果表明:***感染细胞后,细胞中甘氨酸、苏氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的含量被显著上调(P<0.05),谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、赖氨酸和天冬氨酸的含量被显著下调(P<0.05),其中,精氨酸含量变化极显著(P<0.000 1,VIP>1.2),天冬酰胺和谷氨酰胺两种生糖氨基酸显著上升(P<0.05),赖氨酸和亮氨酸两种生酮氨基酸含量显著下降(P<0.05)。进一步研究精氨酸分解代谢通路发现:***感染乳腺上皮细胞会显著上调精氨酸代谢关键酶NOS2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调ARG1的表达水平(P<0.05)。与对照组相比,***感染乳腺后,显著上调了细胞中促炎因子IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。综上所述,***感染造成乳腺上皮细胞氨基酸代谢紊乱,加速细胞内精氨酸耗竭,诱发炎症反应。结果提示,精氨酸在宿主抵抗***感染过程中具有重要作用,可作为奶牛乳腺炎早期诊断和未来防治的突破口。

关键词：乳房链球菌氨基酸代谢精氨酸乳腺炎

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植物雌激素大豆黄酮对牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响

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动物营养学报 2022年第4期34卷 2645-2653页

作者：谢娜娜闫书平张崇昊曹西月张源淑南京农业大学动物医学院农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓... 详细信息

本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度;然后采用不同浓度DZ(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)处理MAC-T细胞12、24、36和48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用时间;再用生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,对各处理细胞进行细胞计数,采用Western blot分析细胞内细胞周期相关蛋白、ERβ蛋白相对表达量,并用流式细胞技术分析细胞周期变化。结果表明:1)与对照组相比,2.5和5.0μmol/L DZ处理细胞均能提高MAC-T细胞活力,其中5.0μmol/L DZ处理显著提高细胞活力(P<0.05);而在浓度高于10.0μmol/L后,细胞活力均有下降,因此确定了DZ作用的低、中和高浓度分别为2.5、5.0和10.0μmol/L;而与对照组相比,处理12 h后,5.0μmol/L DZ处理使得细胞活力显著提高(P<0.05),其他2个浓度处理对细胞活力无显著影响(P>0.05),因此确认DZ作用时间为12 h。2)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理使得细胞数量显著增加(P<0.05);2.5μmol/L DZ处理使得细胞数量有所增加,但差异不显著(P>0.05);E2处理使得细胞数量略低于各DZ处理,但差异不显著(P>0.05)。3)Western blot结果显示,与对照组相比,3个浓度DZ处理均可上调增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白D3(CyclinD3)和ERβ的蛋白相对表达量,其中5.0μmol/L DZ处理显著上调PCNA、CyclinD1和ERβ的蛋白相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时极显著提高了S期细胞占比(P<0.01);E2处理与5.0μmol/L DZ处理趋势相同,均极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时提高了S期细胞占比(P>0.05)。结果提示,植物雌激素DZ具有类雌激素样作用,可通过上调ERβ蛋白表达,提高G2-M细胞占比,阻滞细胞周期在S期,从而促进乳腺细胞的增殖。

关键词： MAC-T细胞植物雌激素大豆黄酮细胞增殖细胞周期

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植物雌激素大豆黄酮对断奶期小鼠乳腺退化的减缓作用研究

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畜牧与兽医 2024年第4期56卷 41-48页

作者：黄心河张亚峰伍钢陈雨涛周潇张源淑韩正康南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

旨在研究植物雌激素大豆黄酮(DZ)对断奶期小鼠乳腺退化的影响。选取48只孕鼠,随机分为对照组(CON组),腹腔注射无菌PBS;大豆黄酮组(DZ组),每天每kg体重腹腔注射DZ 100 mg,连续处理1周。孕鼠正常分娩后,在哺乳期第10天强制断奶。各组分别... 详细信息

旨在研究植物雌激素大豆黄酮(DZ)对断奶期小鼠乳腺退化的影响。选取48只孕鼠,随机分为对照组(CON组),腹腔注射无菌PBS;大豆黄酮组(DZ组),每天每kg体重腹腔注射DZ 100 mg,连续处理1周。孕鼠正常分娩后,在哺乳期第10天强制断奶。各组分别在断奶第1、3、7天选取8只小鼠取血后处死,取所有乳腺组织,称重计算乳腺指数;ELISA法测定血液中雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)的浓度;常规法制作乳腺组织切片,进行HE染色;Western blot及荧光定量PCR(RT-qPCR)分析乳腺组织内促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2的蛋白与基因表达水平。结果:与CON组相比,DZ组增加了断奶1 d母鼠的乳腺指数,但降低断奶3 d、7 d的乳腺指数;与CON组相比,断奶1 d时,DZ组极显著提高母鼠血清中PRL和IGF-Ⅰ浓度(P<0.01),断奶3 d时DZ组极显著提高了PRL和E2浓度(P<0.01),显著提高断奶7 d母鼠血清中E2浓度(P<0.05);HE染色结果显示,与CON组相比,DZ组显著降低断奶母鼠乳腺组织中脂肪细胞面积比(P<0.05),提高腺泡的面积比(P>0.05);与CON组相比,DZ组极显著上调断奶期乳腺组织Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),极显著下调断奶1 d Bax基因的表达水平(P<0.01),断奶3 d时极显著下调Bax蛋白与基因的表达水平(P<0.01),断奶7 d时极显著上调乳腺中Bax和Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),在断奶1 d和3 d,Bcl-2/Bax比值均极显著升高(P<0.01)。本研究表明,DZ处理可升高断奶母鼠血清中IGF-Ⅰ、PRL及E2浓度,上调乳腺中Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡,降低脂肪细胞所占面积比,提示DZ可能通过抑制母鼠乳腺细胞凋亡,延缓乳腺早期退化。

关键词：植物雌激素大豆黄酮断奶期乳腺退化小鼠

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