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运输应激对猪脾脏IL-2、IL-6和IL-10 mRNAs表达的影响及其调控机制

中国农业科学 2010年第3期43卷 578-584页

作者：吕琼霞张书霞赵茹茜南京农业大学动物医学院南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

【目的】探讨不同时间运输应激对猪脾脏中IL-2mRNA、IL-6mRNA、IL-10mRNA及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA表达的影响,并探讨P38MAPK-NF-κB信号途径对其表达的调控作用。【方法】将19头体重50kg左右的猪随机分为4组,分别进行0、1、2和4h公路运... 详细信息

【目的】探讨不同时间运输应激对猪脾脏中IL-2mRNA、IL-6mRNA、IL-10mRNA及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA表达的影响,并探讨P38MAPK-NF-κB信号途径对其表达的调控作用。【方法】将19头体重50kg左右的猪随机分为4组,分别进行0、1、2和4h公路运输,运输结束后立即扑杀取脾脏,液氮保存,用荧光定量PCR的方法对3种细胞因子及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA进行定量;另用ELISA方法检测试验猪脾脏组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化;激光扫描共聚焦显微镜观察NF-κB运输前后在脾脏细胞中的分布。【结果】经1、2和4h的运输应激后,脾脏中IL-10、IL-6及IL-6RmRNA的表达发生了显著的变化,P38MAPK变化不明显,NF-κB在脾脏中的表达是先上升,随后稍微下降,到4h时又升高并高于其它3个组;且NF-κB的入核率也呈现同样的变化趋势。【结论】运输应激可引起猪脾脏IL-6mRNA、IL-10mRNA和IL-6RmRNA表达的显著变化,且存在时效性;相关性分析表明,在所检测的3种细胞因子中,脾脏主要对运输过程中IL-6水平起重要的调节作用,结合细胞因子表达调控的信号机制表明,NF-κB可能对运输过程中猪脾脏相关细胞因子变化起重要的调控作用。

关键词：猪运输应激免疫功能 P38MAPK NF-κB

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荧光定量RT-PCR法检测运输应激猪热休克蛋白mRNA转录水平

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中国农业科学 2006年第1期39卷 187-192页

作者：李玉保鲍恩东王志亮赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室农业部动物检疫所

目的探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。方法根据HSP90、HSP70和GAPDHmRNA序列,设计并合成引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,... 详细信息

目的探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。方法根据HSP90、HSP70和GAPDHmRNA序列,设计并合成引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90mRNA转录水平的改变。结果经1、2、4、6和10h的运输应激后,组织中HSP70mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激到10h时HSP70mRNA的转录水平升到最高,肝脏和心脏组织中HSP70mRNA的转录水平分别为对照组的2.5和4.1倍;HSP90mRNA的转录水平则随着运输应激时间的延长呈下降趋势。结论运输应激可以影响HSPmRNA转录水平的变化,并且对不同家族的HSPmRNA转录水平的影响不同;HSP70mRNA的转录水平有望成为猪运输应激的判定指标之一。

关键词：猪热休克蛋白 SYBRGreenI 荧光定量PCR 运输应激

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猪乳中一组高分子量蛋白的多态性及其与繁殖性能关系的研究

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畜牧兽医学报 2002年第5期33卷 429-432页

作者：秦宜德徐银学邹思湘 Walter L Hurley 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095 DepartmentofAnimalScience

采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直板电泳 (SDS PAGE)对 16 2头二花脸母猪乳中一组高分子量蛋白质 (HMWP)进行了检测 ,计算了该位点的基因型频率、等位基因频率和遗传多样性指数等 ,并运用线性模型统计方法分析了该位点的... 详细信息

采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直板电泳 (SDS PAGE)对 16 2头二花脸母猪乳中一组高分子量蛋白质 (HMWP)进行了检测 ,计算了该位点的基因型频率、等位基因频率和遗传多样性指数等 ,并运用线性模型统计方法分析了该位点的不同基因型与母猪繁殖性能的关系。结果表明 ,在二花脸猪种群 ,乳中HMWP存在B(M :11480 0± 40 0 )和D(M :10 140 0± 6 0 0 )两种带 ,分别受二个等位基因HB 和HD 控制。BB、BD和DD三种基因型频率分别为 0 6 6 6 7、0 2 716和 0 0 6 17,两个等位基因HB 和HD 频率分别为 0 80 2 5和 0 1975 ,遗传多样性指数为0 3170。在三种HMWP基因型中 ,不同基因型母猪的繁殖性能在活仔数和窝重上存在着显著差异 (P <0 0 5 ) ,但在初生仔猪个体重和 2 0日龄窝重上未达到显著水平 (P >0 0 5 )。

