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禾谷镰刀菌拮抗菌Bacillus amyloliquefaciens AX-3的分离鉴定及拮抗物质的鉴定

中国生物防治学报 2020年第1期36卷 125-134页

作者：徐丽梅赫丹王刚徐圣佳史建荣徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南京)/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心/江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014

禾谷镰刀菌Fusarium graminearum可引起小麦赤霉病,该病严重威胁我国小麦的质量安全。本研究从生物防治的角度出发,分离筛选拮抗菌,研究拮抗菌的拮抗特性和拮抗能力。试验采用系列稀释法和平板对峙法从小麦样品中分离筛选获得禾谷镰刀... 详细信息

禾谷镰刀菌Fusarium graminearum可引起小麦赤霉病,该病严重威胁我国小麦的质量安全。本研究从生物防治的角度出发,分离筛选拮抗菌,研究拮抗菌的拮抗特性和拮抗能力。试验采用系列稀释法和平板对峙法从小麦样品中分离筛选获得禾谷镰刀菌拮抗菌AX-3,根据16SrDNA基因、gyrB基因序列构建的系统发育进化树以及生理生化特性结果,菌株AX-3被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。通过平板对峙法测定拮抗谱,结果显示AX-3对多种镰刀菌属病原真菌都具有良好的拮抗特性,抑菌圈半径为17~32 mm,表明AX-3具有广谱的拮抗性能。采用柱层析及制备液相色谱法对AX-3中的拮抗物质进行分离纯化,然后使用高分辨质谱及核磁共振的方法对拮抗物质进行结构鉴定表明,解淀粉芽胞杆菌AX-3产生的一种抗菌物质为macrolactin A。

关键词：禾谷镰刀菌解淀粉芽胞杆菌拮抗物质

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除草剂的微生物降解研究进展

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生物资源 2018年第2期40卷 93-100页

作者：褚翠伟阮志勇姚利何健蒋建东朱启黎周口师范学院生命科学与农学学院河南周口466001 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所北京100081 盐城师范学院海洋与生物工程学院江苏盐城224002 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江西省南康市教师进修学校江西赣州341400

微生物降解是环境中农药消解的重要因素,分离筛选纯培养的农药降解微生物并阐述其降解机制为微生物修复环境的应用提供重要的菌株资源和理论依据。本文简述了广泛使用的8类除草剂（包括有机磷类、磺酰脲类、氯乙酰胺类、均三嗪类、芳氧... 详细信息

微生物降解是环境中农药消解的重要因素,分离筛选纯培养的农药降解微生物并阐述其降解机制为微生物修复环境的应用提供重要的菌株资源和理论依据。本文简述了广泛使用的8类除草剂（包括有机磷类、磺酰脲类、氯乙酰胺类、均三嗪类、芳氧基苯氧基丙酸酯类、苯氧乙酸类、二硝基苯胺类和硫代氨基甲酸酯类除草剂）的降解微生物资源及其降解途径和降解基因的研究进展,并分析了目前除草剂污染修复存在的问题及未来的发展方向。

关键词：除草剂微生物降解降解机制

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玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库的构建

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江苏农业学报 2017年第2期33卷 -页

作者：朱子薇潘丽婷周义东王燕霞史建荣洪青徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全风险评估实验室(南京)/江苏省转基因安全评价公共服务中心/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心江苏南京210014

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤... 详细信息

构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01中,50℃高温条件下,把穿梭载体pMarA上转座子TnYLB-1随机插入到菌株MQ01基因组中,获得转座子插入突变的阳性克隆,构建MQ01菌株的突变体文库,随机挑选突变子采用PCR和Southern杂交方法进行验证。本研究成功获得了3 000多个TnYLB-1转座子插入突变的阳性克隆,构建了*** MQ01的突变子文库,结果显示TnYLB-1转座子以单拷贝的形式随机插入到*** MQ01的基因组DNA中,从而可以从转座子突变文库中筛选丢失玉米赤霉烯酮降解功能的转座突变子,从菌株MQ01中克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因。

