检索结果-内蒙古大学图书馆

应用与环境生物学报 2007年第1期13卷 83-86页

作者：顾立锋蒋建东何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

RecA与UvrA是细胞SOS系统中重要的修复蛋白,在细胞DNA损伤后诱导表达.将报告基因绿色荧光蛋白基因(gfpmut3a)分别置于recA和uvrA启动子调控下,构建成质粒pRecAgfp和pUvrAgfp,并转化***5α,构建成检测菌株ERS101和EUS101.试验发现,菌株ER... 详细信息

RecA与UvrA是细胞SOS系统中重要的修复蛋白,在细胞DNA损伤后诱导表达.将报告基因绿色荧光蛋白基因(gfpmut3a)分别置于recA和uvrA启动子调控下,构建成质粒pRecAgfp和pUvrAgfp,并转化***5α,构建成检测菌株ERS101和EUS101.试验发现,菌株ERS101和EUS101在致畸物吖啶橙处理后,GFP的表达量增高,菌悬液经507nm的蓝光激发后产生的绿色荧光明显增强,且与吖啶橙的浓度具有一定的相关性,即使在0.5μgmL-1的吖啶橙诱导下也能检测到荧光增强效应.对硝基酚等多种致畸物处理后的检测菌株均有荧光增强效应.

关键词： GFP 致畸物基因工程菌构建

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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

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土壤学报 2007年第4期44卷 727-733页

作者：管莉菠蔡天明李波何健李顺鹏崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约... 详细信息

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料。为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp)。随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537)。构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株***21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物。且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率。这表明ppk基因在***中的过量表达,导致了***菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。

关键词：多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列快速染色体步移方法(SEFA—PCR)

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PNP降解相关基因温敏突变株的分离及其特性研究

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微生物学通报 2007年第1期34卷 32-35页

作者：邓海华李晓丹曹慧王世明黄婷婷崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变株中得到1株温度敏感型突变株MT54。根据转座子上的已知序列设计引物以MT54基因组DNA为模板进行PCR扩增,证实MT54的染色体中有转座子插入。MT54在3... 详细信息

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变株中得到1株温度敏感型突变株MT54。根据转座子上的已知序列设计引物以MT54基因组DNA为模板进行PCR扩增,证实MT54的染色体中有转座子插入。MT54在30℃条件下能够以对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)为唯一碳源生长,但在37℃不能生长。格里斯试色剂法检测NO_2^-的生成情况进一步证明了MT54的这种特性。通过30℃和37℃两种温度条件下MT54和原始出发菌株DLL-E4对PNP和对苯二酚降解情况的比较,推测温敏突变位点可能发生在与PNP降解相关的基因中。

关键词：对硝基苯酚对苯二酚转座子突变温敏突变株

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DDT降解细菌W-1的分离鉴定及其降解特性研究

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农业环境科学学报 2007年第2期26卷 568-571页

作者：顾立锋何健张明星王哲王融李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从受DDT污染的土壤中采取土样,经驯化富集后分离得到一株能够降解DDT的革兰氏阳性细菌W-1,通过生理生化鉴定,结合16SrDNA聚类分析,将W-1鉴定为短波单胞菌属(Brevunmdimonas sp.)。采用室内培养方法,研究了该菌株的降解特性。结果表明,W-... 详细信息

从受DDT污染的土壤中采取土样,经驯化富集后分离得到一株能够降解DDT的革兰氏阳性细菌W-1,通过生理生化鉴定,结合16SrDNA聚类分析,将W-1鉴定为短波单胞菌属(Brevunmdimonas sp.)。采用室内培养方法,研究了该菌株的降解特性。结果表明,W-1能在含10mg·L-1DDT的基础盐液体培养基中降解DDT,10d后降解率达到67.4%。添加葡萄糖可以促进W-1菌体生长及对DDT的降解;结构类似物联苯和4-氯苯甲酸能抑制W-1对DDT的降解,而添加表面活性剂Triton100和Tween20均可以提高W-1对DDT的降解。该菌株在250mL摇瓶中降解DDT的最适温度为30℃,最适pH值为8.0。

关键词： DDT 降解 W-1 分离鉴定

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阿特拉津降解菌Arthrobacter sp. AG1降解基因研究

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生物工程学报 2007年第5期23卷 789-793页

作者：代先祝蒋建东顾立峰潘荣清李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部环境微生物工程重点开放实验室西南大学资源环境学院微生物学实验中心重庆400715

菌株Arthrobacter sp. AG1能以4000mg/L的阿特拉津(AT)为唯一碳源、氮源和能源生长。通过设计特异引物从AG1中扩增出阿特拉津氯水解酶基因trzN的全序列,该基因与已报道的trzN基因序列相似性为99%。AG1菌株中含有两个大于100kb的质粒,Sou... 详细信息

菌株Arthrobacter sp. AG1能以4000mg/L的阿特拉津(AT)为唯一碳源、氮源和能源生长。通过设计特异引物从AG1中扩增出阿特拉津氯水解酶基因trzN的全序列,该基因与已报道的trzN基因序列相似性为99%。AG1菌株中含有两个大于100kb的质粒,Southern杂交结果显示trzN和atzB基因均位于其中较大的一个质粒pAG1上。将AG1菌株在LB液体培养基中转接三代后,发现34%的细菌细胞丢失了降解活性,但却未发现丢失质粒,PCR扩增结果表明突变子丢失了trzN基因,但atzB和atzC基因未丢失,说明降解活性的缺失是trzN基因片段从质粒上丢失的结果,表明trzN基因在环境中存在水平转移现象,暗示菌株AG1中的阿特拉津降解基因是基因的水平转移重组的结果。

