检索结果-内蒙古大学图书馆

腺病毒载体及其在基因治疗研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 1996年第1期23卷 8-12页

作者：姜传仓范乐明南京医科大学动脉粥样硬化研究中心

腺病毒载体在基因治疗研究中初露锋芒，引起关注，文章就腺病毒基因组的基本结构、腺病毒载体的类型及构建、重组腺病毒在基因治疗研究中的应用及其主要优、缺点等方面进行了较为全面的综述．

关键词：基因治疗腺病毒表达载体

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前胡丙素对牛主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第2期23卷 37-40页

作者：魏恩会饶曼人陈秀英范乐明陈琪中国 210029 南京医科大学动脉粥样硬化研究中心南京医科大学动脉粥样硬化研究中心南京南京医科大学心血管药理研究室

目的:探讨前胡丙素(pra-C)对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响方法:细胞DNA的合成量由~3H-胸腺嘧啶核苷[~3H]TdR)掺入试验测定,应用流式细胞术测定细胞周期,用乳酸脱氢酶活性测定观察药物的毒性.结果:无论有无血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),在... 详细信息

目的:探讨前胡丙素(pra-C)对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响方法:细胞DNA的合成量由~3H-胸腺嘧啶核苷[~3H]TdR)掺入试验测定,应用流式细胞术测定细胞周期,用乳酸脱氢酶活性测定观察药物的毒性.结果:无论有无血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),在0.01μmol/L到10μmol/L浓度范围内,pra-C均可呈浓度依赖性地抑制SMC的增殖,抑制作用主要与阻止细胞进入有丝分裂期有关,而与细胞毒性无关.结论:pra-C能够完全阻断Aug Ⅱ诱导SMC的增殖效应,部分阻止小牛血清诱导的细胞分裂,这对于血管增生性疾病的防治有重要意义.

关键词：前胡丙素牛主动脉平滑肌细胞分裂

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巨噬细胞新型氧化低密度脂蛋白结合蛋白的研究

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生物化学与生物物理学报 1999年第4期31卷 362-366页

作者：周春蕾陈琪魏恩会陈秀英王南范乐明南京医科大学动脉粥样硬化研究中心!南京210029

小鼠腹腔巨噬细胞（ＭＰＭ）膜上存在能结合氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）的Ａ类清道夫受体（ＳＲＡ），但用配体印迹技术研究制备ＭＰＭ膜蛋白，发现还存在一种新型ｏｘＬＤＬ膜结合蛋白，其分子量低于ＳＲＡ，为９... 详细信息

小鼠腹腔巨噬细胞（ＭＰＭ）膜上存在能结合氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）的Ａ类清道夫受体（ＳＲＡ），但用配体印迹技术研究制备ＭＰＭ膜蛋白，发现还存在一种新型ｏｘＬＤＬ膜结合蛋白，其分子量低于ＳＲＡ，为９２ｋＤ，它不结合乙酰化低密度脂蛋白（ａｃＬＤＬ），与配体的结合也不受还原剂的影响，但唾液酸酶处理则明显减弱其与ｏｘＬＤＬ的结合。未标记ｏｘＬＤＬ能竞争性抑制［１２５Ｉ］ｏｘＬＤＬ与９２ｋＤ膜蛋白的结合，而多聚次黄嘌呤核苷酸（ｐｏｌｙＩ）、硫酸葡聚糖和岩藻多糖等则有部分竞争性抑制作用。上述结果提示这种膜蛋白在ＭＰＭ摄取ｏｘＬＤＬ中可能起重要作用

关键词：膜蛋白氧化低密度脂蛋白巨噬细胞

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蛋白激酶C抑制剂对U937细胞清道夫受体功能的影响

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生物化学与生物物理学报 1999年第4期31卷 397-401页