关键词：猪乳高分子量蛋白质多态性繁殖性能遗传标记辅助选择

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长期饲喂高精料日粮对泌乳期山羊血液生化参数及组织中糖代谢相关基因表达的影响

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草业学报 2014年第5期23卷 295-302页

作者：董海波王绍庆贾媛媛端木永前陶诗煜倪迎冬张源淑庄苏沈向真赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为了研究长期饲喂高精料日粮对泌乳期山羊血液生化指标和糖代谢的影响,选择8只安装永久性瘤胃瘘管的健康经产泌乳中期山羊,分别饲喂精粗比为40∶60(low concentrate,LC,n=4)和60∶40(high concentrate,HC,n=4)的日粮。实验期共8周,实验... 详细信息

为了研究长期饲喂高精料日粮对泌乳期山羊血液生化指标和糖代谢的影响,选择8只安装永久性瘤胃瘘管的健康经产泌乳中期山羊,分别饲喂精粗比为40∶60(low concentrate,LC,n=4)和60∶40(high concentrate,HC,n=4)的日粮。实验期共8周,实验期间采集瘤胃液,血液;实验结束时采集肝脏,肌肉,脂肪组织置于液氮速冻后于-70℃保存待测。结果显示,饲喂高精料日粮2周后山羊瘤胃液pH显著降低,采食后瘤胃液pH持续低于5.8超过3h,8周后瘤胃液pH升高维持在6.0以上,但仍低于LC组山羊。与LC组山羊相比较,HC组山羊血液中葡萄糖、游离脂肪酸含量均升高(P<0.05,P=0.071),谷草转氨酶含量有上升的趋势(0.05

关键词：精粗比血液生化参数糖代谢基因表达山羊

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高精料对泌乳期山羊肝脏氨基酸分配与重分配及乳蛋白的影响

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草业学报 2013年第6期22卷 182-189页

作者：叶平生姜雪元张树坤倪迎冬庄苏张源淑沈向真南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为了探讨饲喂不同精粗比日粮对肝脏氨基酸分配与重分配的影响及可能的机制,本研究选择6只安装了肝脏多血管瘘的健康泌乳奶山羊,分别饲喂精粗比为40∶60(对照组)和60∶40(高精料组)的饲料,2×2拉丁方设计,饲喂期16周。期间取乳样,测... 详细信息

为了探讨饲喂不同精粗比日粮对肝脏氨基酸分配与重分配的影响及可能的机制,本研究选择6只安装了肝脏多血管瘘的健康泌乳奶山羊,分别饲喂精粗比为40∶60(对照组)和60∶40(高精料组)的饲料,2×2拉丁方设计,饲喂期16周。期间取乳样,测定乳蛋白含量,并通过肝门静脉、肝静脉和股动脉血管瘘取血,RP-HPLC法测定血浆中游离氨基酸含量。结果表明,高精料组山羊乳中乳蛋白含量显著低于低精料组(P<0.05);肝门静脉血液中各游离氨基酸含量均高于低精料组,而肝静脉和股动脉血液中各游离氨基酸含量均低于低精料组,即高精料组各游离氨基酸在肝脏中的消耗量均多于低精料组,通过股动脉进入乳腺组织的氨基酸含量也少于低精料组。本研究结果显示,长期饲喂高精料日粮,乳蛋白含量降低。其机制与肝脏中氨基酸分配与重分配发生改变,氨基酸在肝脏中消耗量增大,进入乳腺组织合成乳蛋白的前体物氨基酸减少有关。

关键词：高精料低精料肝脏游离氨基酸分配与重分配乳蛋白

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高精料日粮对干奶期奶山羊肝脏中游离氨基酸重分配的影响

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南京农业大学学报 2016年第2期39卷 289-296页

作者：曹洋叶平生荣超李林张瑜娟张源淑沈向真南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]探究高精料日粮饲喂条件下,干奶期奶山羊肝脏中氨基酸的分配变化及其可能机制,为干奶期奶山羊的科学饲养管理提供理论基础。[方法]选用干奶期奶山羊12只,2×2拉丁方试验设计。前10 d为适应期,期间安装瘤胃瘘管并进行肝脏多血... 详细信息

