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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：顾立锋何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

三唑磷水解酶基因为本实验室发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到Pseudomonasputi... 详细信息

三唑磷水解酶基因为本实验室发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到PseudomonasputidaKT2440中,获得的工程菌PseudomonasputidaKT2440-DOP可以降解多种有机磷农药及芳香烃化合物;KT2440-DOP的有机磷水解酶活较出发菌株mp4提高了一倍左右.

关键词：有机磷农药有机磷降解菌 KT2440 工程菌构建芳香烃化合物三唑磷水解酶基因

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奶牛粪便沼气发酵前后发酵液中产甲烷菌多样性分析

奶牛粪便沼气发酵前后发酵液中产甲烷菌多样性分析

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第八次全国环境微生物学术研讨会

作者：汪婷何健徐剑宏李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

采用产甲烷菌16SrDNA特异性引物和PCR扩增的方法,构建了以牛粪为发酵基质模拟产沼气前后的发酵液16SrDNA文库,并通过RFLP酶切分析和序列分析.结果表明沼气发酵前后存在着产甲烷菌的演替过程,在发酵前后各自存在着占优势地位的种群.发酵... 详细信息

采用产甲烷菌16SrDNA特异性引物和PCR扩增的方法,构建了以牛粪为发酵基质模拟产沼气前后的发酵液16SrDNA文库,并通过RFLP酶切分析和序列分析.结果表明沼气发酵前后存在着产甲烷菌的演替过程,在发酵前后各自存在着占优势地位的种群.发酵前的发酵基质中,109个克隆子被划分为29个不同的RFLP型,其中,最大的六大RFLP型分别含有22、14、12、11、7、7个转化子,而其余的23个RFLP类型中分别含有1～4个转化子,测序后表明这六种RFLP型的克隆子分别与甲烷粒球菌(Methanocorpusculumlabreanum,AF095267)、瘤胃甲烷短杆菌(Methanobre-vibacterruminantium,AY196666)以及甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)的产甲烷菌高度同源;而发酵盛产期发酵液中所挑取的109个转化子被分为14种酶切类型,其中占优势地位的四大RFLP型分别含有28、23、23、15个转化子,经测序后均与小甲烷粒菌(Methanocorpusculumbavaricum,AY260435.1)具有高度同源性.实验表明:随着沼气发酵的进行,沼液中的产甲烷菌的群落结构发生了很大的变化,存在着明显的演替过程.

关键词：沼气发酵产甲烷菌多样性 16S rDNA文库 RFLP酶切分析群落结构

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七株有机磷农药降解菌的降解特性比较

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中国环境科学 2004年第5期24卷 584-587页

作者：张瑞福戴青华何健代先祝李顺鹏南京农业大学生命科学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

对分离自同一有机磷农药污染土壤的7株有机磷农药降解菌的降解特性进行了比较,7株降解菌都能利用甲基对硫磷为唯一碳源生长,并生成中间代谢产物对硝基苯酚.对硝基苯酚的降解经过一段延滞期,不同菌株降解对硝基苯酚的能力和延滞期有很大... 详细信息

对分离自同一有机磷农药污染土壤的7株有机磷农药降解菌的降解特性进行了比较,7株降解菌都能利用甲基对硫磷为唯一碳源生长,并生成中间代谢产物对硝基苯酚.对硝基苯酚的降解经过一段延滞期,不同菌株降解对硝基苯酚的能力和延滞期有很大差异.降解菌株对多种有机磷类农药和芳香族化合物具有降解能力,其降解谱表现了一定的差异.用PCR方法从7株降解菌中克隆了有机磷农药水解酶基因.

关键词：有机磷农药降解菌降解特性水解酶基因

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阿特拉津降解菌BTAH1的分离与鉴定

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中国环境科学 2004年第6期24卷 738-742页

作者：胡江代先祝李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

从除草剂污染的土壤中,驯化分离得到1株能够以阿特拉津为唯一碳源氮源生长的革兰氏阳性细菌BTAH1,该菌株能够在126h内完全降解1000mg/L的阿特拉津.通过生理生化鉴定,结合16S rDNA聚类分析,将该菌株鉴定为微小杆菌属(Exiguobacterium sp... 详细信息

从除草剂污染的土壤中,驯化分离得到1株能够以阿特拉津为唯一碳源氮源生长的革兰氏阳性细菌BTAH1,该菌株能够在126h内完全降解1000mg/L的阿特拉津.通过生理生化鉴定,结合16S rDNA聚类分析,将该菌株鉴定为微小杆菌属(Exiguobacterium sp.).外加碳源不会促进该菌株对阿特拉津的降解,该菌株的最适降解温度为25～30℃,最适降解pH值在7～9之间.该菌株具有2个大质粒,pBTAH11和pBTAH12,大小分别为20kb和100kb,基因定位发现有2个参与阿特拉津降解的基因位于其中一个较小的质粒(pBTAH11)上.

