检索结果-内蒙古大学图书馆

乙草胺降解菌Sphingomonas ***-6的分离鉴定及其代谢途径的初步研究

中国农业科技导报 2013年第5期15卷 67-74页

作者：陈青姚利王成红邓诗凯褚翠伟何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从生产乙草胺的农药厂排污口污泥中分离到一株乙草胺降解菌,命名为DC-6。根据形态特征、生理生化特性以及16S rDNA系统发育分析,初步鉴定其为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)。该菌能够降解甲草胺、乙草胺和丁草胺,而对于异丙甲草胺... 详细信息

从生产乙草胺的农药厂排污口污泥中分离到一株乙草胺降解菌,命名为DC-6。根据形态特征、生理生化特性以及16S rDNA系统发育分析,初步鉴定其为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)。该菌能够降解甲草胺、乙草胺和丁草胺,而对于异丙甲草胺、丙草胺和异丙草胺却没有任何降解效果,48 h对丁草胺、乙草胺和甲草胺的降解率分别为76.7%、93.6%和98.6%,对甲草胺的降解效率最高,而对丁草胺的降解效率最低,表明侧链烷基长短影响着该类除草剂的降解速率,随着侧链基团碳原子的增加以及支链的增多降解效率呈下降的趋势。通过气相色谱-质谱鉴定了该菌降解乙草胺的代谢产物并分析了乙草胺的代谢途径,发现乙草胺首先N-脱烷基形成2-氯-N-(2-乙基-6-甲基苯基)乙酰胺(CMEPA),然后水解生成苯胺衍生物2-乙基-6-甲基苯胺(MEA),MEA能够进一步完全降解。但苯胺类化合物降解途径中的关键酶苯胺双加氧酶没有参与MEA降解代谢,表明菌株DC-6对MEA的降解不同于已报道苯胺降解途径。

关键词：乙草胺鞘胺醇单胞菌属 N-脱烷基代谢途径

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基于SRAP、ISSR和RAPD分析灵芝G0130菌株单核体多态性

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工业微生物 2014年第4期44卷 39-45页

作者：徐凯唐传红王天娇杨炎唐庆九刘艳芳张劲松国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室江苏南京210095

旨在探讨灵芝原生质体单核体间遗传多态性，为育种材料的筛选提供分子水平依据。采用原生质体单核化获得灵芝Ganoderma lueidum36株单核体，从筛选出的12组SRAP引物，13条ISSR引物和13条RAPD引物对供试菌株的多态性综合分析结果显示，... 详细信息

旨在探讨灵芝原生质体单核体间遗传多态性，为育种材料的筛选提供分子水平依据。采用原生质体单核化获得灵芝Ganoderma lueidum36株单核体，从筛选出的12组SRAP引物，13条ISSR引物和13条RAPD引物对供试菌株的多态性综合分析结果显示，共扩增出320个条带，其中265条表现出多态性，多态位点百分率为82．81％；根据扩增结果采用软件NTsys2．10e计算菌株间的遗传相似系数（GS值）并进行聚类分析，37个菌株间GS值的变化范围为0．3741—0．9852；130—29、130．33和130-53等7株相同交配型单核体聚为一类，其余29株单核体与出发菌株G0130聚为一类，但并非严格按照交配型聚类，且单核体表现出发菌株全部或部分带型，同时也表现其所不具有的带型。研究表明，SRAP、ISSR和RAPD标记可以用于灵芝单核体多态性研究，并可为交配型鉴定提供参考，这将为育种材料的筛选提供帮助，减少育种工作量和风险。

关键词：灵芝单核体分子标记育种

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精噁唑禾草灵降解菌株Acinetobacter sp.T-1的分离鉴定及降解特性研究

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农业环境科学学报 2013年第5期32卷 979-985页

作者：董维亮侯颖陶健曹慧崔中利南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003

从长期受精噁唑禾草灵污染的土壤中分离筛选得到了精噁唑禾草灵降解菌T-1,根据生理生化特性和16S rRNA同源性序列分析,将其鉴定为不动杆菌属（Acinetobacter sp.）。菌株T-1能够以精噁唑禾草灵为唯一碳源进行生长,在5 d内对50 mg.L-1精... 详细信息

从长期受精噁唑禾草灵污染的土壤中分离筛选得到了精噁唑禾草灵降解菌T-1,根据生理生化特性和16S rRNA同源性序列分析,将其鉴定为不动杆菌属（Acinetobacter sp.）。菌株T-1能够以精噁唑禾草灵为唯一碳源进行生长,在5 d内对50 mg.L-1精噁唑禾草灵的降解率可达95%以上。T-1降解精噁唑禾草灵的最适温度为37℃,而其在pH5~11的范围内对50 mg.L-1精噁唑禾草灵的降解率均可以达到85%以上。经LC-MS鉴定Acinetobacter sp.T-1降解精噁唑禾草灵的主要产物为精噁唑禾草灵酸,表明菌株T-1对精噁唑禾草灵的降解是通过断裂其酯键形成精噁唑禾草灵酸和乙醇实现的。