作者：金艳陈琪王南陈秀英魏恩会周春蕾范乐明南京医科大学动脉粥样硬化研究中心!南京210029

为了解细胞内蛋白质磷酸化水平对清道夫受体功能的影响，用蛋白激酶Ｃ抑制剂星形孢菌素（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ，ＳＴＡ）处理人Ｕ９３７细胞。分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化低密度脂蛋白［１２５Ｉ］ｏｘＬ... 详细信息

为了解细胞内蛋白质磷酸化水平对清道夫受体功能的影响，用蛋白激酶Ｃ抑制剂星形孢菌素（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ，ＳＴＡ）处理人Ｕ９３７细胞。分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化低密度脂蛋白［１２５Ｉ］ｏｘＬＤＬ的降解、结合、细胞表面受体复合物的内移以及细胞内脂质蓄积的程度，并利用放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响。结果发现ＳＴＡ可以促进细胞结合［１２５Ｉ］ｏｘＬＤＬ，增加细胞表面受体的表达，但抑制细胞降解［１２５Ｉ］ｏｘＬＤＬ，同时抑制细胞内胆固醇酯的蓄积。从而提示清道夫受体功能与细胞内蛋白质磷酸化水平密切相关

关键词：清道夫受体 U937细胞蛋白激酶C抑制剂氧化低密度脂蛋白

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胆固醇逆转运相关蛋白基因在骨骼肌的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第2期32卷 109-114页

作者：范乐明张慧陈琪魏恩会蔡海江南京医科大学动脉粥样硬化研究中心!南京210029

构建载脂蛋白AI(apoAI)、载脂蛋白E(apoE)和卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的病毒或非病毒载体 ,分别转染离体成肌细胞或直接注入小鼠骨骼肌 ,观察其表达程度及分泌入血等情况 ,探讨借用骨骼肌异源表达这些在胆固醇逆转运中起关键作用... 详细信息

构建载脂蛋白AI(apoAI)、载脂蛋白E(apoE)和卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的病毒或非病毒载体 ,分别转染离体成肌细胞或直接注入小鼠骨骼肌 ,观察其表达程度及分泌入血等情况 ,探讨借用骨骼肌异源表达这些在胆固醇逆转运中起关键作用的重要候选基因 ,进而发展一种简易安全基因治疗方法的可能性。结果显示 ,质粒表达载体 pCMVapoE3和重组腺病毒载体Ad RSV apoAI在原代培养小鼠成肌细胞和成肌细胞株C2C12成功表达并分泌至培养液 ;直接肌肉注射重组病毒使apoAI在小鼠骨骼肌表达并分泌进入血液循环 ,持续 3 0d。LCAT的质粒表达载体和重组腺辅助病毒 (AAV)质粒DNA均可使C2C12和 2 93细胞表达出有功能的LCAT ;重组AAV质粒DNA的表达效果比常规质粒表达载体高 2～ 5倍。

关键词：载脂蛋白AI 载脂蛋白E 卵磷脂胆固醇酰基转移酶胆固醇逆转运基因转移

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蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对A类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响

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生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 693-698页

作者：管晓翔陈琪范乐明南京医科大学动脉硬化研究中心

A类清道夫受体 (scavengerreceptor,SR A)是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白 ,能够结合和摄取多种配基并介导内移 .在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点 ,有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚... 详细信息

A类清道夫受体 (scavengerreceptor,SR A)是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白 ,能够结合和摄取多种配基并介导内移 .在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点 ,有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚少 .为深入探讨A类清道夫受体胞浆域与磷酸化之间的关系 ,以及受体胞浆域磷酸化对受体功能的影响 ,实验以含有SR AcDNA质粒为模板 ,采用PCR方法扩增不含胞浆域序列的清道夫受体 ,同时扩增全长清道夫受体作为对照 .PCR产物经纯化酶切后 ,进一步亚克隆到PcDNA3 1/HisB中 ,测序结果表明 ,重组产物能够编码正确的氨基酸序列 .重组产物经脂质体Lipofectamine (LF2 0 0 0 )介导转化入CHO细胞中 ,在含G4 18选择性培养液中培养筛选 14天后 ,分离阳性克隆 ,继续培养 .采用流式细胞计数仪 (FACS)鉴定转化筛选后细胞能否表达具有功能的清道夫受体 .结果发现 ,转化的CHO细胞可以稳定表达SR A的蛋白质 ,但受体胞浆域去除后 ,摄取配基的能力明显弱于全长组 (1∶1 337) .用荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI AcLDL) ,37℃孵育转化细胞 5h后 ,激光共聚焦显微镜下观察到 :全长受体转化组细胞荧光散在分布于细胞膜和细胞器 ,而去除胞浆域组荧光只局限于细胞膜 ,说明SR