[目的]探究高精料日粮饲喂条件下,干奶期奶山羊肝脏中氨基酸的分配变化及其可能机制,为干奶期奶山羊的科学饲养管理提供理论基础。[方法]选用干奶期奶山羊12只,2×2拉丁方试验设计。前10 d为适应期,期间安装瘤胃瘘管并进行肝脏多血管瘘手术。适应期后,随机分为2组,分别饲喂精粗比为40∶60(对照组)和60∶40(高精料组)日粮,每期4周。每期试验结束,采集颈静脉、肝门静脉和肝静脉血液,采集饲喂后0、1、2、4、6、8和10 h的瘤胃液,采集肝脏组织。检测瘤胃液p H值,检测进出肝脏血液和肝脏组织匀浆液中FAA的含量及外周血液中脂多糖(LPS)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,并检测肝脏组织中CK、LDH、ALT和AST酶活性。[结果]与对照组相比,高精料组瘤胃p H值降低,并出现亚急性瘤胃酸中毒(SARA);高精料组奶山羊肝门静脉血中FAA含量升高,而肝静脉血中FAA含量降低。肝脏组织匀浆中FAA含量降低;颈静脉血液中LPS含量极显著升高(P<0.01),MDA含量升高。SOD酶活性下降(P>0.05),CK酶活性升高(P>0.05),LDH酶活性极显著升高(P<0.01),ALT和AST酶活性均显著升高(P<0.05);肝脏组织中CK、LDH、ALT和AST酶活性均升高(P>0.05)。[结论]高精料饲喂,导致干奶期奶山羊肝脏中AA进肝多而出肝少,肝脏组织中储存的AA减少,AA发生重分配。其机制可能是在高精料日粮饲喂条件下,机体出现SARA,引起循环血液中LPS含量增加,激活机体的氧化应激,同时肝脏受到一定程度的损伤,共同导致肝脏中AA消耗增多。

关键词：奶山羊高精料肝脏 AA重分配

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聚乙烯亚胺配合灭活禽流感病毒口服免疫对鸡免疫反应和生长发育的影响

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南京农业大学学报 2017年第2期40卷 302-307页

作者：杨晶晶刘瑞瑞杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在研究聚乙烯亚胺(PEI)配合灭活H5N1禽流感病毒口服免疫对鸡免疫反应和生长发育的影响。[方法]1日龄雏鸡35只,随机分成5组,每组7只。根据免疫方法分为口服生理盐水0.3 m L组(CK)、口服灭活禽流感病毒0.25 m L组(IAIV)、口服... 详细信息

[目的]本文旨在研究聚乙烯亚胺(PEI)配合灭活H5N1禽流感病毒口服免疫对鸡免疫反应和生长发育的影响。[方法]1日龄雏鸡35只,随机分成5组,每组7只。根据免疫方法分为口服生理盐水0.3 m L组(CK)、口服灭活禽流感病毒0.25 m L组(IAIV)、口服0.08 g聚乙烯亚胺配合0.25 m L灭活禽流感病毒组[IAIV+PEI(0.08)]、口服0.02 g聚乙烯亚胺配合0.25 m L灭活禽流感病毒组[IAIV+PEI(0.02)]和皮下注射灭活禽流感油乳佐剂疫苗组(i H)。分别在首次免疫后第3、5、7周通过检测口腔棉拭子、肠道和气管涮洗液中特异性Ig A、血清中特异性Ig G和HI抗体水平对免疫效果进行评价,然后称体质量,检测空肠和回肠绒毛长度以对生长发育效果进行评价。[结果]0.02 g聚乙烯亚胺配合0.25 m L灭活禽流感病毒口服免疫雏鸡的口腔棉拭子和肠道涮洗液中特异性Ig A水平显著高于单独口服灭活病毒雏鸡组(P<0.05);0.08 g和0.02 g聚乙烯亚胺分别配合0.25 m L灭活禽流感病毒口服免疫雏鸡后第7周,血清中特异性Ig G水平极显著升高(P<0.01);0.02 g聚乙烯亚胺配合0.25 m L灭活禽流感病毒口服免疫雏鸡后,其空肠、回肠绒毛长度比单独口服灭活病毒极显著增长(P<0.01)。[结论]0.02 g聚乙烯亚胺配合0.25 m L灭活H5N1禽流感病毒口服免疫雏鸡,不仅增强免疫反应,提高免疫力,还能促进营养物质吸收。

关键词：聚乙烯亚胺口服免疫灭活禽流感病毒

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脂多糖对母鸡产蛋及产道先天免疫和应激相关基因表达的影响

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南京农业大学学报 2014年第2期37卷 92-98页

作者：高贵超张艳红马文强赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为探讨脂多糖(LPS)对母鸡产蛋及产道先天免疫和应激相关基因表达的影响,试验采用40羽46周龄温氏土种母鸡,随机分为2组,对照组腹腔注射1 mL·kg-1生理盐水,试验组腹腔注射1 mg·kg-1的LPS(1 mg·mL-1)。记录注射后12 d的采... 详细信息