关键词：阿特拉津生物降解微小杆菌属降解基因定位

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有机磷农药对韭菜虫害的防治效果及农药的微生物降解

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应用生态学报 2004年第8期15卷 1459-1462页

作者：蒋建东曹慧张瑞福张明星李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

采用 3 0 0kg(a.i)·hm-2 辛硫磷和 2 6 3kg(a.i)·hm-2 甲基对硫磷来防治韭菜蓟马 ,3d后与不施农药的对照相比 ,虫口减退率分别达到 98 2 8%和 98 39% ;2 0d后虫口减退率分别达到 89 94 %和94 0 4 % .用浓度分别为 15 0 0、... 详细信息

采用 3 0 0kg(a.i)·hm-2 辛硫磷和 2 6 3kg(a.i)·hm-2 甲基对硫磷来防治韭菜蓟马 ,3d后与不施农药的对照相比 ,虫口减退率分别达到 98 2 8%和 98 39% ;2 0d后虫口减退率分别达到 89 94 %和94 0 4 % .用浓度分别为 15 0 0、18 0 0和 2 1 0 0kg(a .i)·hm-2 的辛硫磷来防治韭蛆 ,3d后与不施农药的对照相比 ,虫口减退率分别达到了 80 77%、93 10 %和 96 98% ;35d后虫口减退率分别达到了 92 4 4 %、95 0 5 %和 96 81% .施用降解菌剂对防治蓟马和韭蛆没有不良影响 ,但可显著降低韭菜中的农药含量 .蓟马施药防治后 3d喷施 4 5 0 0L·hm-2 的降解菌剂 ,3d后与不施菌对照相比 ,辛硫磷和甲基对硫磷的降解率分别为 99 5 2 %和 98 83% ;2 0d后韭菜 (苔 )中农药含量均检测不出 .韭蛆施药防治后 3d灌施 75 0 0L·hm-2 降解菌剂 ,35d后不同辛硫磷施用量的降解率分别为 10 0 %、10 0 %和 99 6 9% .

关键词：蓟马韭蛆防治辛硫磷甲基对硫磷生物降解降解菌剂

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中度嗜盐菌Halomonas ***-1的渗透调节

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微生物学通报 2004年第5期31卷 71-75页

作者：洪青张国顺张忠辉何健李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

Halomonassp BYS 1是一株从活性污泥中分离的中度嗜盐菌 ,它能在 0 1～ 2 6mol LNaCl的以苯乙酸为唯一碳源的基础培养基中生长。BYS 1在不同NaCl条件下生长时 ,胞内的Na+含量基本不发生变化 ;它主要通过积累K+、谷氨酸和甜菜碱来调节... 详细信息

Halomonassp BYS 1是一株从活性污泥中分离的中度嗜盐菌 ,它能在 0 1～ 2 6mol LNaCl的以苯乙酸为唯一碳源的基础培养基中生长。BYS 1在不同NaCl条件下生长时 ,胞内的Na+含量基本不发生变化 ;它主要通过积累K+、谷氨酸和甜菜碱来调节胞内外的渗透压平衡。当培养基中的NaCl浓度从 0 1mol L上升到 2 0mol L时 ,其胞内的K+、谷氨酸和甜菜碱分别提高了 1 9、 2 4和 1 3 6倍。

关键词：中度嗜盐菌渗透调节 K^+ 谷氨酸甜菜碱

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二株假单胞菌的疏水性及其对菲的降解能力

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环境科学学报 2004年第5期24卷 942-944页

作者：盛下放何琳燕龚建勋南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从石油污染土壤中分离纯化到 2株能以菲为唯一碳源和能源的细菌GF2和GF3,初步鉴定均为假单胞菌属 (Pseudo monas)细菌 .根据细菌在烃 -水两相体系中的细胞数量研究了GF2和GF3菌株的表面疏水性及其在不同环境条件下的变化 ,同时对GF2和GF... 详细信息

