检索结果-内蒙古大学图书馆

武汉轻工大学学报 2025年第2期44卷 56-60,101页

作者：司马重园张其帆钟远芬汪豪晏博张舒林余晓丽武汉轻工大学生命科学与技术学院武汉430023 上海市公共卫生临床中心上海201508 贵州医科大学基础医学院贵州550000 上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系上海200025

借助斑马鱼-海分枝杆菌感染模型,探究瓜氨酸(Cit)在抑制分枝杆菌感染中的作用,旨在为新药物研发与辅助治疗提供理论依据。使用摩尔浓度为100μM、250μM、500μM、1 mM的Cit处理未感染的斑马鱼幼鱼,观察其对幼鱼生长发育的影响,通过高... 详细信息

借助斑马鱼-海分枝杆菌感染模型,探究瓜氨酸(Cit)在抑制分枝杆菌感染中的作用,旨在为新药物研发与辅助治疗提供理论依据。使用摩尔浓度为100μM、250μM、500μM、1 mM的Cit处理未感染的斑马鱼幼鱼,观察其对幼鱼生长发育的影响,通过高内涵显微镜测定细菌荧光强度,检测不同浓度Cit处理感染后幼鱼的菌载量;使用给药剂量为200 mg/kg的Cit处理海分枝杆菌感染后的成鱼,采用铺板计数和HE染色检测感染后成鱼的菌载量和病理变化。结果显示,100μM、250μM、500μM浓度的Cit处理对斑马鱼幼鱼的生长发育没有影响,1 mM浓度的Cit处理可使幼鱼尾巴发育畸形。与不加Cit对照组相比,250μM、500μM的Cit实验组显著降低了斑马鱼幼鱼体内海分枝杆菌的菌载量(p<0.001、p<0.01),100μM的Cit实验组无显著差异(p>0.05);与PBS对照组相比,给药剂量为200 mg/kg Cit实验组显著降低了成鱼体内的菌载量(p<0.01),且病理切片显示肉芽肿部位的组织损伤程度减轻。适宜浓度的瓜氨酸对斑马鱼具有抗分枝杆菌感染作用,可为后续开发新型的结核病治疗策略奠定基础。

关键词：瓜氨酸斑马鱼模型海分枝杆菌抗感染作用

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重组慢病毒表达载体介导HIV-1 Vpr蛋白调控KSHV潜伏感染的初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第12期30卷 1097-1104页

作者：贾雪梅王平秦娣卢春南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的利用慢病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒蛋白R（Vpr）的重组慢病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤（PEL）细胞BCBL-1,并检测Vpr蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）潜伏感染与裂解性复制的影响.方法从... 详细信息

目的利用慢病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒蛋白R（Vpr）的重组慢病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤（PEL）细胞BCBL-1,并检测Vpr蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）潜伏感染与裂解性复制的影响.方法从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vpr中扩增出Vpr基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体中构建成重组慢病毒质粒pHAGE-Vpr,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2及包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达,293T细胞培养上清经0.45 μm滤器过滤后即获得重组病毒悬液.慢病毒系列稀释后感染293T细胞,荧光计数法测定病毒滴度,逆转录PCR（RT-PCR）检测Vpr基因在293T细胞中的转录.以感染复数（MOI）为1的病毒量感染靶细胞BCBL-1,荧光显微镜观察靶细胞中GFP的表达,并利用RT-PCR和和免疫印迹（Western blot）技术分别检测Vpr基因在靶细胞中的转录和表达情况,同时检测KSHV裂解期基因复制与转录激活子（Rta）mRNA转录及蛋白表达.结果经酶切鉴定、核酸序列测定和293T细胞中GFP表达证实成功包装了携带HIV-1Vpr基因的重组慢病毒,滴度为4×107TU/ml.重组慢病毒感染BCBL-1细胞后,细胞中有GFP表达,RT-PCR和Western blot均能够在相应位置检测到目的基因Vpr的条带,并且Vpr降低了KSHV RtamRNA转录及蛋白表达水平.结论重组慢病毒介导的HIV-1 Vpr蛋白过表达能够抑制KSHV裂解性复制、增强病毒的潜伏感染.

