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土壤 2009年第3期41卷 425-431页

作者：唐明灯吴龙华李振高骆永明胡锋盛下放江春玉中国科学院土壤环境与污染修复重点实验室(中国科学院南京土壤研究所) 南京210008 南京农业大学资源与环境科学学院南京210095 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用培养试验和盆栽试验研究了一株无色菌(Achromatium sp.)对复合污染土壤上Cu、Zn的溶出效果及其对海州香薷(Elsholtzia splendens)生长和Cu、Zn吸收性的影响。结果表明,菌株在培养试验(pH=4.65)中的产酸效果较盆栽试验(7.3<pH<... 详细信息

利用培养试验和盆栽试验研究了一株无色菌(Achromatium sp.)对复合污染土壤上Cu、Zn的溶出效果及其对海州香薷(Elsholtzia splendens)生长和Cu、Zn吸收性的影响。结果表明,菌株在培养试验(pH=4.65)中的产酸效果较盆栽试验(7.3生物量和地上部Cu浓度,显著(p<0.05)提高海州香薷对污染土壤中Cu的去除潜力。

关键词：细菌 pH 重金属海州香薷植物修复

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真姬菇栽培菌株的ITS和SSR分析

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上海农业学报 2009年第3期25卷 59-64页

作者：董岩陈辉赵明文冯志勇南京农业大学生命科学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室南京210095 农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业科学院食用菌研究所上海201106

采用ITS和SSR分子标记技术,对27个真姬菇菌株进行遗传分析。通过内转录间隔区(ITS)区域测定和比较分析,结果显示:供试菌株ITS序列长度为594 bp,与GenBank上登录的真姬菇菌株ITS序列相似度为99%以上,在种的水平上证明供试菌株为真姬菇。... 详细信息

采用ITS和SSR分子标记技术,对27个真姬菇菌株进行遗传分析。通过内转录间隔区(ITS)区域测定和比较分析,结果显示:供试菌株ITS序列长度为594 bp,与GenBank上登录的真姬菇菌株ITS序列相似度为99%以上,在种的水平上证明供试菌株为真姬菇。利用简单重复序列(SSR)标记技术和转移扩增技术,根据香菇、糙皮侧耳、灰盖鬼伞基因组序列设计引物,对真姬菇供试菌株基因组DNA进行扩增。从54对引物中筛选出23对能够扩增出稳定带型且菌株之间带型差异明显的SSR引物。利用23对引物对全部供试菌株进行扩增,共扩增133条条带,其中多态性条带为108条,多态性比率达到81.2%。UPGMA聚类分析结果表明:大部分常规栽培菌株和工厂化栽培菌株聚在不同组,说明两者之间的遗传背景存在明显差异。根据获得菌株的特有SSR标记分析表明:利用7对引物可以将工厂化栽培菌株区分开,其中2个工厂化栽培菌株各自具有1条特异条带,其他工厂化栽培菌株均可通过引物组合法区分开。

关键词：真姬菇简单重复序列(SSR) 遗传多样性内转录间隔区(ITS)

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棕点湍蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化、基因克隆及活性分析

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Zoological Research 2009年第2期30卷 165-170页

作者：冯浩李宗杰吕毅王美娟李建许南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095 上海应用技术学院上海200235 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室云南昆明650223

通过分离纯化棕点湍蛙(Amolops loloensis)皮肤分泌液中的生物活性物质,得到有促胰岛素释放活性的分离峰,并鉴定其结构。采用葡聚糖SephadexG-50凝胶层析和反相高效液相(RP-HPLC)等手段对棕点湍蛙皮肤分泌液进行分离纯化,利用胰岛素释... 详细信息

通过分离纯化棕点湍蛙(Amolops loloensis)皮肤分泌液中的生物活性物质,得到有促胰岛素释放活性的分离峰,并鉴定其结构。采用葡聚糖SephadexG-50凝胶层析和反相高效液相(RP-HPLC)等手段对棕点湍蛙皮肤分泌液进行分离纯化,利用胰岛素释放实验进行活性检测,Edman降解法测定活性峰的氨基酸序列,反转录法构建cDNA文库并克隆其基因。得到一个具有显著的促胰岛素释放活性的十六肽,测得其氨基酸序列为:FMPIVGKSMSGLSGKL-NH2,命名为amolopin-1。由cDNA(开放阅读框为192bp)推导的氨基酸一级结构显示,其前体由64个氨基酸残基(aa)组成,包括高度保守的信号肽(22aa),酸性肽以及成熟肽。经过数据库序列比对,从棕点湍蛙皮肤中得到一个新的促胰岛素释放肽,进一步分析其作用机理和药代动力学,极有可能得到一个新的治疗糖尿病的降糖药物。

