检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2012年第5期35卷 93-102页

作者：崔中利崔利霞黄彦闫新何健李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物重点开放实验室江苏南京210095

农药污染与人们的日常生活息息相关,一直是科学家关注的环境污染热点问题。微生物因其种类丰富、分布广泛、适应性强和代谢途径多样的特点显现出自身在农药污染治理方面的优势。本文总结了近10年来,南京农业大学农业部农业环境微生物重... 详细信息

农药污染与人们的日常生活息息相关,一直是科学家关注的环境污染热点问题。微生物因其种类丰富、分布广泛、适应性强和代谢途径多样的特点显现出自身在农药污染治理方面的优势。本文总结了近10年来,南京农业大学农业部农业环境微生物重点开放实验室在农药残留微生物降解方面取得的进展,从降解性微生物资源的分离收集,到微生物降解代谢途径分析、降解过程中的关键基因或基因簇的克隆,及在微生物遗传操作方法 SEFA PCR(self-formed adaptor PCR)、基因工程菌的构建等方面进行了详细论述,旨在为降解性微生物在环境修复、生物转化等方面的应用提供理论和实践依据。

关键词：农药污染微生物资源代谢途径基因或基因簇 SEFA PCR 基因工程菌

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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

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土壤学报 2007年第4期44卷 727-733页

作者：管莉菠蔡天明李波何健李顺鹏崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约... 详细信息

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp)。随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537)。构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株***21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物。且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率。这表明ppk基因在***中的过量表达,导致了***菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。

关键词：多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列快速染色体步移方法(SEFA—PCR)

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产多糖溶磷细菌对难溶性Ca-P的活化特性

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南京农业大学学报 2008年第2期31卷 49-54页

作者：易艳梅黄为一南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室/生命科学学院江苏南京210095

以肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510和巨大芽孢杆菌P17为材料,比较了4种溶磷细菌在摇瓶培养条件下对不同难溶性Ca-P中的磷活化能力。结果表明,4种溶磷细菌均能促使难溶性Ca-P中的磷活化,但3种产多糖的溶磷细菌(EnHy-401... 详细信息

以肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510和巨大芽孢杆菌P17为材料,比较了4种溶磷细菌在摇瓶培养条件下对不同难溶性Ca-P中的磷活化能力。结果表明,4种溶磷细菌均能促使难溶性Ca-P中的磷活化,但3种产多糖的溶磷细菌(EnHy-401、ArHy-505、AzHy-510)对难溶性Ca-P的活化能力普遍强于不产多糖的溶磷细菌(P17),肠杆菌EnHy-401对Ca3-P、Ca8-P和Ca10-P中的磷活化率分别达61.53%、63.40%和4.32%。在产多糖的溶磷细菌中,有机酸和多糖均高的菌株活化磷的能力最高,3种产多糖的溶磷细菌活化难溶磷酸钙能力的大小顺序依次为肠杆菌EnHy-401、节杆菌ArHy-505、固氮菌AzHy-510。结果还表明,产多糖的溶磷细菌对难溶磷的活化作用是由分泌有机酸和多糖的协同作用实现的,多糖对磷的吸持推动了磷的溶解平衡向溶解方向移动,且该协同作用受胞外多糖持磷能力和环境中C/N的影响,单位体积发酵液中多糖持磷量与菌株的磷活化能力呈正相关。在本试验条件下,C/N值高时,多糖产量高,有机酸分泌多,活化磷的能力就强。同一菌株只有在最适于产有机酸和产多糖的C/N值下,才能表现出最佳的溶磷效果。

关键词：溶磷细菌难溶性磷酸钙多糖磷活化

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山梨醇废水生物处理工程稳定运行的影响因素分析

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南京农业大学学报 2009年第4期32卷 61-66页

作者：赵印吴育津顾向阳沈标南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室/生命科学学院江苏南京210095

根据工程运行数据对影响山梨醇废水生物处理工程稳定运行的因素进行了系统分析。结果发现:影响废水处理效率和出水水质的因素主要有有机负荷冲击、高浓度硅藻土和Ni2+毒性负荷冲击。有机负荷冲击有间歇性冲击和连续性冲击两种形式,间歇... 详细信息