关键词：慢病毒病毒蛋白R 卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制

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雷公藤多甙与白介素-10对人外周血树突细胞的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 53-56页

作者：王胜军姚堃谢芳艺季晓辉中国 212001 南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学教研室南京医科大学微生物学和免疫学教研室镇江镇江医学院微生物学和免疫学教研室

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧... 详细信息

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧光染色后采用流式细胞仪进行分析,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应分别检测IL-12p40蛋白水平和mRNA的转录。结果:雷公藤多甙5-20mg/L显著下调HLA-DR和CD80抗原的表达,IL-10 50-200μg/L能抑制HLA-DR和CD80抗原的表达,并都具有剂量依赖关系;雷公藤多甙5-20mg/L和IL-10 50-200μg/L均能抑制DC分泌IL-12p40蛋白,同时经雷公藤多甙20mg/L和IL-10 200μg/L处理的DC中IL-12 p40 mRNA的表达受到显著抑制。结论:雷公藤多甙和IL-10能通过抑制DC表面分子的表达和IL-12的合成而发挥免疫抑制作用。

关键词：雷公藤树突细胞细胞培养 HLA-DR抗原 CD80抗原白介素-10 白介素-12 流式细胞术逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第11期25卷 880-884页

作者：卢春唐桂霞曾怡钱超秦娣南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的研究HIV21感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHVRta基因所介导。方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的... 详细信息

目的研究HIV21感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHVRta基因所介导。方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的重组人细胞因子对HUVEC中潜伏感染的KSHV复制的影响。通过Northernblot和定量PCR检测ORF26(该基因编码的病毒次要衣壳蛋白仅在KSHV被激活时表达)mRNA表达来分析KSHV的激活。运用KSHVRta基因启动子(KSHV复制时最先被激活的启动子)驱动的虫荧光素酶报告基因进一步证实并扩展研究结果。结果包括干扰素-γ(IFN2γ)、肝细胞生长因子P扩散因子(HGFPSF)及制瘤蛋白M(oncostatinM,OSM)在内的重组细胞因子不仅可诱导HUVEC中潜伏感染的KSHV发生溶解性周期复制,而且能增强Rta启动子活性。结论HIV-1感染相关的炎性细胞因子是诱导HUVEC中KSHV溶解性周期复制的因素,而且该过程至少有部分由KSHV的Rta启动子介导。

关键词：细胞因子卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制和转录激活蛋白

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第1期24卷 76-80页

作者：卢春曾怡黄丽钱超唐桂霞南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的　研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法　将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒... 详细信息

目的　研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法　将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果　①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论　HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV

关键词： HIV-1 细胞因子 IFN-γ Rta基因基因启动子人类疱疹病毒8型基因重组质粒

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含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第9期23卷 691-695页

作者：卢春黄丽曾怡南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转... 详细信息

目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS Tat1 0 1 转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化 (IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清 ,并分别感染 2 93细胞 ,Westernblot检测Tat在 2 93中表达。与此同时 ,收集感染 2 93细胞培养上清 ,加入到HL3T1细胞 (HeLa HIV 1 LTR CAT报告基因 )中 ,共培养 72h后收集细胞 ,提取蛋白作CAT活性检测。结果　①含Tat1 0 1 基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后 ,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平 ;②临时转染病毒感染 2 93细胞 ,Tat在感染细胞中得到了表达 ,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV 1的LTR启动子 ,使得其下游的CAT基因得到表达。结论　重组LZRS Tat1 0 1 反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白 ,且表达蛋白具有转录激活功能。

关键词： HIV-1Tat 基因重组反转录病毒表达载体表达 Tat蛋白检测转录激活

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筛选CD4结合蛋白的酵母双杂交饵载体构建及功能签定

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第4期26卷 289-292页

作者：窦洁姚堃徐建陈云周峰彭光勇南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的构建用于筛选人CD4结合蛋白的酵母双杂交饵载体,并对其功能进行鉴定。方法 RT-PCR扩增编码CD4的cDNA。构建双杂交饵载体pAS2-1-CD4,并转化入宿主酵母菌Y190中。通过测定报告基因——β半乳糖苷酶的活性,判断饵载体自激活报告基因能... 详细信息

