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第四届全国发酵工程学术研讨会

作者：邓海华曹慧李晓丹王世明崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼... 详细信息

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92％.将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果.将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶.

关键词：转座子标签法同源重组基因敲入单胞菌尿黑酸克隆

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碳源及碳氮比对异养反硝化微生物异养反硝化作用的影响

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农村生态环境 2005年第2期21卷 42-45页

作者：傅利剑郭丹钊史春龙黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3... 详细信息

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3 作为唯一氮源进行反硝化作用,证明HP1至少有2种硝酸还原途径。连续培养方式下温度对菌株HP1异养反硝化作用中间产物的积累有影响,不同C/N时均有NH+4 积累,C/N为3时还有NO-2 的积累。

关键词：异养反硝化微生物反硝化作用碳源 C/N

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根瘤菌与群体感应

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生态学杂志 2005年第5期24卷 547-550页

作者：郑会明钟增涛陈一楠朱军南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物生物工程重点开放实验室南京210095

细菌在高细胞密度下可以产生群体感应信号分子,调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物。酰基高丝氨酸内酯类化合物(acyl HSLs)是在根瘤菌中广泛存在的一类自体诱导物,该群体感应系统与根瘤菌和植物的共生作用密切相关。... 详细信息

细菌在高细胞密度下可以产生群体感应信号分子,调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物。酰基高丝氨酸内酯类化合物(acyl HSLs)是在根瘤菌中广泛存在的一类自体诱导物,该群体感应系统与根瘤菌和植物的共生作用密切相关。本文概述了AHLs介导的群体感应系统的组成及调控机制和不同根瘤菌中群体感应调节对根瘤菌生理行为及共生固氮的影响。

关键词：根瘤菌群体感应 AHLs 结瘤固氮

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稻秸对土壤细菌群落分子多态性的影响

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土壤学报 2005年第2期42卷 270-277页

作者：卜元卿黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

模拟稻秸原位还田条件,分别在水稻土和红壤中添加水稻秸秆培养70d ,第0、5、2 5、4 5、70天采集土样。采用非机械破壁法直接提取水稻土和红壤细菌总DNA ,水稻土细菌总DNA经过二次纯化;红壤细菌总DNA经过一次纯化后,PCR扩增其16SrDNAV3... 详细信息

模拟稻秸原位还田条件,分别在水稻土和红壤中添加水稻秸秆培养70d ,第0、5、2 5、4 5、70天采集土样。采用非机械破壁法直接提取水稻土和红壤细菌总DNA ,水稻土细菌总DNA经过二次纯化;红壤细菌总DNA经过一次纯化后,PCR扩增其16SrDNAV3可变区,均可获得清晰的目的条带,对扩增产物进行DGGE分析,结果显示:水稻土和红壤样品的DGGE条带增加,说明稻秸能够增加土壤细菌群落分子多态性的丰富度,随着培养期的延长,施有稻秸的处理中土壤细菌群落多态性的变化远远复杂于空白对照土壤中的细菌群落变化;

关键词：土壤细菌水稻土红壤群落总DNA 分子多态性还田 DGGE 细菌群纯化

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不同种类解磷微生物的溶磷效果及其磷酸酶活性的变化

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土壤学报 2005年第2期42卷 286-294页

作者：钟传青黄为一农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系南京210095

比较了不同种类的微生物菌株对不同种类难溶性磷酸盐及磷矿粉的溶解能力。结果发现,细菌、酵母、霉菌在解磷方面均有一定作用,发挥着不同优势。磷酸钙、磷酸铝、磷酸铁等难溶性磷酸盐容易被酵母菌、霉菌溶解,而磷矿粉容易被巨大芽孢杆... 详细信息

