检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科技导报 2007年第4期9卷 85-94页

作者：李晓丹杨瑾曹慧崔中利南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

16S rRNA对于构建功能性核糖体是十分重要的,人们普遍将其作为原核生物进化中保守的系统发育标志。为了进一步研究16S rRNA的进化,本文将Escherichia coli中最后一个拷贝的16S rRNA基因替换为Bacillus subtilis的16S rRNA基因,得到了菌... 详细信息

16S rRNA对于构建功能性核糖体是十分重要的,人们普遍将其作为原核生物进化中保守的系统发育标志。为了进一步研究16S rRNA的进化,本文将Escherichia coli中最后一个拷贝的16S rRNA基因替换为Bacillus subtilis的16S rRNA基因,得到了菌株SQ110BSX。菌株SQ110BSX的代时与出发菌株SQ110基本一致,但是SQ110BSX表现出冷敏感性,而且rRNA/蛋白比值为SQ110的148%。实验结果表明,菌株SQ110BSX中的核糖体效率明显下降。由于***和***在遗传距离上较远,两者的可替换性证明了16S rRNA的高度保守性。

关键词： 16S rRNA 核糖体效率 rRNA/蛋白比值保守性

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解磷细菌的分离、鉴定及特性研究

解磷细菌的分离、鉴定及特性研究

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：孙珊冯韶忠孙纪全黄星李顺鹏南京农业大学生命科学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

从国内部分省市和地区采集的八种土壤中分离纯化出51株溶解无机磷的细菌,对其进行定性和定量的筛选,得到一株高效溶磷菌株△-8-1,经生理生化和16S rRNA 基因序列初步鉴定为产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca).研究该菌株降解无机磷的... 详细信息

从国内部分省市和地区采集的八种土壤中分离纯化出51株溶解无机磷的细菌,对其进行定性和定量的筛选,得到一株高效溶磷菌株△-8-1,经生理生化和16S rRNA 基因序列初步鉴定为产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca).研究该菌株降解无机磷的特性结果表明,菌株△-8-1在30℃发酵培养72h,发酵液中可溶性磷含量可达到361.34mg/l,而接种对照菌株的发酵液中可溶性磷含量仅有67.73mg/l。

关键词：磷细菌发酵液特性研究

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抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

抗除草剂假单胞菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会

作者：孙笑非黄星李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特... 详细信息

乙酰乳酸合酶(也称乙酰羟酸合酶 acetohydroxyacid synthase,AHAS)是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸 Val、Leu、Ile 生物合成过程中关键酶。本文从长期受甲磺隆污染的土壤中分离,纯化出1株甲磺隆的抗性菌 Lm10。经形态、生理生化特性测定、16S rDNA 序列同源性比较和系统进化树的分析将甲磺隆抗性菌 Lm10鉴定为假单孢菌(***)。菌株 Lm10对甲磺隆的最高耐受浓度达到13.75nmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 Lm10总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,氨基酸比对结果表明菌株 Lm10与标准菌株 kt2440的 IlvI 的5个位点有差异,而小亚基则与标准菌株 kt2440的 ilvH 完全相同。为阐明抗性产生机制和通过基因工程获得性能更优良的乙酰乳酸合酶基因提供了重要的理论基础和应用价值。

关键词： ALS inhibitors herbicides herbicides-resistant bacterium acetohydroxyacid synthase ilvIH

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两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

两株抗除草剂克雷伯氏菌的分离及其AHAS基因ilvIH的克隆

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第十次全国环境微生物学术研讨会

作者：沈晶晶黄星俞欣妍李顺鹏何健南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶类、磺酰胺类及嘧啶水杨酸类等乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的作用靶标,获得能抗乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂的乙酰羟基酸合成酶突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本文从长期使用磺酰脲类除草剂的农田土壤中分离到二株磺酰脲类除草剂抗性细菌 HR9和 HR11,根据表型特征、生理生化特性及16SrDNA 序列系统发育分析,将 HR9和 HR11初步鉴定为克雷伯氏菌 (Klebsiella sp.)。菌株 HR9和 HR11对甲磺隆的最高耐受浓度分别达到9600μmol/L 和8200 μmol/L,且对各种乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂具有交叉抗性。利用 PCR 技术从 HR9和 HR11 总 DNA 中克隆到 AHAS 大小亚基基因 ilvIH,比对结果表明菌株 HR11与菌株 HR9的 IlvI 有6个位点的氨基酸有差异,HR9、HR11与除草剂敏感型的 *** 的 IlvI 各有37和34个位点的氨基酸有差异。

关键词：乙酰乳酸合酶抑制剂类除草剂除草剂抗性细菌乙酰羟酸合酶 ilvH

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人工接种堆肥和自然堆肥微生物区系与分子多态性的变化

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生态与农村环境学报 2006年第1期22卷 29-33页

