检索结果-内蒙古大学图书馆

Methylobacterium sp. YAL-2对乙酰甲胺磷的降解特性

应用与环境生物学报 2012年第3期18卷 438-443页

作者：王莉凌琪汤利华李顺鹏蒋建东安徽建筑工业学院环境与能源工程系合肥230022 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从有机磷生产厂家的下水道污泥中分离出一株对高浓度和低浓度乙酰甲胺磷都具有高效降解能力的寡营养菌YAL-2,根据形态、生理生化和16S rRNA基因系统发育分析,将菌株YAL-2鉴定为Methylobacterium sp.降解特性实验表明,菌株YAL-2能利用乙... 详细信息

从有机磷生产厂家的下水道污泥中分离出一株对高浓度和低浓度乙酰甲胺磷都具有高效降解能力的寡营养菌YAL-2,根据形态、生理生化和16S rRNA基因系统发育分析,将菌株YAL-2鉴定为Methylobacterium sp.降解特性实验表明,菌株YAL-2能利用乙酰甲胺磷为唯一碳源生长和降解;在添加了甲醇的无机盐培养基中,84 h可完全降解300mg L-1乙酰甲胺磷,24 h将50 mg L-1和10 mg L-1乙酰甲胺磷降至非检测水平;4 d能完全去除100 mg L-1甲胺磷,5 d分别降解58.4%和40.6%的100 mg L-1乐果、敌敌畏.小青菜农药残留去除实验显示,菌株YAL-2可在7 d内将乙酰甲胺磷和甲胺磷将至限量水平.结果表明,将菌株YAL-2应用于保证果蔬等食品的食用安全是可行的.

关键词：乙酰甲胺磷 Methylobacterium sp. YAL-2 降解特性系统发育分析农药残留去除

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细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

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第二军医大学学报 2012年第6期33卷 595-598页

作者：范佳君曾贤李玉彬王晓丹王子玉鞠佃文同济大学生命科学与技术学院上海200092 复旦大学药学院生物合成教研室上海200433 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

目的研究细胞自噬在多柔比星诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。方法以含不同浓度多柔比星的培养液培养Raji细胞,采用蛋白质印迹法观察Raji细胞自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况... 详细信息

目的研究细胞自噬在多柔比星诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。方法以含不同浓度多柔比星的培养液培养Raji细胞,采用蛋白质印迹法观察Raji细胞自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;在给予多柔比星的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制,利用MTT法和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡情况。结果给予多柔比星后,Raji细胞的LC3Ⅱ表达水平和MDC染色荧光强度均高于对照组(P<0.05),证明多柔比星能诱导Raji细胞发生细胞自噬。给予多柔比星后,Raji细胞生长受到抑制,凋亡增加(P<0.01);用细胞自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制自噬后,细胞生长受抑和凋亡增加现象更加显著(P<0.05,P<0.01)。结论在多柔比星杀伤Raji细胞的过程中会诱导细胞发生自噬,抑制自噬能够增强多柔比星对Raji细胞的杀伤作用。

关键词：多柔比星自噬细胞凋亡淋巴瘤

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灵芝中基于内源ura3基因的多基因沉默系统的建立及其应用

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菌物研究 2013年第2期11卷 145-145页

作者：穆大帅师亮任昂李梦娇吴凤礼姜爱良赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝是一种重要的药用真菌,然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究,灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢。该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法,利用灵芝内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标... 详细信息

灵芝是一种重要的药用真菌,然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究,灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢。该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法,利用灵芝内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标记,构建4种沉默载体(颈环结构沉默载体,正向沉默载体,反向沉默载体以及正反双向启动子沉默载体),并基于此转基因方法实现了对灵芝内源基因的沉默。通过系统比对以上4种沉默方法,发现4种沉默方法都不同程度地下调了ura3基因的表达,其中双向启动子沉默不仅载体构建方便并且能够获得最高的沉默效率(达到81.9%)。利用这种双向启动子沉默载体以及ura3的反向筛选特性,建立了灵芝的共沉默体系,发现共沉默下基因转录的下调有一定的相关性,提高了基因沉默的筛选效率。该反向遗传体系的建立有助于深入研究灵芝中单基因或多基因的功能,推动灵芝等大型担子菌的分子遗传研究进展。