比较了不同种类的微生物菌株对不同种类难溶性磷酸盐及磷矿粉的溶解能力。结果发现,细菌、酵母、霉菌在解磷方面均有一定作用,发挥着不同优势。磷酸钙、磷酸铝、磷酸铁等难溶性磷酸盐容易被酵母菌、霉菌溶解,而磷矿粉容易被巨大芽孢杆菌溶解,显示不同微生物与不同磷源的亲和溶解能力不同。不同种类磷酸盐或磷矿粉对微生物磷酸酶活力的影响不同。

关键词：溶磷难溶性磷磷矿粉磷酸酶活性种类解磷微生物磷源磷酸盐溶解能力磷酸铝

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铜尾矿复垦后土壤微生物活性及其群落功能多样性研究

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生态环境 2005年第6期14卷 876-879页

作者：刘爱民黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系//农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

对安徽铜陵五公里尾矿区三叶草复垦后的土壤微生物活性和群落的功能多样性研究表明,复垦后每克土壤微生物细菌数已达2.3×107个,并存在一定量耐Cu2+、Cd2+、Zn2+、Cr6+、Pb2+、Ni2+的菌株,但种类少,主要为芽孢杆菌属、假单胞菌属和... 详细信息

对安徽铜陵五公里尾矿区三叶草复垦后的土壤微生物活性和群落的功能多样性研究表明,复垦后每克土壤微生物细菌数已达2.3×107个,并存在一定量耐Cu2+、Cd2+、Zn2+、Cr6+、Pb2+、Ni2+的菌株,但种类少,主要为芽孢杆菌属、假单胞菌属和短杆菌属。BIOLOG测试结果显示,铜镉重金属离子的复合污染使土壤微生物群落丰富度降低;外源耐铜镉微生物菌剂的添加使尾矿区土壤微生物群落代谢剖面(AWCD)变化明显,提高微生物对单一碳源底物的利用能力,增加利用不同碳底物的微生物数量,减轻了重金属污染引起的土壤微生物群落功能多样性的下降,为尾矿区生境加速恢复提供一条有效途径。

关键词：铜尾矿铜镉污染耐铜镉菌剂土壤微生物群落功能多样性

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有机堆肥PCR-DGGE的微生物分子多态性分析

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土壤学报 2005年第6期42卷 1047-1049页

作者：李自刚黄为一农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系南京210095

目前，利用有机固体废弃物生产生物有机肥料已成为一门产业。生物有机肥料具有的优越性是任何一种化肥都不能代替的。因为生物有机肥中的有机质不但可以作为N、P、K等作物营养元素的主要来源，而且还能促使土壤团粒结构形成，提高土壤... 详细信息

目前，利用有机固体废弃物生产生物有机肥料已成为一门产业。生物有机肥料具有的优越性是任何一种化肥都不能代替的。因为生物有机肥中的有机质不但可以作为N、P、K等作物营养元素的主要来源，而且还能促使土壤团粒结构形成，提高土壤保水、保肥的能力，进而提高作物的产量。同时有机堆肥过程中形成的腐殖酸以及一些低分子量有机物质具有重要的生理功能。目前阻碍有机固体废弃物堆肥进展的一个重要原因就是至今还没有一个权威的评论方法或统一的指标对堆肥腐熟进行评价，从分子微生态学角度对有机堆肥的微生物多样性和堆肥中腐熟微生物研究鲜见报道。

关键词： PCR-DGGE:16 S rDNA/RNA 有机堆肥微生物分子多态性

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抗Cd细菌J5的筛选和抗Cd^(2+)特性

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农业环境科学学报 2005年第z1期24卷 223-227页

作者：刘爱民黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 安徽师范大学生命科学学院

从某冶炼厂污染土壤中分离出一株能高度抗镉和吸附镉的菌株J5,经初步鉴定为假单胞菌属(Pseudo-m onassp.)。研究结果表明该菌株在液体细菌培养基中耐硫酸镉高达40 mmol.L-1,琼脂平板上耐硫酸镉高达75mmol.L-1;J5产碱,有一定絮凝性;Cu2+... 详细信息

