检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2014年第7期54卷 737-745页

作者：曹冬梅吉文汇严亚贤王恒安孙建和陆承平上海交通大学农业与生物学院、上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院、农业部动物疫病诊断与免疫开放重点实验室江苏南京210095

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD... 详细信息

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD及MG1655△fliE,并将flhDC片段、fliA片段、fliD片段和fliE片段连接pUC18后分别转化相应的突变株,得到相应的互补菌株。通过Stx2噬菌体ΦMin27的感染获得各缺失株的溶原株MG1655△flhDCФMin27、MG1655△fliAФMin27、MG1655△fliDФMin27及MG1655△fliEФMin27。随后测定了野生株、缺失株、互补株和溶原株的运动能力,并通过荧光定量PCR分析了flhDC缺失前后野生株和溶原株其他运动相关基因表达量的变化。【结果】Stx2噬菌体ФMin27溶原感染可促进MG1655的fliA和fliD基因的表达,增强宿主菌MG1655的运动特性;MG1655在flhDC基因缺失的状态下,fliA和fliD基因的表达同步出现上调,但运动性未发生变化,而MG1655△flhDC溶原菌丧失了运动特性,基因转录水平检测发现MG1655△flhDCФMin27与MG1655△flhDC相比,fliA和fliD基因的表达同步出现显著下调,而对fliE基因的表达几乎没有影响。fliA、fliD和fliE单个基因的缺失对大肠杆菌MG1655和Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的运动性几乎没有影响。【结论】提示fliA和fliD基因共同参与了鞭毛运动的调控,flhDC基因可影响噬菌体溶原菌株的运动性,为进一步研究噬菌体溶原与宿主基因之间的相互调节作用提供理论依据。

关键词：大肠杆菌 Stx2噬菌体溶原菌 flhDC 运动性

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猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第11期20卷 943-946页

作者：徐淑菲何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)胞外蛋白因子(extracellularfactorprotein,EF)的基因(epf)序列,设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-H的基因组为模板,扩增epf基因1585-2547位序列,进行T/A克隆,转化入宿主菌DH5α中。提取阳性克隆质粒进行双酶切并纯化,将目的片段向克隆到表达载体pET-32a中组氨酸的下游,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导可表达分子量约为53000的融合蛋白。免疫转印分析表明,该融合蛋白具有EF的抗原表位。

关键词：猪链球菌2型毒力因子克隆表达

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志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1227-1233页

作者：苏良科严亚贤陆承平上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min... 详细信息

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。

关键词：大肠杆菌O157:H7 Stx2噬菌体 ΦMin27(△stx∷cat) 感染特性

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我国部分地区新城疫病毒的流行现状分析

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兽医大学学报 2003年第3期23卷 218-221页

作者：刘华雷王永坤严维巍朱国强陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 ... 详细信息

从近年来由我国不同地区、不同宿主分离到的新城疫病毒 (NDV)野外分离株中 ,选取其中具有代表性的 1 6株 ,用 RT- PCR技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,进一步进行克隆和序列测定。参照国内外已发表的部分毒株的 F基因序列 ,构建了 5 9株 NDV的遗传进化树 ,分析其毒株间的遗传进化关系。序列分析表明 ,所扩增的目的片段长度为 5 35 bp,所分离的毒株在分裂位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R- R- Q/ R- K/ R- R- F1 1 7,均相当于 NDV的强毒株。通过遗传进化树分析表明 ,1 6株分离株中有 1 3株为基因型 NDV,说明目前基因型 NDV所引起的新城疫在国内呈流行趋势。

关键词：新城疫病毒流行现状 RT-PCR 基因

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猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

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生物工程学报 2008年第9期24卷 1573-1581页

作者：李祥健张建武吕健余丹丹姚火春袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区... 详细信息

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征高致病性猪蓝耳病感染性克隆嵌合病毒候选疫苗

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海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响

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畜牧与兽医 2009年第10期41卷 66-69页

作者：吴鹏王珏周斌曹瑞斌顾金燕张羽陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 安徽科技学院安徽凤阳233100

研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染... 详细信息

研究了饲料中添加海生素对AA肉鸡免疫器官发育的影响。144只AA肉鸡，随机分为2组，分别在饲料中添加0、200ms／kg海生素，试验期42d，每周末每组取试验鸡6只，颈动脉放血致死。取胸腺、腔上囊、脾脏，Bouin液固定，制作石蜡切片，HE染色，显微观察并摄影。结果：7日龄和42日龄试验组的胸腺指数高于同日龄的对照组，差异极显著（P〈0．01）；7日龄试验组腔上囊的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）；35日龄试验组脾脏的器官指数升高，差异显著（P〈0．05）。1～6周龄试验组中，胸腺、腔上囊和脾脏的组织结构也有不同程度的变化。其中脾的组织结构变化比较明显．尤其是脾小体变化甚为明显。试验表明：添加海生素能部分增加肉鸡免疫器官指数，促进免疫器官发育。

关键词：海生素从肉鸡免疫器官组织结构

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重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用

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微生物学报 2006年第1期46卷 115-119页

作者：蔡梅红张素芳曹瑞兵郭伟玲陈溥言江苏大学生物与环境工程学院镇江212013 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院南京210095 山东潍坊华辰科技有限公司潍坊261061

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插... 详细信息

为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素，以ConA（刀豆素A）诱导培养4-10h的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZa-A上，得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZa-A-CHIFN-γ，经Bstx Ⅰ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中，通过PCR的方法来筛选重组酵母菌，在甲醇诱导表达后，SDS-PAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验（微量病变抑制实验）和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。

关键词：鸡γ干扰素分泌表达临床应用

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其识别表位分析

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微生物学通报 2008年第12期35卷 1915-1919页

作者：周俊明何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4... 详细信息

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株腹水型单克隆抗体间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210和100×28。经Western-blot分析表明,4株单抗与硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白均具有特异性反应,并且通过4种IMPDH全基因分片段缺失表达的融合蛋白,分析了4株单抗所识别抗原决定簇的差异性,发现1A8、1F2、2D2识别表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627bp^790bp之间,2D12识别表位的编码基因则集中在IMPDH基因片段的411bp^790bp之间。猪链球菌2型中IMPDH单克隆抗体的获得及相应表位分析为研究IMPDH蛋白的生物学活性及免疫学活性奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 IMPDH 单克隆抗体表位

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CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 114-116页

作者：王晓泉姜平丁铲许家荣南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院家禽所江苏扬州225003

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBD... 详细信息

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

关键词：真核表达质粒 CpG寡核苷酸免疫传染性法氏囊病病毒

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犬白细胞介素2在毕赤酵母中的诱导表达及生物活性的测定

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农业生物技术学报 2007年第4期15卷 574-578页

作者：朱骞张汇东葛菲菲缪勤曹瑞兵陈溥言徐汉坤公安部南京警犬研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达... 详细信息

以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出犬IL-2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示,扩增片段与GenBank上的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体pPICZa-A上,得到重组酵母犬IL-2表达载体pPICZaA-CaIL-2,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)X-33。PCR方法筛选重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达上清中有大小约20kD的目的条带,比实际分子量略大,推测蛋白可能发生糖基化。MTT法测定生物学活性结果表明,重组犬IL-2能够极显著地促进犬外周血淋巴细胞增殖。证明酵母表达的犬重组IL-2具有良好的生物学活性。

关键词：犬 IL-2基因毕赤酵母诱导表达生物学活性

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