关键词：玉米赤霉烯酮 BacillusamyloliquefaciensMQ01 转座子突变突变体文库

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一株烟草秸秆降解菌的分离、鉴定及酶学性质研究

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土壤 2016年第5期48卷 939-945页

作者：邹芳赵娟雷燕萍祖朝龙曹慧南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 安徽省农业科学院烟草研究所合肥230031

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。... 详细信息

从皖南地区烟稻轮作田土壤中经CMC-Na初筛获得5株纤维素降解菌,经DNS法测定纤维素酶活性复筛得到一株降解活性较高的降解菌YC-2。根据该菌16S r DNA序列比对结果,结合形态和生理生化特征,确定YC-2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对YC-2酶学性质进行相关研究,并分析YC-2对烟碱的耐受情况及对烟草秸秆的降解情况,结果表明：在7天内,YC-2对烟草秸秆降解率为10.14%;酶学特性表现为最适反应温度为60℃且在15-60℃之间具有稳定性;最适反应pH为7.0,在pH 4.0-7.5范围内稳定性较好;YC-2在浓度为1-2 g/L烟碱中能快速生长,而在高浓度的烟碱中生长受到抑制。因此,菌株YC-2产纤维素酶活性较高、相对耐热耐碱且对烟杆有一定分解作用,通过进一步诱变选育和发酵条件优化有较好的田间应用潜力。

关键词：枯草芽孢杆菌纤维素酶产酶特性

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赤霉病菌拮抗菌Bacillus subtilis AF0907抗菌物质研究

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中国生物防治学报 2015年第3期31卷 378-385页

作者：胡晓丹王建伟李孝敬祭芳史建荣徐剑宏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京210014 江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心南京210014

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平... 详细信息

菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平板对持法对拮抗物质进行定位,结果表明该菌分泌的拮抗物质主要位于细胞上清液中。采用不同饱和度的硫酸铵沉淀细胞上清液,确定了60%的硫酸铵饱和度是沉淀该拮抗物质的最佳条件;分别研究了温度、p H值、蛋白酶K、氯仿对该拮抗物质活性的影响,结果表明该拮抗物质在低温下比较稳定,在60℃以上的高温下,活性迅速降低;在酸性或碱性条件下不稳定;该拮抗物质分别加入蛋白酶K和氯仿作用后拮抗活性分别下降了60.68%、80.07%,因此,初步判断该拮抗物质为蛋白质。利用DEAE-52离子交换柱层析法分离纯化了该拮抗蛋白并进行了SDS-PAGE电泳,结果显示该拮抗蛋白的分子量为48 k Da;利用PPSQ-31A蛋白自动测序仪测定拮抗蛋白N-末端15个氨基酸序列为:His-Glu-Phe-Pro-Thr-Tyr-Lys-His-Met-Tyr-Gln-Val-Met-His-Leu。

关键词：小麦赤霉病菌枯草芽孢杆菌拮抗菌拮抗蛋白

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三种不同分子标记技术对灵芝单核体多态性的研究

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食品工业科技 2014年第15期35卷 175-179页

作者：徐凯唐传红张劲松杨焱唐庆九刘艳芳赵明文南京农业大学生命科学学院/农业部农业微生物环境工程重点开放实验室江苏南京210095 国家食用菌工程技术研究中心/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

为了探讨灵芝***原生质体单核体间遗传多态性,为育种材料的筛选提供分子水平依据。运用ISSR、SRAP、RAPD3种分子标记技术对制得的34株灵芝单核体进行了遗传多样性分析和聚类分析。结果显示,三种分子标记技术共扩增出347条条带,多态性条... 详细信息