关键词：灵芝基因沉默共沉默电击转化

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灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因的克隆及其表达特性

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菌物研究 2013年第2期11卷 142-142页

作者：任昂欧阳翔师亮姜爱良穆大帅李梦娇韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标。灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(A hy-droxymethylglutary-l CoA synthase,GlHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标。灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(A hy-droxymethylglutary-l CoA synthase,GlHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,对于灵芝三萜的合成起着十分重要的作用。分别以灵芝总基因组DNA和反转录的原基cDNA为模板,扩增得到GlHMGS基因的全长DNA和cD-NA序列,该基因DNA全长1 870 bp,其中ORF为1 413 bp,编码471个氨基酸,推测的分子量为51.14kD。通过比对获得的DNA和cDNA序列,发现GlHMGS由5个外显子和4个内含子构成。与NCBI数据库中HMGS的蛋白序列比对发现,GlHMGS与解脂耶罗威亚酵母的HMGS表现出最高的同源性(51%)。进化树分析也表明GlHMGS与真菌亲缘关系最近,这与灵芝的物种分类相吻合。通过酿酒酵母HMGS缺陷的菌株证实所得GlHMGS能够使HMGS缺陷的表型得到互补,证实GlHMGS的功能。利用SEFA-PCR技术扩增GlHMGS基因上游启动子序列,该序列长约1 561 bp,用Softberry等软件对启动子序列进行分析,发现GlHMGS基因启动子中包含有明显的TATA-box和CAAT-box,并发现了多个与甾醇、激素和环境压力等调节相关的顺式作用元件。进一步研究发现,茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸能够提高GlHMGS基因的转录水平。在研究不同发育阶段和不同碳源对GlHMGS基因的影响时,发现GlHMGS基因的表达水平分别在第16天和以麦芽糖为碳源时达到最大。通过过量表达GlHMGS基因能够显著提高灵芝三萜含量。

关键词：灵芝三萜 HMG-CoA合酶功能验证表达谱过量表达

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茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成的影响及其灵芝应答基因的差异表达

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菌物研究 2013年第2期11卷 141-141页

作者：任昂李梦娇师亮穆大帅姜爱良韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达。通过在灵芝中建立的cDNA-AFLP体系,采用64对引物组合对灵芝的转录组进行分析。64对引物组合共产生3 910个TDFs。茉莉酸甲酯不同诱导条件下约有919个TDFs的表达谱发生了变化,占表达谱的23.5%,其中上调表达的有703个,下调表达的有216个。选择458个TDFs进行回收、TA克隆、测序后,获得390个高质量的TDFs片段。通过蛋白数据库同源性检索,并对蛋白功能进行GO分类,结果表明:390个高质量的TDFs中,BlastX比对后没有显著匹配的序列占77.1%。在有匹配蛋白的序列中,与碳代谢及能量相关的基因为最大一组,占35.2%,转录调控类及信号传导类基因分别占14.3%和11.0%。通过荧光定量PCR技术考察了茉莉酸甲酯对20个基因转录水平的影响,与cDNA-AFLP分析的结果相一致。并通过灵芝基因过量表达技术和基因沉默技术对筛选到的相关基因进行沉默和过量表达,研究筛选到的基因在灵芝三萜生物合成与调控中的作用,获得大量参与灵芝三萜生物合成与调控的候选基因,进一步阐明了茉莉酸甲酯诱导下灵芝基因表达的变化图。