从石油污染土壤中分离纯化到 2株能以菲为唯一碳源和能源的细菌GF2和GF3,初步鉴定均为假单胞菌属 (Pseudo monas)细菌 .根据细菌在烃 -水两相体系中的细胞数量研究了GF2和GF3菌株的表面疏水性及其在不同环境条件下的变化 ,同时对GF2和GF3在液体培养条件下降解菲的效能进行了研究 .结果表明 ,GF2和GF3表面疏水性随培养时间、温度及pH值的变化而变化 ,GF3的疏水性 ( 74 8% )大于GF2 ( 5 8 6 % ) .在 2 5℃下培养 7d ,GF2和GF3对菲 ( 2 5 0mg·L-1)的降解率分别达到 85 6 %和 10 0 % .

关键词：疏水性菲降解能力假单胞菌石油土壤多环芳烃

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一株特耐酸酵母R1的分离及其耐酸机理研究

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微生物学报 2004年第5期44卷 631-635页

作者：张国顺洪青刘智张晓舟李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从江西某铜矿的污泥中分离到一株特耐酸酵母菌R1(Rhodotorulasp .) ,能在pH值 1 5～ 6 0的范围内生长 ,最适生长pH为 3 0 ,属于嗜酸菌 ,初步鉴定为红酵母属 (Rhodotorulasp .)。R1在不同培养基中的耐酸能力基本相同。pH冲击实验显示 ,R... 详细信息

从江西某铜矿的污泥中分离到一株特耐酸酵母菌R1(Rhodotorulasp .) ,能在pH值 1 5～ 6 0的范围内生长 ,最适生长pH为 3 0 ,属于嗜酸菌 ,初步鉴定为红酵母属 (Rhodotorulasp .)。R1在不同培养基中的耐酸能力基本相同。pH冲击实验显示 ,R1通过泵出H+ 吸收K+ 来维持胞内pH的稳定 ,表明膜H+ _ATPase和K+ 在R1耐酸中发挥作用。R1细胞膜的H+ _ATPase活性与R1生长的pH呈负相关。通过PCR克隆了R1的H+ _ATPase基因 (pma) ,并进行了测序 ,序列比较显示该基因的保守性很高。

关键词：嗜酸菌耐酸机理 K^+ H^+-ATPase

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中度嗜盐细菌Halomonas ***-1甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆和表达

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微生物学报 2004年第1期44卷 72-74页

作者：洪青何健刘智李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

Halomonassp .BYS 1是一株能矿化苯乙酸的中度嗜盐细菌 ,该菌能在 0～ 2 0 %NaCl的条件下生长。甜菜碱是其主要渗透保护剂 ,通过在培养基中添加甜菜碱合成前体 (胆碱、甘氨酸 )的方法发现它能以胆碱为前体合成甜菜碱。通过PCR的方法克... 详细信息

Halomonassp .BYS 1是一株能矿化苯乙酸的中度嗜盐细菌 ,该菌能在 0～ 2 0 %NaCl的条件下生长。甜菜碱是其主要渗透保护剂 ,通过在培养基中添加甜菜碱合成前体 (胆碱、甘氨酸 )的方法发现它能以胆碱为前体合成甜菜碱。通过PCR的方法克隆了甜菜碱醛脱氢酶基因 (betB) ,测序后在大肠杆菌中进行了高效表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 31 5 % ,酶活为 38 5U mg 。

关键词：嗜盐细菌甜菜碱醛脱氢酶基因克隆表达

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甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的生态效应

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农村生态环境 2004年第4期20卷 48-50页

作者：张瑞福崔中利何健黄婷婷李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

研究了有机磷农药甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的影响,结果表明:污染土壤中细菌、放线菌、真菌数量变化不大,自生固氮菌和反硝化细菌数量减少,氨化细菌、亚硝化细菌、硝化细菌数量有所增加;与对照土壤相比,污染土壤呼吸作用下降29.9... 详细信息

研究了有机磷农药甲基对硫磷长期污染对土壤微生物的影响,结果表明:污染土壤中细菌、放线菌、真菌数量变化不大,自生固氮菌和反硝化细菌数量减少,氨化细菌、亚硝化细菌、硝化细菌数量有所增加;与对照土壤相比,污染土壤呼吸作用下降29.93%,而氨化作用和硝化作用则增强。1g对照土壤(以干土计)中微生物总DNA提取量为(13.01±1.91)μg,污染土壤中则为(12.23±1.36)μg。

关键词：甲基对硫磷长期污染土壤微生物生态效应

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