关键词：棕点湍蛙皮肤分泌液促胰岛素释放肽胰岛素分泌

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采用变性梯度凝胶电泳研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构

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微生物学报 2009年第2期49卷 227-232页

作者：何丽鸿陈明杰潘迎捷农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201106 南京农业大学生命科学院微生物系南京210095 上海水产大学上海200090

【目的】对双孢蘑菇培养料"后发酵"期间内的细菌群落结构进行了初步的研究,希望利用现代分子生态学的方法能快速、准确地对培养料发酵过程中的微生物群落结构进行动态的检测。【方法】采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradie... 详细信息

【目的】对双孢蘑菇培养料"后发酵"期间内的细菌群落结构进行了初步的研究,希望利用现代分子生态学的方法能快速、准确地对培养料发酵过程中的微生物群落结构进行动态的检测。【方法】采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE),对取自双孢蘑菇培养料"后发酵"不同时期的七份样品的特异性扩增细菌16S rDNA的V3可变区进行分析。【结果】双孢蘑菇培养料中的细菌组成要远远丰富于人们用传统的分离方法所获得的类群,"空气调节"时期的培养料中不仅检测到了前人用经典培养方法获得的Bacillus属嗜热细菌,还发现了一些未曾报道的Bacilli门的成员,如Trichococcus属、Planococcus属和Caryophanon属,以及γ-Proteobacteria亚纲。而在"后发酵"刚开始和即将结束的培养料中分别检测到了Thermus thermophilus和α-Proteobacteria亚纲的细菌,这些是近年来利用分子生物学方法在各类高温堆肥中发现的新类群;【结论】发现双孢蘑菇培养料"后发酵"过程中细菌的群落结构发生了明显的变化,在双孢蘑菇培养料"后发酵"过程中还发现了大量目前尚未获得培养的细菌类群。

关键词：双孢蘑菇培养料后发酵细菌群落结构 PCR-DGGE

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灵芝羊毛甾醇合酶基因的克隆及其表达特性研究

灵芝羊毛甾醇合酶基因的克隆及其表达特性研究

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中国菌物学会2009学术年会

作者：尚常华赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室

三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,三萜类化合物是通过甲羟戊酸途径,由法呢酯焦磷酸产生鲨烯、再转化成2,3-氧化鲨烯,最后经过一系列的氧化、还原和环化反应形成的。羊毛甾醇合酶(LS)处于甲羟戊酸途径中的第二个分支点,是类异戊二烯生... 详细信息

三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,三萜类化合物是通过甲羟戊酸途径,由法呢酯焦磷酸产生鲨烯、再转化成2,3-氧化鲨烯,最后经过一系列的氧化、还原和环化反应形成的。羊毛甾醇合酶(LS)处于甲羟戊酸途径中的第二个分支点,是类异戊二烯生物合成过程中的一个关键酶,它可以催化2,3-氧化鲨烯环化生成羊毛甾醇.

关键词：灵芝三萜羊毛甾醇合酶基因功能验证上游启动子表达谱

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利用ITS和SRAP分子标记对中国的白灵菇和欧洲的侧耳属菌株进行亲缘关系鉴定

利用ITS和SRAP分子标记对中国的白灵菇和欧洲的侧耳属菌株进行亲...

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中国菌物学会2009学术年会

作者：姜超赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室

为了评价白灵菇的分类地位,本文采用了内转录间隔区(ITS)序列分析和相关序列扩增多态性(SRAP)两种分子标记技术,系统分析包括我国白灵菇商业菌株和欧洲Pleurotusnebrodensis菌株在内的34株侧耳属菌株的DNA多态性。ITS序列分析结果显示,... 详细信息