关键词：灵芝茉莉酸甲酯均匀设计 cDNA-AFLP分析过量表达基因沉默

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降解菌djl-6多菌灵水解酶的提取及性质

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应用与环境生物学报 2012年第2期18卷 272-275页

作者：许敬亮王志春王堃洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 中国科学院广州能源研究所/中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室广州510640

以往对多菌灵降解菌Rhodococcus qingshengii ***-6的降解途径研究显示,该菌株首先通过多菌灵水解酶将多菌灵水解成二氨基苯并咪唑,从而对多菌灵进行脱毒.为开发酶制剂并有效应用于环境中残留污染物多菌灵的降解,比较了不同提取方法（... 详细信息

以往对多菌灵降解菌Rhodococcus qingshengii ***-6的降解途径研究显示,该菌株首先通过多菌灵水解酶将多菌灵水解成二氨基苯并咪唑,从而对多菌灵进行脱毒.为开发酶制剂并有效应用于环境中残留污染物多菌灵的降解,比较了不同提取方法（高压细胞破碎、超声波破碎和添加溶菌酶破碎）对多菌灵水解酶提取效率的影响,并对其酶学特性进行了初步研究.结果表明,djl-6菌株在LB培养基中培养72~84 h,生长量和产酶量均达到最大值.采用超声波破碎提取酶的效率较高（蛋白浓度为7.92 mg/mL）,但酶活损失较大（比酶活只有1.2 U/μg protein）.多菌灵水解酶属于一种胞内组成型酶.该酶水解多菌灵的最适pH值为7.0,最适温度为30℃,Zn2＋和K＋对酶活有一定的抑制作用.

关键词： Rhodococcus qingshengii sp.nov.djl-6 多菌灵水解酶降解途径提取方法酶学特性

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近地层臭氧浓度升高对麦田土壤微生物群落功能多样性的影响

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应用与环境生物学报 2012年第2期18卷 309-314页

作者：余永昌林先贵张晶李全胜朱建国中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室/南京土壤研究所-香港浸会大学土壤与环境联合开放实验室南京210008 中国科学院研究生院北京100049 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用中国臭氧FACE（Free-air O3concentration enrichment,开放式空气臭氧浓度增高）试验平台,通过测定麦季土壤水溶性有机碳含量、土壤呼吸强度和BIOLOG指标,研究了近地层臭氧浓度升高50%条件下（~70 nmol mol-1）,麦田土壤微生物功能... 详细信息

利用中国臭氧FACE（Free-air O3concentration enrichment,开放式空气臭氧浓度增高）试验平台,通过测定麦季土壤水溶性有机碳含量、土壤呼吸强度和BIOLOG指标,研究了近地层臭氧浓度升高50%条件下（~70 nmol mol-1）,麦田土壤微生物功能多样性的响应.结果发现,臭氧浓度升高下麦田土壤水溶性有机碳含量提高,土壤微呼吸强度增加,平均吸光值显著高于对照（P〈0.05）.多样性指数结果显示,臭氧浓度升高对麦田土壤微生物丰富度和优势度指数没有显著影响,但是臭氧处理下均一度指数显著高于对照（P〈0.05）;主成分分析显示,相对于其它碳源,臭氧浓度升高对麦田土壤微生物的糖类物质利用能力的影响最大.研究揭示了1.5倍的近地层臭氧浓度增强了麦田土壤微生物碳源利用能力,特别是非优势微生物.