关键词：精噁唑禾草灵降解 Acinetobactersp

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灵芝中基于内源ura3基因的多基因沉默系统的建立及其应用

灵芝中基于内源ura3基因的多基因沉默系统的建立及其应用

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中国菌物学会第四届全国药用真菌学术研讨会

作者：穆大帅师亮任昂李梦娇吴凤礼姜爱良赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

灵芝是一种重要的药用真菌，然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究，灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢.该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法，利用灵芝内源乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向... 详细信息

灵芝是一种重要的药用真菌，然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究，灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢.该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法，利用灵芝内源乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标记，构建4种沉默载体(颈环结构沉默载体，正向沉默载体，反向沉默载体以及正反双向启动子沉默载体)，并基于此转基因方法实现了对灵芝内源基因的沉默.通过系统比对以上4种沉默方法，发现4种沉默方法都不同程度地下调了ura3基因的表达，其中双向启动子沉默不仅载体构建方便并且能够获得最高的沉默效率(达到81.9％).利用这种双向启动子沉默载体以及ura3的反向筛选特性，建立了灵芝的共沉默体系，发现共沉默下基因转录的下调有一定的相关性，提高了基因沉默的筛选效率.该反向遗传体系的建立有助于深入研究灵芝中单基因或多基因的功能，推动灵芝等大型担子菌的分子遗传研究进展.

关键词：灵芝基因沉默共沉默电击转化

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茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成的影响及其灵芝应答基因的差异表达

茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成的影响及其灵芝应答基因的差异表达

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中国菌物学会第四届全国药用真菌学术研讨会

作者：任昂李梦娇师亮穆大帅姜爱良韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标.经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标.经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达.通过在灵芝中建立的cDNA-AFLP体系,采用64对引物组合对灵芝的转录组进行分析.64对引物组合共产生3 910个TDFs.茉莉酸甲酯不同诱导条件下约有919个TDFs的表达谱发生了变化,占表达谱的23.5％,其中上调表达的有703个,下调表达的有216个.选择458个TDFs进行回收、TA克隆、测序后,获得390个高质量的TDFs片段.通过蛋白数据库同源性检索,并对蛋白功能进行GO分类,结果表明：390个高质量的TDFs中,BlastX比对后没有显著匹配的序列占77.1％.在有匹配蛋白的序列中,与碳代谢及能量相关的基因为最大一组,占35.2％,转录调控类及信号传导类基因分别占14.3％和11.0％.通过荧光定量PCR技术考察了茉莉酸甲酯对20个基因转录水平的影响,与cDNA-AFLP分析的结果相一致.并通过灵芝基因过量表达技术和基因沉默技术对筛选到的相关基因进行沉默和过量表达,研究筛选到的基因在灵芝三萜生物合成与调控中的作用,获得大量参与灵芝三萜生物合成与调控的候选基因,进一步阐明了茉莉酸甲酯诱导下灵芝基因表达的变化图.

关键词：灵芝茉莉酸甲酯均匀设计 cDNA-AFLP分析过量表达基因沉默

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灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因的克隆及其表达特性

灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因的克隆及其表达特性

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中国菌物学会第四届全国药用真菌学术研讨会

作者：任昂欧阳翔师亮姜爱良穆大帅李梦娇韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京 210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标.灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(Ahydroxymethylglutaryl-CoA synthase,GIHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标.灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(Ahydroxymethylglutaryl-CoA synthase,GIHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,对于灵芝三萜的合成起着十分重要的作用.分别以灵芝总基因组DNA和反转录的原基cDNA为模板,扩增得到G1HMGS基因的全长DNA和cDNA序列,该基因DNA全长1870 bp,其中ORF为1 413 bp,编码471个氨基酸,推测的分子量为51.14kD.通过比对获得的DNA和cDNA序列,发现GIHMGS由5个外显子和4个内含子构成.与NCBI数据库中HMGS的蛋白序列比对发现,GIHMGS与解脂耶罗威亚酵母的HMGS表现出最高的同源性(51％).进化树分析也表明GIHMGS与真菌亲缘关系最近,这与灵芝的物种分类相吻合.通过酿酒酵母HMGS缺陷的菌株证实所得G1HMGS能够使HMGS缺陷的表型得到互补,证实GIHMGS的功能.利用SEFA-PCR技术扩增GIHMGS基因上游启动子序列,该序列长约1561 bp,用Softberry等软件对启动子序列进行分析,发现G1HMGS基因启动子中包含有明显的TATA-box和CAAT-box,并发现了多个与甾醇、激素和环境压力等调节相关的顺式作用元件.进一步研究发现,茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸能够提高GIHMGS基因的转录水平.在研究不同发育阶段和不同碳源对G1HMGS基因的影响时,发现GIHMGS基因的表达水平分别在第16天和以麦芽糖为碳源时达到最大.通过过量表达GIHMGS基因能够显著提高灵芝三萜含量.