作者：徐大勇黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图... 详细信息

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图谱显示,两种堆肥不同时期存在不同的细菌种群,其条带数量亦呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势。堆肥升温期条带丰富但优势条带不明显;堆肥高温期条带数量减少但出现优势条带,表明高温阶段以嗜热菌或耐高温菌为主;堆肥降温期条带数量再次增多;堆肥腐熟期条带数量少且无优势条带,表明腐熟阶段微生物种群数量少且代谢强度趋于平缓。(3)DGGE图谱表明,人工接种菌株成为堆肥高温期优势菌株。人工接种增加了堆肥中微生物总量,提高了堆肥微生物种群多样性,并且促进了堆肥菌群演替,从而缩短堆肥腐熟时间。

关键词：堆肥微生物群落分子多态性变性梯度凝胶电泳(DGGE)

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盐单胞菌属BYS-1四氢嘧啶合成基因ectABC克隆及其盐激表达

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微生物学报 2006年第1期46卷 28-32页

作者：何健黄星顾立锋蒋建东李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

利用SEFA-PCR技术从中度嗜盐菌***-1总DNA中克隆了四氢嘧啶合成基因ectABC及其上游序列(GenBank accession number DQ017757);OMIGA软件分析结果显示ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,大小分别为573bp1、251bp和387bp,预测编码的DAT(L-二氨基丁酸转氨酶)、DAA(L-二氨基丁酸乙酰转移酶)和ES(四氢嘧啶合酶)大小分别为21.1kDa(191 amino acid)、45.7kDa(417 amino acid)和14.5kDa(129 amino acid);将包含ectABC基因及其上游1000bp序列的片段克隆到pUC19中并转化***5α,转化子***(pUC19ECT)能够在盐激条件下合成四氢嘧啶,但其耐盐能力没有得到显著改善。

关键词：四氢嘧啶 ectABC基因 SEFA-PCR Halomonas sp.BYS-1 盐激表达

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外源甜菜碱提高恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的研究

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微生物学报 2006年第1期46卷 154-157页

作者：何健蒋建东贾开志黄星李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

研究了外源甜菜碱对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的影响并对其渗透保护机制进行了初步的探讨;结果表明培养基中添加甜菜碱可以改善DLL-1细胞在高盐培养基中的生长情况,添加150mg/L的甜菜碱可以使DLL-1在1.2mol/L NaCl... 详细信息

研究了外源甜菜碱对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-1耐盐性的影响并对其渗透保护机制进行了初步的探讨;结果表明培养基中添加甜菜碱可以改善DLL-1细胞在高盐培养基中的生长情况,添加150mg/L的甜菜碱可以使DLL-1在1.2mol/L NaCl的基础盐培养基中生长,添加10mg/L的甜菜碱就足以显著缩短渗透胁迫条件下DLL-1细胞的延滞期和代时,增加生长量;和不添加对照相比,延滞期由24h缩短到6h,代时由60min缩短到35.7min,最大生长量OD610由1.29增长到1.57。在渗透胁迫条件下,细胞从外界快速吸收外源甜菜碱来代替自身相容性溶质的合成。

关键词：外源甜菜碱渗透保护耐盐性 Pseudomonas putida DLL-1

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多功能降解菌Pseudomonas putida KT2440-DOP的构建与降解特性研究

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微生物学报 2006年第5期46卷 763-766页

作者：顾立锋何健黄星贾开志李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

三唑磷水解酶基因为研究发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到模式菌株Pseudomonas... 详细信息

三唑磷水解酶基因为研究发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因,通过PCR从有机磷降解菌株***-4总DNA扩增了tpd,将tpd定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pTPD,在辅助质粒pRK2013的帮助下,通过三亲接合将pTPD转移到模式菌株Pseudomonas putidaKT2440中,获得的工程菌PseudomonasputidaKT2440-DOP可以降解多种有机磷农药及芳香烃化合物;KT2440-DOP的有机磷水解酶活较出发菌株MP-4提高了一倍左右,且遗传性状稳定。

关键词：有机磷农药 tpd KT2440 工程菌构建

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假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析

假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析

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第四届全国发酵工程学术研讨会

作者：邓海华曹慧李晓丹王世明崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼... 详细信息

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92％.将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果.将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶.

关键词：转座子标签法同源重组基因敲入单胞菌尿黑酸克隆

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碳源及碳氮比对异养反硝化微生物异养反硝化作用的影响

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农村生态环境 2005年第2期21卷 42-45页

作者：傅利剑郭丹钊史春龙黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室江苏南京210095

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3... 详细信息

碳源(甘油和柠檬酸钠)及碳氮比对纯培养的异养反硝化菌HP1 (Pseudomonasalcaligenes)异养反硝化能力影响的试验表明,碳源种类对硝酸还原酶活性没有明显影响,对氧化亚氮还原酶活性有影响。批式培养方式下最适C/N为8,菌株HP1可以利用NO-3 作为唯一氮源进行反硝化作用,证明HP1至少有2种硝酸还原途径。连续培养方式下温度对菌株HP1异养反硝化作用中间产物的积累有影响,不同C/N时均有NH+4 积累,C/N为3时还有NO-2 的积累。

关键词：异养反硝化微生物反硝化作用碳源 C/N

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