从某冶炼厂污染土壤中分离出一株能高度抗镉和吸附镉的菌株J5,经初步鉴定为假单胞菌属(Pseudo-m onassp.)。研究结果表明该菌株在液体细菌培养基中耐硫酸镉高达40 mmol.L-1,琼脂平板上耐硫酸镉高达75mmol.L-1;J5产碱,有一定絮凝性;Cu2+和Cd2+的共同存在增加了对菌株J5的毒害,Cd2+浓度影响J5绿色色素的表达;活菌体的菌浓度对J5耐Cd2+能力影响很大,菌浓度愈大,耐性愈强,在0~1.5 mmol.L-1Cd2+浓度范围内,J5菌体的全细胞SDS-PAGE电泳图谱差异不明显;活菌体对100μ***-1Cd2+积累率为99.1%,吸附率达100%。

关键词：抗Cd细菌色素抗性变化 SDS-PAGE电泳

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3-苯氧基苯甲酸降解菌的分离及降解特性研究

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微生物学通报 2005年第5期32卷 62-66页

作者：许育新李晓慧秦华李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部环境微生物工程重点开放实验室中国科学院南京土壤研究所生物与生化研究室南京210008

从农药厂污泥中分离到一株3-苯氧基苯甲酸(3-Phenoxybenzoicacid,3-PBA)降解菌PBM11。经生理生化试验和16SrDNA测定初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp·)。PBM11能以3-PBA为唯一碳源生长,降解试验表明:在基础盐培养基中,初始pH7&#... 详细信息

从农药厂污泥中分离到一株3-苯氧基苯甲酸(3-Phenoxybenzoicacid,3-PBA)降解菌PBM11。经生理生化试验和16SrDNA测定初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp·)。PBM11能以3-PBA为唯一碳源生长,降解试验表明:在基础盐培养基中,初始pH7·0,30℃,160r/min,装瓶量为100mL/250mL的条件下,PBM11经过24h可完全降解200mg/L的3-PBA;添加低浓度的外源营养物质能够在一定程度上促进降解;Cu2+和Co2+等对其降解性能有抑制作用,而Fe3+有明显的促进作用;通过分析底物利用情况,初步推断3-PBA降解的中间产物可能为原儿茶酸和苯酚。经过7d的处理,PBM11对土壤中100mg/L3-PBA的降解率为66·25%。从PBM11中检测到一个质粒。

关键词： 3-苯氧基苯甲酸降解菌降解特性中间产物

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牛粪沼气发酵过程中物质转化、微生物生理群变化及产甲烷菌多样性研究

牛粪沼气发酵过程中物质转化、微生物生理群变化及产甲烷菌多样性...

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沼气产业化发展研讨会

作者：汪婷何健赵子如李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展,但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便,据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤,牛尿和冲洗废水150公斤,奶牛粪便已成:为我国农村环境主要污染源之一。沼气发酵是奶牛粪便最有应用前景的处理工艺之一,在... 详细信息

我国奶牛养殖近年来得到了极大的发展,但与之俱来的是产生了大量的奶牛粪便,据统计每头奶牛日产鲜牛粪约30公斤,牛尿和冲洗废水150公斤,奶牛粪便已成:为我国农村环境主要污染源之一。沼气发酵是奶牛粪便最有应用前景的处理工艺之一,在使奶牛粪便无害化的同时,产生的沼液沼渣可作为有机肥料,沼气可作为能源。但是由于奶牛粪便有机质浓度和难降解的纤维素含量高,作为原料进行沼气发酵时,普遍存在调试启动慢,运行过程不稳定,易出现酸化和不产气或产气率低等问题,这已经在很大程度上制约了沼气发酵在奶牛粪便处理中的应用。对奶牛粪便沼气发酵物质转化及其微生物种群变化过程进行研究,对奶牛粪便沼气发酵的快速启动、产气率提高和稳定运行具有非常重要的意义。

关键词：沼气发酵奶牛粪便产甲烷菌微生物生理群物质转化多样性研究

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