关键词：灵芝三萜 HMG-CoA合酶功能验证表达谱过量表达

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卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

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2013年中国微生物学会学术年会

作者：蒋建东南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 210095南京

卤代芳烃类农药中由于卤素这种强吸电子基团的取代,不仅增加了难降解性,而且提高了形成有毒中间产物的风险,因此,脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键.

关键词：

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卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

卤代芳烃类农药的微生物脱卤机制

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第十六次全国环境微生物学学术研讨会

作者：蒋建东南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 210095南京

卤代芳烃农药包含除草剂、杀菌剂和杀虫剂，在农药中占有重要比例，由于广泛使用导致严重的环境污染问题。卤代芳烃类农药的脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键。微生物编码的脱卤酶在卤代芳烃类化合物的脱毒、降解方面起着关键作用。本... 详细信息

卤代芳烃农药包含除草剂、杀菌剂和杀虫剂，在农药中占有重要比例，由于广泛使用导致严重的环境污染问题。卤代芳烃类农药的脱卤是这类化合物脱毒和降解的关键。微生物编码的脱卤酶在卤代芳烃类化合物的脱毒、降解方面起着关键作用。本文总结了脱氯酶基因的水平转移的生态学意义在于促进脱氯微生物多样性分化和微生物群落快速适应污染环境。脱氯酶基因的水平转移能够使得整个微生物群落具有更大的脱氯潜力，这也为生物修复污染环境提供了一个新的策略。

关键词：卤代芳烃类农药微生物脱卤机制脱氯酶基因生物修复

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降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性

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中国农业科学 2013年第11期46卷 2240-2248页

作者：徐剑宏潘艳梅胡晓丹祭芳殷宪超史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,... 详细信息

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,用PBS离心洗涤菌体后采用超声波破碎,用硫酸铵沉淀菌体破碎液获得粗酶液;然后在不同的酶反应体系中检测3-AC-DON氧化酶的酶活性。【结果】降解菌DDS-1产生3-AC-DON氧化酶的最适条件为:pH 7.0、25℃、培养36 h;该酶酶反应的最适温度为35℃,最适反应pH为7.0;该酶在20—40℃,pH 5.0—9.0的范围内能保持80%以上的酶活性;大多数金属离子在浓度为0.2—2 mmol.L-1对3-AC-DON氧化酶有促进作用;乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶活性有抑制作用;酶的定域试验结果显示该酶为胞内酶;DDS-1产生的粗酶液能很好地降解小麦中的DON、3-AC-DON毒素。【结论】Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究表明,DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶具有较好的温度和酸碱稳定性,该酶反应需要金属离子作为辅因子。

关键词： 3-AC-DON 降解徳沃斯氏菌酶活性

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Pseudomonas sp.L19抗除草剂AHAS基因的克隆、表达及特性

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应用与环境生物学报 2012年第1期18卷 49-54页

作者：郎志飞俞欣妍黄星张隽何健南京农业大学植物保护学院南京210095 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.从长期使用甲磺隆的农田土壤中分离到1... 详细信息

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.从长期使用甲磺隆的农田土壤中分离到1株对乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂有广谱抗性的菌株L19,根据表型特征、生理生化特性和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为假单孢菌属(Pseudomonas sp.).利用PCR技术从Pseudomonas sp.L19的总DNA中克隆AHAS基因,氨基酸序列比对结果表明,L19与对除草剂敏感菌株*** KT2440的AHAS调节亚基氨基酸序列完全相同,而催化亚基有4个氨基酸位点不同:[Val 29→Ala(L19→KT2440),Pro93→Ser,Val 345→Ala,Pro 484→Arg].分别将菌株L19与KT2440的AHAS催化亚基克隆到pET29a(+)的多克隆位点,构建了表达载体pET-L19AHASc和pET-KT2440AHASc,通过镍柱亲和层析纯化得到带有组氨酸标签的乙酰羟酸合酶.抗性试验结果表明菌株L19的乙酰羟酸合酶对四大类乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的抗性均要强于KT2440的乙酰羟酸合酶,对甲磺隆、咪唑乙烟酸、唑嘧磺草胺和嘧草醚的抗性倍数分别达到53.6、9.3、8.2和9.5倍.菌株L19的乙酰羟酸合酶比活力、对ThDP和Mg2+的Kc值相应地比KT2440乙酰羟酸合酶的要低;而对底物丙酮酸钠的米氏常数Km值要比KT2440乙酰羟酸合酶的要高近1倍.

关键词：乙酰羟酸合酶抑制剂除草剂抗性乙酰羟酸合酶 Pseudomonas 酶学特性

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