关键词： Arthrobacter sp. AG1 trzN 基因水平转移阿特拉津降解

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城市污泥生物沥滤过程中抑制作用的研究

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南京农业大学学报 2007年第4期30卷 40-45页

作者：陈嘉李顺鹏黄焕忠顾向阳南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室/生命科学学院江苏南京210095 香港浸会大学生物学系

对好氧剩余污泥重金属生物沥滤过程中可能存在的抑制作用进行了系统研究。结果表明,丽华污泥(取自常州丽华污水处理厂)和城东污泥(苏州城东污水处理厂)及其上清液对氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)的生长及Fe2+氧化作... 详细信息

对好氧剩余污泥重金属生物沥滤过程中可能存在的抑制作用进行了系统研究。结果表明,丽华污泥(取自常州丽华污水处理厂)和城东污泥(苏州城东污水处理厂)及其上清液对氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)的生长及Fe2+氧化作用均具有强烈抑制作用,而乙酸和丙酸是引起上述抑制作用的主要因子。采用不同固体含量污泥悬液进行模拟培养试验,结果证明污泥中的乙酸和丙酸主要来源于浓缩池内污泥有机质的厌氧分解。在污泥生物沥滤过程中,乙酸和丙酸的存在对Zn的溶出效率没有不利影响,但污泥的酸化速率显著下降,丽华污泥和城东污泥中Cu的沥滤时间分别比对照延长6 d和2 d,严重影响生物沥滤工艺的总体效率。

关键词：污泥重金属生物沥滤氧化亚铁硫杆菌抑制作用有机酸

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外源16S rRNA在大肠杆菌中的可替换性研究(英文)

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中国农业科技导报 2007年第4期9卷 85-94页

作者：李晓丹杨瑾曹慧崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

16S rRNA对于构建功能性核糖体是十分重要的,人们普遍将其作为原核生物进化中保守的系统发育标志。为了进一步研究16S rRNA的进化,本文将Escherichia coli中最后一个拷贝的16S rRNA基因替换为Bacillus subtilis的16S rRNA基因,得到了菌... 详细信息

16S rRNA对于构建功能性核糖体是十分重要的,人们普遍将其作为原核生物进化中保守的系统发育标志。为了进一步研究16S rRNA的进化,本文将Escherichia coli中最后一个拷贝的16S rRNA基因替换为Bacillus subtilis的16S rRNA基因,得到了菌株SQ110BSX。菌株SQ110BSX的代时与出发菌株SQ110基本一致,但是SQ110BSX表现出冷敏感性,而且rRNA/蛋白比值为SQ110的148%。实验结果表明,菌株SQ110BSX中的核糖体效率明显下降。由于***和***在遗传距离上较远,两者的可替换性证明了16S rRNA的高度保守性。

关键词： 16S rRNA 核糖体效率 rRNA/蛋白比值保守性

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抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：孙笑非黄星李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特性测定、16S rDNA 序列同源性比较和系统进化树的分析将甲磺隆抗性菌 Lm10鉴定为假单孢菌(***)。菌株 Lm10对甲磺隆的最高耐受浓度达到13.75nmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 Lm10总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,氨基酸比对结果表明菌株 Lm10与标准菌株 kt2440的 IlvI 的5个位点有差异,而小亚基则与标准菌株 kt2440的 ilvH 完全相同。为阐明抗性产生机制和通过基因工程获得性能更优良的乙酰乳酸合酶基因提供了重要的理论基础和应用价值。

关键词： ALS inhibitors herbicides herbicides-resistant bacterium acetohydroxyacid synthase ilvIH

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两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到二株磺酰脲类除草剂抗性细菌 HR9和 HR11,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA 序列系统发育分析,将 HR9和 HR11初步鉴定为克雷伯氏菌 (Klebsiella sp.)。菌株 HR9和 HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L 和8200 μmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 HR9和 HR11 总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,比对结果表明菌株 HR11与菌株 HR9的 IlvI 有6个位点的氨基酸有差异,HR9、HR11与除草剂敏感型的 *** 的 IlvI 各有37和34个位点的氨基酸有差异。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvH

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人工接种堆肥和自然堆肥微生物区系与分子多态性的变化

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生态与农村环境学报 2006年第1期22卷 29-33页

作者：徐大勇黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图... 详细信息

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图谱显示,两种堆肥不同时期存在不同的细菌种群,其条带数量亦呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势。堆肥升温期条带丰富但优势条带不明显;堆肥高温期条带数量减少但出现优势条带,表明高温阶段以嗜热菌或耐高温菌为主;堆肥降温期条带数量再次增多;堆肥腐熟期条带数量少且无优势条带,表明腐熟阶段微生物种群数量少且代谢强度趋于平缓。(3)DGGE图谱表明,人工接种菌株成为堆肥高温期优势菌株。人工接种增加了堆肥中微生物总量,提高了堆肥微生物种群多样性,并且促进了堆肥菌群演替,从而缩短堆肥腐熟时间。

关键词：堆肥微生物群落分子多态性变性梯度凝胶电泳(DGGE)

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