为探讨脂多糖(LPS)对母鸡产蛋及产道先天免疫和应激相关基因表达的影响,试验采用40羽46周龄温氏土种母鸡,随机分为2组,对照组腹腔注射1 mL·kg-1生理盐水,试验组腹腔注射1 mg·kg-1的LPS(1 mg·mL-1)。记录注射后12 d的采食量和产蛋率。待2组母鸡生产性能恢复正常后重复LPS注射,24 h后处死母鸡,采集血液、输卵管峡部和子宫,检测血液生化指标、输卵管峡部和子宫氧化应激指标(总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)),并测定峡部和子宫免疫、增殖、凋亡和应激相关基因的mRNA水平。结果表明:LPS组母鸡采食量和产蛋率显著降低(P<0.05);血清白蛋白、球蛋白和全蛋白浓度显著降低(P<0.05);母鸡峡部细胞因子IL-1βmRNA水平显著升高(P<0.05);子宫增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA水平显著降低(P<0.05)。结论:LPS急性刺激显著降低了母鸡采食量和产蛋率,这与血液免疫球蛋白含量下降,峡部炎症因子表达上调和子宫增殖相关基因表达下调有关。

关键词：脂多糖产蛋免疫应激母鸡

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热应激对肝脏中Keap1-Nrf2信号通路及下游基因表达的影响

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南京农业大学学报 2017年第1期40卷 151-156页

作者：王换换申正杰肖航刘小倩艾阳张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本试验旨在探讨热应激对泌乳期奶牛肝脏及抗氧化应激信号通路Keap1-Nrf2-ARE基因表达的影响。[方法]6头泌乳期荷斯坦奶牛饲养于南京地区夏季炎热季节,试验从6至8月持续5周,在第1周(平均气温26℃)和最后1周(平均气温32℃)采集颈静... 详细信息

[目的]本试验旨在探讨热应激对泌乳期奶牛肝脏及抗氧化应激信号通路Keap1-Nrf2-ARE基因表达的影响。[方法]6头泌乳期荷斯坦奶牛饲养于南京地区夏季炎热季节,试验从6至8月持续5周,在第1周(平均气温26℃)和最后1周(平均气温32℃)采集颈静脉血液和肝脏组织样品。检测血液中相关生化指标和皮质醇及肝脏组织中MDA等的含量,并检测奶牛肝脏HSP70、Keap1-Nrf2通路及其下游HO1、GCLM、NQO1、GCLC等基因的表达。[结果]与常温时相比,热应激奶牛血液中皮质醇含量和AKP活性极显著升高(P<0.01);奶牛肝脏组织中MDA含量显著升高(P<0.05),CAT、SOD和GSH-Px活性有所升高;肝脏组织中HSP70基因表达极显著升高(P<0.01),Keap1和Nrf2基因表达显著升高(P<0.05),其下游4个基因中,HO1和NQO1表达显著提高(P<0.05),GCLM和GCLC表达有升高趋势(P>0.05)。[结论]高温致泌乳奶牛肝脏处于应激状态,肝脏中Keap1-Nrf2-ARE信号通路介导的Ⅱ相解毒酶[谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLM)]和抗氧化基因的转录通路被激活,提示Nrf2通路在抗热应激过程中可能发挥着重要作用。

关键词：奶牛热应激肝脏 Keapl-Nrf2-ARE信号通路基因表达

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(-)-羟基柠檬酸调控鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的机制

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南京农业大学学报 2017年第3期40卷 514-520页

作者：李龙龙彭梦玲王典俞磊葛重阳马海田南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在研究(-)-羟基柠檬酸[(-)-HCA]对鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的影响及其机制。[方法]选用含(-)-HCA的培养液孵育鸡胚原代肝细胞后,油红染色法检测鸡胚原代肝细胞中脂滴的数量和总面积;试剂盒法检测鸡胚原代肝细胞中甘油三酯、... 详细信息

[目的]本文旨在研究(-)-羟基柠檬酸[(-)-HCA]对鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的影响及其机制。[方法]选用含(-)-HCA的培养液孵育鸡胚原代肝细胞后,油红染色法检测鸡胚原代肝细胞中脂滴的数量和总面积;试剂盒法检测鸡胚原代肝细胞中甘油三酯、葡萄糖含量及糖代谢、呼吸链关键酶活性。[结果](-)-HCA处理显著降低鸡胚原代肝细胞中甘油三酯含量、脂滴数量和总面积,但对细胞活力和死亡率无显著影响。(-)-HCA处理提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖消耗量,显著降低了柠檬酸裂解酶活性和细胞质中乙酰辅酶A含量。(-)-HCA处理显著提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶、丙酮酸脱氢酶(E1)、乌头酸酶、琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、柠檬酸合酶、NADH脱氢酶和ATP合酶活性。[结论](-)-HCA通过抑制柠檬酸裂解酶的活性减少细胞质中乙酰辅酶A的供给,并通过增强糖代谢和呼吸链中关键酶活性而加速能量代谢,最终抑制了鸡胚原代肝细胞中脂滴的沉积。

关键词： (-)-羟基柠檬酸脂代谢葡萄糖代谢能量代谢鸡胚原代肝细胞

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