目的构建用于筛选人CD4结合蛋白的酵母双杂交饵载体,并对其功能进行鉴定。方法 RT-PCR扩增编码CD4的cDNA。构建双杂交饵载体pAS2-1-CD4,并转化入宿主酵母菌Y190中。通过测定报告基因——β半乳糖苷酶的活性,判断饵载体自激活报告基因能力。将CD4的已知HIV配体gp120 构建人猎物载体pACT2,转入重组菌Y190／pAS2-1-CD4。检测其报告基因活性,鉴定pAS2-1-CD4是否具有筛选CD4结合蛋白的能力。结果DNA序列测定证实,获得了编码CD4蛋白的cDNA序列。β半乳糖苷酶活性测定表明,pAS2-1-CD4单独无自激活能力,与猎物载体pACT2-gp120能够发生相互作用,激活报告基因表达。结论构建了酵母双杂交饵载体pAS2-1-CD4,为筛选CD4结合蛋白(尤其是筛选病毒编码的 CD4配体),提供了技术平台。

关键词： CD4 酵母双杂交饵载体自激活 gp120

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HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

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病毒学报 2003年第4期19卷 306-312页

作者：卢春黄丽贾雪梅曾怡南京医科大学微生物学与免疫学系南京210029

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两... 详细信息

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞。收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平。收集LZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Westernblot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Northernblot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26mRNA转录水平。重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性。结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染?

关键词：人类疱疹病毒8型复制可溶性周期复制 HIV-1Tat蛋白

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HHV6感染激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的溶解性周期复制

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病毒学报 2005年第2期21卷 93-100页

作者：曾怡卢春南京医科大学微生物学与免疫学系南京210029

运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行... 详细信息

运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行细胞融合形成异核体细胞。②将HHV6感染的JJhan细胞与BCBL-1细胞进行混合培养。③收集HHV6感染的JJhan细胞培养上清液作为条件培养基进行灭活处理,以灭活前后的条件培养基培养BCBL-1细胞。进一步离心纯化HHV6病毒颗粒,并感染BCBL-1细胞,分别设紫外线和热灭活的HHV6病毒颗粒感染BCBL-1细胞为对照。提取上述的实验细胞总RNA,RT-PCR和/或实时定量(Real—time)PCR检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)次要衣壳蛋白编码基因ORF26mRNA转录。结果显示:①细胞融合后15h开始出现明显细胞病变,RT-PCR检测不同时间的实验组ORF26mRNA转录水平均明显高于对照组;Real—timePCR检测各时间ORF26mRNA转录水平是对照组的2.3倍以上;②细胞混合培养72h时,实验组ORF26mRNA转录水平是对照组的1.8倍;混合培养5天时,实验组KSHV裂解周期蛋白K8.1表达水平是对照组的2.46倍;③灭活前后的HHV6感染细胞培养上清液培养BCBL-1细胞96h时,ORF26mRNA转录水平分别是对照组的2.73倍和2.22倍;④灭活前后的HHV6均可增强BCBL-1细胞中KSHVORF26mRNA转录水平。提示:HHV6感染可激活KSHV的溶解性周期复制。

关键词：感染对照组细胞卡波济肉瘤 mRNA转录灭活疱疹病毒 ORF2 PCR检测性周期

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CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞的杀伤作用

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病毒学报 2005年第3期21卷 188-197页

作者：唐桂霞卢春南京医科大学微生物学与免疫学系南京210029

采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcoma-associatedherpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN-Fcy∷Fur。将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系,诱导细胞转化获得具有肿瘤细胞生物学特性的N/K12细胞,进一步将pLXSN-Fcy∷Fur质粒转染N/K12细胞,获得含CD基因的N/K12/FF细胞。加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,采用MTT法、流式细胞仪和免疫组化(IHC)等方法,分别检测细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达。结果显示,N/K12/FF细胞在使用5-FC后存活率明显下降。流式细胞仪检测结果显示,5-FC作用后的N/K12/FF细胞的凋亡率与作用前相比增加了4.6%。与此同时,经5-FC作用后的N/K12和N/K12/FF细胞的生长周期发生了明显变化,均表现为G0-G1期细胞比率降低,S和G2-M期细胞比率增高。5-FC使得N/K12细胞的增殖主要阻滞在G2-M期,而N/K12/FF细胞的增殖主要阻滞在S期。IHC检测结果表明,N/K12细胞在5-FC使用前后Fas和Fas-L表达改变均不明显;而N/K12/FF细胞在5-FC使用后的Fas和Fas-L表达水平均明显高于5-FC使用前的水平。提示,CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞具有杀伤作用;凋亡有可能介导了部分杀伤过程;Fas和Fas-L有可能部分参与凋亡的诱导。

关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒肿瘤转化基因K12 CD/5-FC系统细胞凋亡卡波济肉瘤杀伤作用基因治疗

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