为了评价白灵菇的分类地位,本文采用了内转录间隔区(ITS)序列分析和相关序列扩增多态性(SRAP)两种分子标记技术,系统分析包括我国白灵菇商业菌株和欧洲Pleurotusnebrodensis菌株在内的34株侧耳属菌株的DNA多态性。ITS序列分析结果显示,对ITS序列进行比对分析,结果显示全部供试菌株的ITS序列长度范围为534～589bp。从序列长度变异来看,ITS1区序列长度变化范围为184～255bp,稍大于ITS2区的180～200bp;5.8S序列相对保守,只有154bp和158bp两种长度。所有侧耳菌株无论是ITS1区还是ITS2区(G+C)%都比较低,ITS1平均为42.5%,ITS2平均为43.9%。基于ITS序列信息,构建了34株供试菌株的系统发育树,结果显示:白灵菇与Pleurotus nebrodensis具有很近的亲缘关系,Pleurotus nebrodensis菌株的多态性更丰富;多数Pleurotus eryngii菌株聚在一组;3株Pleurotus elaeoselini聚在一起;Pleurotus ferulae菌株没有独立聚为一组,供试菌株的ITS序列变异不仅表现在碱基的变异,也表现在区域长度的变异。用筛选出的7对扩增条带清晰、多态性丰富、稳定性好的引物组合对34株供试菌株进行SRAP扩增,共得到420条具有重复性的条带,且均为多态性条带,多态性比率为100%。每对引物的扩增效率不同,扩增条带数目为53～71条不等,平均每对引物扩增出60条条带,其中F1-R4扩增条带数最多,为71条条带。基于SRAP标记信息,构建了供试菌株的系统发育树,聚类分析结果与ITS基本一致,表明SRAP标记可以作为侧耳菌株分类和遗传多样性分析的有效技术手段。ITS序列分析和SRAP分子标记分析结果表明:白灵菇和Pleurotus nebrodensis具有很近的遗传关系,二者很可能为同一菌种;Pleurotus nebrodensis菌株的多态性较白灵菇菌株丰富,中国的白灵菇菌株的遗传背景较单一;供试的Pleurotus ferulae菌株不能聚在一组,各菌株之间遗传差异较大。ITS和SRAP两种标记联合使用可以作为侧耳菌株分类及遗传多样性研究的有效手段。

关键词：白灵菇 Pleurotus nebrodensis 内转录间隔区(ITS) 相关序列扩增多态性(SRAP) 遗传多样性

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采用变性梯度凝胶电泳研究羊肚菌土壤真菌群落结构

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食用菌学报 2009年第2期16卷 6-9页

作者：沈洪汪虹赵永昌冯爱萍陈明杰潘迎捷农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201106 南京农业大学生命科学院微生物系江苏南京210095 云南省农业科学院生物技术资源研究所云南昆明650205 上海海洋大学上海200090

采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)技术以土壤微生物群体的基因组DNA为研究对象,通过比较羊肚菌(Morchella sp.)出菇土壤及对照土壤中各种真菌的28S rDNA基因信息来了解土壤微生物的多样性。结果发现,测得... 详细信息

采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)技术以土壤微生物群体的基因组DNA为研究对象,通过比较羊肚菌(Morchella sp.)出菇土壤及对照土壤中各种真菌的28S rDNA基因信息来了解土壤微生物的多样性。结果发现,测得的12种真菌中,盘菌纲的有10种,异担子菌纲1种,还有1种未确定。所取2份土样中仅羊肚菌生长土壤中检测出有羊肚菌;2份样品在优势真菌种群上有一定的区别,盘菌纲真菌群落存在很大的差异,羊肚菌出菇土壤的真菌丰度低于对照,可能与土壤中羊肚菌优势种群对其它种群的抑制作用有关。

关键词：羊肚菌土壤真菌群落 PCR-DGGE

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采用扩增核糖体DNA限制性分析(ARDRA)研究双孢蘑菇培养料后发酵过程中的细菌群落结构(Ⅱ)-细菌群落结构ARDRA分析

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食用菌学报 2009年第1期16卷 1-5页

作者：何丽鸿于荣利陈明杰潘迎捷中华人民共和国农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201106 南京农业大学生命科学院微生物系江苏南京210095 上海海洋大学上海200090

采用ARDRA对双孢蘑菇[Agaricus bisporus(Large)Sing.]培养料后发酵过程中的细菌群落结构进行研究。细菌16S rDNA文库ARDRA分析结果表明,细菌群落在后发酵过程中发生了明显变化,4个时期文库的16S rDNA组成分别以各自独有酶切类型为主。A... 详细信息