关键词：臭氧浓度升高麦田水溶性有机碳呼吸强度土壤微生物功能多样性

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草酸青霉菌I1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选

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中国农业科学 2012年第18期45卷 3792-3800页

作者：唐超西龚明波李顺鹏朱昌雄中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室中国农业科学院农业资源与农业区划研究所

【目的】构建草酸青霉菌I1的cDNA文库,筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子,测序并进行生物信息学分析。在难溶磷液体培养基中,进行转化子对溶液pH值、... 详细信息

【目的】构建草酸青霉菌I1的cDNA文库,筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子,测序并进行生物信息学分析。在难溶磷液体培养基中,进行转化子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸试验。【结果】成功构建了草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,其库容量约为5.29×***-1,重组率为99%;利用难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的转化子48个,其中转化子I-4的cDNA序列全长536 bp,为一个新的序列,基因编码氨基酸残基序列长129 n.t。转化子*** HST08 I-4在液体难溶磷培养基中培养,提高了有机酸的表达量,并增加了有机酸的种类,在培养12 h后,开始产生乙酸,24 h后,溶液中产生乳酸、苹果酸和α-酮戊二酸,培养36 h,溶液pH值由6.32降到3.69,可溶磷含量达到0.1076 ***-1。【结论】从草酸青霉I1中筛选到一个溶磷相关基因pstI。

关键词：草酸青霉菌 cDNA文库溶磷相关基因有机酸

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16S rDNA克隆文库法探索转基因香石竹对土壤细菌群落的影响

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微生物学通报 2012年第4期39卷 435-447页

作者：白蓝赵明文贾军伟李鹏王金斌潘爱虎上海市农业科学院生物技术研究所上海市农业遗传育种重点实验室农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心(上海) 上海201106 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

【目的】通过研究转基因香石竹对土壤细菌群落的影响,为转基因香石竹的环境安全性评价提供依据。【方法】通过构建16S rDNA克隆文库,分析种植转基因和非转基因香石竹的土壤中细菌的群落结构组成。【结果】转基因和非转基因香石竹土壤中... 详细信息

【目的】通过研究转基因香石竹对土壤细菌群落的影响,为转基因香石竹的环境安全性评价提供依据。【方法】通过构建16S rDNA克隆文库,分析种植转基因和非转基因香石竹的土壤中细菌的群落结构组成。【结果】转基因和非转基因香石竹土壤中,共有的菌群有变形菌门(Proteobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、酸杆菌门(Acidobacteria),其中α-变形菌门、β-变形菌门、浮霉菌门为优势菌群;而在放线菌门(Actinobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)及未培养菌(Uncultured bacterium clone)等菌群存在部分差异。【结论】通过16S rDNA克隆文库方法揭示了转基因香石竹的土壤中细菌多样性十分丰富,其栽培对土壤细菌群落结构影响有限。

关键词： 16S rDNA克隆文库法转基因香石竹土壤细菌群落

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近地层臭氧浓度升高对稻麦轮作农田土壤生物学特性的影响

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土壤 2012年第3期44卷 450-455页

作者：余永昌林先贵冯有智张晶李全胜朱建国土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所)南京土壤研究所-香港浸会大学土壤与环境联合开放实验室南京210008 中国科学院研究生院北京100049 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用中国臭氧FACE(free-air O3concentration enrichment,开放式空气臭氧浓度增高)试验平台,通过对稻麦轮作农田土壤微生物生物量碳、土壤脱氢酶、蔗糖转化酶活性的测定,研究了近地层臭氧浓度升高条件下,2009年和2010年两年土壤生物学... 详细信息

利用中国臭氧FACE(free-air O3concentration enrichment,开放式空气臭氧浓度增高)试验平台,通过对稻麦轮作农田土壤微生物生物量碳、土壤脱氢酶、蔗糖转化酶活性的测定,研究了近地层臭氧浓度升高条件下,2009年和2010年两年土壤生物学特性的响应。结果发现,1.5倍环境臭氧浓度下(≈70 nmol/mol),土壤微生物生物量碳有上升趋势,土壤脱氢酶和蔗糖转化酶活性显著增强(P<0.05)。土壤微生物对土壤碳源利用能力增强和数量的增加势必会加快土壤有机质的分解和周转,以致在大气臭氧浓度升高的一定阶段内可能会增大稻麦轮作农田温室气体的排放。

关键词：臭氧浓度升高土壤微生物生物量碳脱氢酶蔗糖转化酶

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