为了探讨灵芝***原生质体单核体间遗传多态性,为育种材料的筛选提供分子水平依据。运用ISSR、SRAP、RAPD3种分子标记技术对制得的34株灵芝单核体进行了遗传多样性分析和聚类分析。结果显示,三种分子标记技术共扩增出347条条带,多态性条带为308条,多态比率为88.76%,其中ISSR-PCR扩增效果较好,多态性条带和多态比率最高;119-123与其余菌株相异系数最大,或已发生基因突变。根据综合分析结果,在相异系数为0.67时,可以把剩余33株菌株分为两大类群,Ⅱ类含5株菌株,分别为119-180、119-210、119-212、G0119和119-214,剩余的28株菌株为Ⅰ类。研究表明,ISSR、SRAP和RAPD分子标记可用于灵芝单核体多态性研究,这将为育种材料的筛选提供帮助,减少育种工作量和风险。

关键词：灵芝分子标记遗传多态性

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灵芝基因组SSR位点分布与分析

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上海农业学报 2014年第5期30卷 32-37页

作者：徐凯张劲松唐传红杨焱唐庆九唐川王天娇赵明文国家食用菌工程技术研究中心/农业部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌加工技术研发分中心/上海市农业遗传育种重点实验室/上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 南京农业大学生命科学学院/农业部农业微生物环境工程重点开放实验室南京210095

旨在通过对灵芝基因组SSR位点的统计分析,为担子菌基因组的特征描述、遗传分析及分子标记的筛选提供基础信息。基于数据库中灵芝基因组数据,通过SSR Hunter 1.3软件并结合人工查找的方式分析其SSR数量、组成和位点分布等情况。结果表明... 详细信息

旨在通过对灵芝基因组SSR位点的统计分析,为担子菌基因组的特征描述、遗传分析及分子标记的筛选提供基础信息。基于数据库中灵芝基因组数据,通过SSR Hunter 1.3软件并结合人工查找的方式分析其SSR数量、组成和位点分布等情况。结果表明:灵芝基因组序列总长度为4.19×107bp,13条染色体共存在3 502个SSR位点,SSR碱基总长度为6.92×104bp,占基因组总数的0.17%,平均每隔11.96 kb存在1个SSR位点,三碱基和六碱基SSR所占比例最大,占基因组内SSR位点总数的74.62%,出现较多的基序为(G)n、(C)n、(GA)n、(CT)n、(GAC)n、(TCG)n、(TAATC)n和(GATGAG)n;三核苷酸、五核苷酸和六核苷酸SSR在染色体水平上分布较均匀,而单核苷酸、二核苷酸和四核苷酸SSR分布差异较大。灵芝基因组内SSR分布呈现一定的规律性,基于基因组数据发掘的SSR位点能够为SSR分子标记的开发提供信息,并有助于灵芝高密度遗传图谱的构建、重要功能基因克隆及基因功能的研究等。

关键词：灵芝 SSR 分布位点分析

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基于SRAP、ISSR和RAPD分析灵芝G0130菌株单核体多态性

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工业微生物 2014年第4期44卷 39-45页

作者：徐凯唐传红王天娇杨炎唐庆九刘艳芳张劲松国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室江苏南京210095

旨在探讨灵芝原生质体单核体间遗传多态性，为育种材料的筛选提供分子水平依据。采用原生质体单核化获得灵芝Ganoderma lueidum36株单核体，从筛选出的12组SRAP引物，13条ISSR引物和13条RAPD引物对供试菌株的多态性综合分析结果显示，... 详细信息

旨在探讨灵芝原生质体单核体间遗传多态性，为育种材料的筛选提供分子水平依据。采用原生质体单核化获得灵芝Ganoderma lueidum36株单核体，从筛选出的12组SRAP引物，13条ISSR引物和13条RAPD引物对供试菌株的多态性综合分析结果显示，共扩增出320个条带，其中265条表现出多态性，多态位点百分率为82．81％；根据扩增结果采用软件NTsys2．10e计算菌株间的遗传相似系数（GS值）并进行聚类分析，37个菌株间GS值的变化范围为0．3741—0．9852；130—29、130．33和130-53等7株相同交配型单核体聚为一类，其余29株单核体与出发菌株G0130聚为一类，但并非严格按照交配型聚类，且单核体表现出发菌株全部或部分带型，同时也表现其所不具有的带型。研究表明，SRAP、ISSR和RAPD标记可以用于灵芝单核体多态性研究，并可为交配型鉴定提供参考，这将为育种材料的筛选提供帮助，减少育种工作量和风险。