采用ARDRA对双孢蘑菇[Agaricus bisporus(Large)Sing.]培养料后发酵过程中的细菌群落结构进行研究。细菌16S rDNA文库ARDRA分析结果表明,细菌群落在后发酵过程中发生了明显变化,4个时期文库的16S rDNA组成分别以各自独有酶切类型为主。ARDRA文库优势类群的序列分析结果显示,培养料中的细菌组成远多于传统分离方法所获得的类群:在"空气调节"时期培养料(C6)中发现了一些未曾报道的Bacilli门成员,如Trichococcus属、Planococcus属和Caryophanon属,以及γ-Proteobacteria亚纲;而在"后发酵"开始和结束的培养料(C1和C7)中分别检测到了Ther mus ther mophilus和α-Proteobacteria亚纲的细菌,这些是近年来利用分子生物学方法在高温堆肥中发现的新类群;同时,在整个"后发酵"过程中还发现了大量目前尚未获得培养的细菌类群。

关键词：双孢蘑菇培养料后发酵细菌16S rDNA 细菌群落结构 ARDRA

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抗磺酰脲类除草剂看麦娘乙酰羟酸合酶的大亚基基因的克隆和表达

抗磺酰脲类除草剂看麦娘乙酰羟酸合酶的大亚基基因的克隆和表达

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第九届全国杂草科学大会

作者：俞欣妍李怡李永丰何健南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏省农业科学院植物保护研究所

乙酰羟酸合酶(AHAS,也称乙酰乳酸合酶acetohydroxyacid synthase,ALS)是植物、真菌和细菌细内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰胺类除草剂的作用靶... 详细信息

乙酰羟酸合酶(AHAS,也称乙酰乳酸合酶acetohydroxyacid synthase,ALS)是植物、真菌和细菌细内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,是乙酰羟酸合酶抑制剂类除草剂如磺酰脲类、咪唑啉酮类、嘧啶水杨酸和磺酰胺类除草剂的作用靶标。从看麦娘抗性生物型与敏感生物型中获得抗磺酰脲类除草剂的乙酰羟酸合酶基因,构建其表达载体,并分析基因中的位点突变与乙酰羟酸合酶对磺酰脲类除草剂抗性产生原因。利用染色体步移技术从看麦娘抗性生物型与敏感生物型总DNA中克隆到乙酰羟酸合酶的大亚基基因,对AHAS大亚基氨基酸序列进行比对分析。分别将抗性与敏感AHAS连接到表达载体pET29a(+)多克隆位点,转化大肠杆菌(Escherichia coli)获得转化子BL21(pET-R)和BL21(pET-S),并诱导表达。看麦娘抗性生物型大亚基有3个氨基酸位点发生突变,转化子在IPTG诱导下,乙酰羟酸合酶的大亚基的蛋白成功表达,酶液酶活试验结果表明:看麦娘抗性基因表达的乙酰羟酸合酶大亚基对氯磺隆、甲磺隆与氯嘧磺隆具有很强的抗性。看麦娘抗性生物型的乙酰羟酸合酶大亚基对磺酰脲类除草剂具有很强的交互抗性,看麦娘抗性生物型与敏感生物型的AHAS大亚基有3个氨基酸位点差异,这些位点突变可能是看麦娘对除草剂产生抗性的原因。

关键词：磺酰脲类除草剂看麦娘乙酰乳酸合酶 AHAS大亚基基因

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日本看麦娘抗AHAS抑制剂类除草剂的分子机理研究

日本看麦娘抗AHAS抑制剂类除草剂的分子机理研究

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第九届全国杂草科学大会

作者：李永丰俞欣妍李怡江苏省农业科学院植物保护研究所南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

近年来,杂草抗除草剂的研究取得了一些进展。本文简述了除草剂的作用机理以及杂草对除草剂容易产生抗药性的种群分布,分别介绍了EPSPS抑制剂,AHAS抑制剂、乙酰CoA转移酶、光合作用抑制剂等6类除草剂的抗性机理研究进展以及目前它们的抗... 详细信息

近年来,杂草抗除草剂的研究取得了一些进展。本文简述了除草剂的作用机理以及杂草对除草剂容易产生抗药性的种群分布,分别介绍了EPSPS抑制剂,AHAS抑制剂、乙酰CoA转移酶、光合作用抑制剂等6类除草剂的抗性机理研究进展以及目前它们的抗性基因在转基因作物上的应用潜力。最后,对生产中除草剂的合理使用,杂草产生抗药性的研究思路创新、杂草抗性基因的利用及杂草抗药性对除草剂品种使用寿命的影响进行了探讨,并对抗性基因的应用前景进行了展望。

关键词：杂草除草剂抗性机理研究进展抗性基因

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