检索结果-内蒙古大学图书馆

乙酰羟酸合成酶同工酶基因ilvBN、ilvGM和ilvIH的表达及对除草剂抗性的比较

生物工程学报 2009年第7期25卷 1007-1013页

作者：沈晶晶李永丰黄星俞欣妍何健李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类和咪唑啉酮类等AHAS抑制剂类除草剂的作用靶标。获得抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本研究从抗甲磺隆菌株Klebsiella ***11和甲磺隆敏感菌株Klebsiella pneumoniae MGH 7... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类和咪唑啉酮类等AHAS抑制剂类除草剂的作用靶标。获得抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本研究从抗甲磺隆菌株Klebsiella ***11和甲磺隆敏感菌株Klebsiella pneumoniae MGH 78578中分别克隆到AHAS三种同工酶基因ilvBN、ilvGM和ilvIH。抗性菌株和敏感菌株AHAS三种同工酶基因在氨基酸水平上差异位点主要集中在ilvBN和ilvGM的大亚基上。将2株菌的ilvBN、ilvGM和ilvIH分别构建到表达载体pET29a(+)中,在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,测得只有含菌株HR11 ilvBN和ilvGM的转化子细胞破碎液AHAS对各类AHAS抑制剂类除草剂具有较强的抗性,而含菌株HR11 ilvIH和菌株MGH78578 ilvBN、ilvGM和ilvIH的转化子细胞破碎液AHAS对各类AHAS抑制剂类除草剂敏感。

关键词： AHAS抑制剂类除草剂乙酰羟酸合酶同工酶 ilvBN ilvGM ilvIH 除草剂抗性

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人工接种堆肥和自然堆肥微生物区系与分子多态性的变化

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生态与农村环境学报 2006年第1期22卷 29-33页

作者：徐大勇黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图... 详细信息

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图谱显示,两种堆肥不同时期存在不同的细菌种群,其条带数量亦呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势。堆肥升温期条带丰富但优势条带不明显;堆肥高温期条带数量减少但出现优势条带,表明高温阶段以嗜热菌或耐高温菌为主;堆肥降温期条带数量再次增多;堆肥腐熟期条带数量少且无优势条带,表明腐熟阶段微生物种群数量少且代谢强度趋于平缓。(3)DGGE图谱表明,人工接种菌株成为堆肥高温期优势菌株。人工接种增加了堆肥中微生物总量,提高了堆肥微生物种群多样性,并且促进了堆肥菌群演替,从而缩短堆肥腐熟时间。

关键词：堆肥微生物群落分子多态性变性梯度凝胶电泳(DGGE)

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碳源及碳氮比对异养反硝化微生物异养反硝化作用的影响

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农村生态环境 2005年第2期21卷 42-45页

作者：傅利剑郭丹钊史春龙黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3... 详细信息

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3 作为唯一氮源进行反硝化作用,证明HP1至少有2种硝酸还原途径。连续培养方式下温度对菌株HP1异养反硝化作用中间产物的积累有影响,不同C/N时均有NH+4 积累,C/N为3时还有NO-2 的积累。

关键词：异养反硝化微生物反硝化作用碳源 C/N

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盐单胞菌属BYS-1四氢嘧啶合成基因ectABC克隆及其盐激表达

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微生物学报 2006年第1期46卷 28-32页

作者：何健黄星顾立锋蒋建东李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用SEFA-PCR技术从中度嗜盐菌***-1总DNA中克隆了四氢嘧啶合成基因ectABC及其上游序列(GenBank accession number DQ017757);OMIGA软件分析结果显示ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,大小分别为573bp1、251bp和387bp,预测编码的DAT(L-二氨基丁酸转氨酶)、DAA(L-二氨基丁酸乙酰转移酶)和ES(四氢嘧啶合酶)大小分别为21.1kDa(191 amino acid)、45.7kDa(417 amino acid)和14.5kDa(129 amino acid);将包含ectABC基因及其上游1000bp序列的片段克隆到pUC19中并转化***5α,转化子***(pUC19ECT)能够在盐激条件下合成四氢嘧啶,但其耐盐能力没有得到显著改善。

关键词：四氢嘧啶 ectABC基因 SEFA-PCR Halomonas sp.BYS-1 盐激表达

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外源甜菜碱提高恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的研究

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微生物学报 2006年第1期46卷 154-157页

作者：何健蒋建东贾开志黄星李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

研究了外源甜菜碱对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的影响并对其渗透保护机制进行了初步的探讨;结果表明培养基中添加甜菜碱可以改善DLL-1细胞在高盐培养基中的生长情况,添加150mg/L的甜菜碱可以使DLL-1在1.2mol/L NaCl... 详细信息

研究了外源甜菜碱对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的影响并对其渗透保护机制进行了初步的探讨;结果表明培养基中添加甜菜碱可以改善DLL-1细胞在高盐培养基中的生长情况,添加150mg/L的甜菜碱可以使DLL-1在1.2mol/L NaCl的基础盐培养基中生长,添加10mg/L的甜菜碱就足以显著缩短渗透胁迫条件下DLL-1细胞的延滞期和代时,增加生长量;和不添加对照相比,延滞期由24h缩短到6h,代时由60min缩短到35.7min,最大生长量OD610由1.29增长到1.57。在渗透胁迫条件下,细胞从外界快速吸收外源甜菜碱来代替自身相容性溶质的合成。