关键词：灵芝单核体分子标记育种

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Hyphomicrobium ***-1菌株修复甲胺磷乙酰甲胺磷和水胺硫磷污染土壤的实验研究

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农业环境科学学报 2013年第1期32卷 81-87页

作者：王莉凌琪伍昌年李顺鹏蒋建东王敏安徽建筑工业学院环境与能源工程系合肥230022 南京农业大学生命科学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

在实验室条件下,评估了菌株Hyphomicrobium ***-1对甲胺磷、乙酰甲胺磷和水胺硫磷污染土壤的修复能力。革兰氏阴性菌MAP-1在土壤中能很好的定殖,以1×107CFU·g-1soil的浓度接种于土壤,15d后菌株浓度仅下降了1个数量级。土壤非... 详细信息

在实验室条件下,评估了菌株Hyphomicrobium ***-1对甲胺磷、乙酰甲胺磷和水胺硫磷污染土壤的修复能力。革兰氏阴性菌MAP-1在土壤中能很好的定殖,以1×107CFU·g-1soil的浓度接种于土壤,15d后菌株浓度仅下降了1个数量级。土壤非灭菌状态下,30℃pH6.8,接种量为1×107CFU·g-1soil时,9d内可分别将土壤100mg·kg-1甲胺磷、100mg·kg-1乙酰甲胺磷完全降解,13d内将50mg·kg-1水胺硫磷完全降解。添加甲醇和加大接种量能促进土壤中三种有机磷农药降解,土壤是否处于淹水状态对其降解影响不大。在20～30℃之间,土壤中三种农药有比较好的去除效果。土壤投加菌株MAP-1,第10d可使100mg·kg-1甲胺磷和100mg·kg-1乙酰甲胺磷抑制的土壤脱氢酶、蔗糖酶和脲酶活性恢复至施农药前水平,对50mg·kg-1水胺硫磷抑制的这三种土壤酶活性也有较大的恢复作用。可见将菌株MAP-1应用于降低甲胺磷、乙酰甲胺磷和水胺硫磷对土壤的潜在风险是可接受的。

关键词： Hyphomicrobium sp MAP-1 甲胺磷乙酰甲胺磷水胺硫磷土壤生物修复

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降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性

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中国农业科学 2013年第11期46卷 2240-2248页

作者：徐剑宏潘艳梅胡晓丹祭芳殷宪超史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,... 详细信息

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia ***-1后,用PBS离心洗涤菌体后采用超声波破碎,用硫酸铵沉淀菌体破碎液获得粗酶液;然后在不同的酶反应体系中检测3-AC-DON氧化酶的酶活性。【结果】降解菌DDS-1产生3-AC-DON氧化酶的最适条件为:pH 7.0、25℃、培养36 h;该酶酶反应的最适温度为35℃,最适反应pH为7.0;该酶在20—40℃,pH 5.0—9.0的范围内能保持80%以上的酶活性;大多数金属离子在浓度为0.2—2 mmol.L-1对3-AC-DON氧化酶有促进作用;乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶活性有抑制作用;酶的定域试验结果显示该酶为胞内酶;DDS-1产生的粗酶液能很好地降解小麦中的DON、3-AC-DON毒素。【结论】Devosia ***-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究表明,DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶具有较好的温度和酸碱稳定性,该酶反应需要金属离子作为辅因子。

关键词： 3-AC-DON 降解徳沃斯氏菌酶活性

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