根据工程运行数据对影响山梨醇废水生物处理工程稳定运行的因素进行了系统分析。结果发现:影响废水处理效率和出水水质的因素主要有有机负荷冲击、高浓度硅藻土和Ni2+毒性负荷冲击。有机负荷冲击有间歇性冲击和连续性冲击两种形式,间歇性负荷冲击对系统处理效能没有不利影响,但连续性负荷冲击时化学需氧量(COD)去除率明显下降,出水水质严重超标。高浓度硅藻土和Ni2+冲击对出水水质也有较大影响,且持续时间较长。因此,加强生产设备的操作和管理,杜绝硅藻土和Ni2+泄漏进入工艺废水,是山梨醇废水工程长期稳定运行的必要条件。

关键词：活性污泥山梨醇废水处理负荷冲击镍离子

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有机堆肥PCR-DGGE的微生物分子多态性分析

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土壤学报 2005年第6期42卷 1047-1049页

作者：李自刚黄为一农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系南京210095

目前，利用有机固体废弃物生产生物有机肥料已成为一门产业。生物有机肥料具有的优越性是任何一种化肥都不能代替的。因为生物有机肥中的有机质不但可以作为N、P、K等作物营养元素的主要来源，而且还能促使土壤团粒结构形成，提高土壤... 详细信息

目前，利用有机固体废弃物生产生物有机肥料已成为一门产业。生物有机肥料具有的优越性是任何一种化肥都不能代替的。因为生物有机肥中的有机质不但可以作为N、P、K等作物营养元素的主要来源，而且还能促使土壤团粒结构形成，提高土壤保水、保肥的能力，进而提高作物的产量。同时有机堆肥过程中形成的腐殖酸以及一些低分子量有机物质具有重要的生理功能。目前阻碍有机固体废弃物堆肥进展的一个重要原因就是至今还没有一个权威的评论方法或统一的指标对堆肥腐熟进行评价，从分子微生态学角度对有机堆肥的微生物多样性和堆肥中腐熟微生物研究鲜见报道。

关键词： PCR-DGGE:16 S rDNA/RNA 有机堆肥微生物分子多态性

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PNP降解相关基因温敏突变株的分离及其特性研究

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微生物学通报 2007年第1期34卷 32-35页

作者：邓海华李晓丹曹慧王世明黄婷婷崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变株中得到1株温度敏感型突变株MT54。根据转座子上的已知序列设计引物以MT54基因组DNA为模板进行PCR扩增,证实MT54的染色体中有转座子插入。MT54在3... 详细信息

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变株中得到1株温度敏感型突变株MT54。根据转座子上的已知序列设计引物以MT54基因组DNA为模板进行PCR扩增,证实MT54的染色体中有转座子插入。MT54在30℃条件下能够以对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)为唯一碳源生长,但在37℃不能生长。格里斯试色剂法检测NO_2^-的生成情况进一步证明了MT54的这种特性。通过30℃和37℃两种温度条件下MT54和原始出发菌株DLL-E4对PNP和对苯二酚降解情况的比较,推测温敏突变位点可能发生在与PNP降解相关的基因中。

关键词：对硝基苯酚对苯二酚转座子突变温敏突变株

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乙草胺降解菌Sphingomonas ***-6的分离鉴定及其代谢途径的初步研究

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中国农业科技导报 2013年第5期15卷 67-74页

作者：陈青姚利王成红邓诗凯褚翠伟何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从生产乙草胺的农药厂排污口污泥中分离到一株乙草胺降解菌,命名为DC-6。根据形态特征、生理生化特性以及16S rDNA系统发育分析,初步鉴定其为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)。该菌能够降解甲草胺、乙草胺和丁草胺,而对于异丙甲草胺... 详细信息

从生产乙草胺的农药厂排污口污泥中分离到一株乙草胺降解菌,命名为DC-6。根据形态特征、生理生化特性以及16S rDNA系统发育分析,初步鉴定其为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)。该菌能够降解甲草胺、乙草胺和丁草胺,而对于异丙甲草胺、丙草胺和异丙草胺却没有任何降解效果,48 h对丁草胺、乙草胺和甲草胺的降解率分别为76.7%、93.6%和98.6%,对甲草胺的降解效率最高,而对丁草胺的降解效率最低,表明侧链烷基长短影响着该类除草剂的降解速率,随着侧链基团碳原子的增加以及支链的增多降解效率呈下降的趋势。通过气相色谱-质谱鉴定了该菌降解乙草胺的代谢产物并分析了乙草胺的代谢途径,发现乙草胺首先N-脱烷基形成2-氯-N-(2-乙基-6-甲基苯基)乙酰胺(CMEPA),然后水解生成苯胺衍生物2-乙基-6-甲基苯胺(MEA),MEA能够进一步完全降解。但苯胺类化合物降解途径中的关键酶苯胺双加氧酶没有参与MEA降解代谢,表明菌株DC-6对MEA的降解不同于已报道苯胺降解途径。