关键词：外源甜菜碱渗透保护耐盐性 Pseudomonas putida DLL-1

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两株抗乙酰羟酸合酶类除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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应用与环境生物学报 2008年第5期14卷 663-667页

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土... 详细信息

乙酰羟酸合酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类和嘧啶水杨酸类等乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值.本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到2株抗性细菌HR9和HR11,根据其表型特征、生理生化特性和16SrDNA序列系统发育分析,初步鉴定为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.).菌株HR9和HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L和8200μmol/L,且对各种乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性.利用PCR技术从HR9、HR11和实验室保存的一株除草剂敏感型克雷伯氏菌LB-2的总DNA中克隆到编码AHAS的基因ilvIH,其中ilvI编码大亚基即催化亚基,ilvH编码小亚基即调节亚基.比对结果表明,菌株HR11与菌株HR9的ilvI有6个位点的氨基酸存在差异,HR9、HR11与LB-2的ilvI各有20和16个位点的氨基酸存在差异.

关键词：乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvIH

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检测致畸物的gfp基因工程菌的构建

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应用与环境生物学报 2007年第1期13卷 83-86页

作者：顾立锋蒋建东何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

RecA与UvrA是细胞SOS系统中重要的修复蛋白,在细胞DNA损伤后诱导表达.将报告基因绿色荧光蛋白基因(gfpmut3a)分别置于recA和uvrA启动子调控下,构建成质粒pRecAgfp和pUvrAgfp,并转化***5α,构建成检测菌株ERS101和EUS101.试验发现,菌株ER... 详细信息

RecA与UvrA是细胞SOS系统中重要的修复蛋白,在细胞DNA损伤后诱导表达.将报告基因绿色荧光蛋白基因(gfpmut3a)分别置于recA和uvrA启动子调控下,构建成质粒pRecAgfp和pUvrAgfp,并转化***5α,构建成检测菌株ERS101和EUS101.试验发现,菌株ERS101和EUS101在致畸物吖啶橙处理后,GFP的表达量增高,菌悬液经507nm的蓝光激发后产生的绿色荧光明显增强,且与吖啶橙的浓度具有一定的相关性,即使在0.5μgmL-1的吖啶橙诱导下也能检测到荧光增强效应.对硝基酚等多种致畸物处理后的检测菌株均有荧光增强效应.

关键词： GFP 致畸物基因工程菌构建

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多功能降解菌Pseudomonas putida KT2440-DOP的构建与降解特性研究

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微生物学报 2006年第5期46卷 763-766页

作者：顾立锋何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

三唑磷水解酶基因为研究发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到模式菌株Pseudomonas... 详细信息

三唑磷水解酶基因为研究发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到模式菌株Pseudomonas putidaKT2440中,获得的工程菌PseudomonasputidaKT2440-DOP可以降解多种有机磷农药及芳香烃化合物;KT2440-DOP的有机磷水解酶活较出发菌株MP-4提高了一倍左右,且遗传性状稳定。

关键词：有机磷农药 tpd KT2440 工程菌构建

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根瘤菌与群体感应

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生态学杂志 2005年第5期24卷 547-550页

作者：郑会明钟增涛陈一楠朱军南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物生物工程重点开放实验室南京210095

细菌在高细胞密度下可以产生群体感应信号分子,调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物。酰基高丝氨酸内酯类化合物(acyl HSLs)是在根瘤菌中广泛存在的一类自体诱导物,该群体感应系统与根瘤菌和植物的共生作用密切相关。... 详细信息

细菌在高细胞密度下可以产生群体感应信号分子,调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物。酰基高丝氨酸内酯类化合物(acyl HSLs)是在根瘤菌中广泛存在的一类自体诱导物,该群体感应系统与根瘤菌和植物的共生作用密切相关。本文概述了AHLs介导的群体感应系统的组成及调控机制和不同根瘤菌中群体感应调节对根瘤菌生理行为及共生固氮的影响。

关键词：根瘤菌群体感应 AHLs 结瘤固氮

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稻秸对土壤细菌群落分子多态性的影响

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土壤学报 2005年第2期42卷 270-277页

作者：卜元卿黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

模拟稻秸原位还田条件,分别在水稻土和红壤中添加水稻秸秆培养70d ,第0、5、2 5、4 5、70天采集土样。采用非机械破壁法直接提取水稻土和红壤细菌总DNA ,水稻土细菌总DNA经过二次纯化;红壤细菌总DNA经过一次纯化后,PCR扩增其16SrDNAV3... 详细信息

模拟稻秸原位还田条件,分别在水稻土和红壤中添加水稻秸秆培养70d ,第0、5、2 5、4 5、70天采集土样。采用非机械破壁法直接提取水稻土和红壤细菌总DNA ,水稻土细菌总DNA经过二次纯化;红壤细菌总DNA经过一次纯化后,PCR扩增其16SrDNAV3可变区,均可获得清晰的目的条带,对扩增产物进行DGGE分析,结果显示:水稻土和红壤样品的DGGE条带增加,说明稻秸能够增加土壤细菌群落分子多态性的丰富度,随着培养期的延长,施有稻秸的处理中土壤细菌群落多态性的变化远远复杂于空白对照土壤中的细菌群落变化;

关键词：土壤细菌水稻土红壤群落总DNA 分子多态性还田 DGGE 细菌群纯化

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