关键词：乙草胺鞘胺醇单胞菌属 N-脱烷基代谢途径

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阿特拉津降解菌ADH-2的分离、鉴定及其特性研究

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农业环境科学学报 2009年第2期28卷 406-410页

作者：韩鹏洪青何丽娟严秋香李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从长期施用阿特拉津的玉米地中采集土样,通过富集培养的方法分离出一株能以阿特拉津为唯一碳、氮源生长的细菌ADH-2,结合生理生化特性及16S rRNA基因的相似性分析将其初步鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.)。该菌在10h内对100mg.L-1阿... 详细信息

从长期施用阿特拉津的玉米地中采集土样,通过富集培养的方法分离出一株能以阿特拉津为唯一碳、氮源生长的细菌ADH-2,结合生理生化特性及16S rRNA基因的相似性分析将其初步鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.)。该菌在10h内对100mg.L-1阿特拉津的降解率为99.9%。外加氮源能促进菌株的生长,但对阿特拉津的降解有轻微的抑制作用。外加蔗糖和葡萄糖能显著促进菌株的生长,但对阿特拉津的降解表现出显著的抑制。而淀粉既能促进菌株的生长又能促进阿特拉津的降解。对其降解基因的初步研究显示,该菌含有trzN、atzB和atzC3个阿特拉津降解相关基因。通过与本实验室另外两株阿特拉津降解菌比较,菌株ADH-2具有更好的应用潜力。

关键词：阿特拉津降解 ADH-2 降解相关基因

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桑黄胞内多糖液体发酵培养基的优化

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食品科学 2006年第11期27卷 236-240页

作者：李朔丁一新徐霁李玉祥赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

本文对桑黄的液体发酵培养进行了研究,用L27(313)表进行四因素三水平正交试验,筛选出了较好的桑黄胞内多糖高产液体发酵培养基,产量达到2.70g/L,其配方为初始pH5.0、黄豆粉、可溶性淀粉、C/N为1:1;通过直观分析和方差分析,胞内多糖含量... 详细信息

本文对桑黄的液体发酵培养进行了研究,用L27(313)表进行四因素三水平正交试验,筛选出了较好的桑黄胞内多糖高产液体发酵培养基,产量达到2.70g/L,其配方为初始pH5.0、黄豆粉、可溶性淀粉、C/N为1:1;通过直观分析和方差分析,胞内多糖含量的主控因素初始pH(A)与菌丝干重的主控因素氮源(B)之间是相互独立的,两者结果的相关分析得出r=-0.16(p>0.05),表明胞内多糖含量与菌丝干重之间没有可靠的相关性。

关键词：桑黄正交设计胞内多糖(IPS) 菌丝干重

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灵芝漆酶基因转录Cu^(2+)诱导特性及其启动子的克隆与序列分析

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南京农业大学学报 2009年第1期32卷 36-40页

作者：欧阳翔吴婧丁一新李玉祥赵明文南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

以Cu2+为诱导物检测了灵芝漆酶同工酶基因的转录特性,并对其启动子进行了克隆及序列分析。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu2+的作用下表达量出现明显差异,其中以在发酵液中添加3.0 mmol.L-1Cu2+、诱导时间为6 d时,漆酶基因的mRNA表达量最高... 详细信息

以Cu2+为诱导物检测了灵芝漆酶同工酶基因的转录特性,并对其启动子进行了克隆及序列分析。研究发现:灵芝漆酶基因在Cu2+的作用下表达量出现明显差异,其中以在发酵液中添加3.0 mmol.L-1Cu2+、诱导时间为6 d时,漆酶基因的mRNA表达量最高。根据GenBank中已报道的灵芝漆酶基因的序列信息,经PCR扩增获得了灵芝漆酶5′端长879bp的基因特异序列,进而通过self-formed adaptor PCR(SEFA-PCR)方法,扩增得到灵芝漆酶基因起始密码子上游长832bp的启动子序列。分析表明,该启动子区域除分布有TATA-box、CAAT-box及GC-box等基本的转录起始元件外,还存在多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括4个MRE元件、4个STRE元件、11个HSE元件和5个氮因子结合位点等。

关键词：灵芝漆酶半定量RT—PCR self-formed adaptor PCR 转录调控

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