关键词： A类清道夫受体胞浆域磷酸化蛋白激酶C抑制剂巨噬细胞

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沙棘种子油抗氧化作用的研究

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营养学报 1994年第3期16卷 292-295页

作者：史泓浏蔡海江陈秀英杨春梅南京医科大学动脉粥样硬化研究中心

以丙二醛和共轭双烯为测定指标，对铜离子催化氧化或细胞氧化ＬＤＬ，沙棘油均有明显的抗氧化作用，其抗氧化程度有显著的浓度依赖关系，甚至浓度低至０．０２％时仍有明显作用。

关键词：沙棘油动脉粥样硬化抗氧化剂

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重组腺相关病毒载体介导的apoA-I和/或LCAT在肌源性细胞中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 33-38页

作者：王立峰范乐明陈丙莺刘宝瑞王若宁魏恩会南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤科南京医科大学生物化学教研室南京医科大学动脉粥样硬化中心南京医科大学动脉粥样硬化中心南京210029

卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (lecithincholesterolacyltransferase,LCAT)是产生血浆中大部分胆固醇酯 (CE)的主要酶 ,并且是胆固醇逆转运 (reversecholesteroltransfer,RCT)中的一个关键因子。将含有人apoA I和 /或LCATcDNA的rAAVAIL/rAAVL表达载体与 pDG质粒经磷酸钙共沉淀法转导入 2 93T细胞中 ,包装为重组腺辅助病毒 (rAAV) ;以Iodixanol密度梯度离心 ,继以肝素亲和层析等方法分离、纯化及浓缩rAAV ;斑点杂交鉴定制备的rAAV颗粒数达 7× 10 14 个 /L(rAAVAIL)和 1× 10 14 个 /L(rAAVL)。以rAAVAIL/rAAVL转染小鼠肌源性细胞C2C12 ,经ELISA、Western印迹和 [3 H] 胆固醇标记底物的放射化学方法结果分别表明 ,apoA I、LCAT在转染细胞中持续 30天表达 ;分化为多核的肌管细胞后 ,仍保持这种表达能力。PCR结果表明 ,目的基因已整合入细胞基因组。以rAAV为载体 ,能有效介导人LCAT、apoA I基因在肌源性细胞中表达 ,并分泌至细胞外

关键词：卵磷脂胆固醇酰基转移酶胆固醇逆转运骨骼肌细胞重组腺相关病毒基因转移

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高胆固醇血症大鼠LDL受体与apoA－1mRNA的水平变化及苯甲酸雌二醇对其影响

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中国病理生理杂志 1995年第3期11卷 234-237页

作者：姜传仓蔡海江范乐明李传富陈毓华邵莉君南京医科大学动脉粥样硬化研究中心

本文研究了实验性高胆固醇血症大鼠肝及小肠中低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体ｍＲＮＡ和载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ－１ｍＲＮＡ的水平变化以及苯甲酸雌二醇（ＥＢ）对二者的影响。发现高脂（ＨＣ）组肝及小肠ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平分别低于正... 详细信息

本文研究了实验性高胆固醇血症大鼠肝及小肠中低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体ｍＲＮＡ和载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ－１ｍＲＮＡ的水平变化以及苯甲酸雌二醇（ＥＢ）对二者的影响。发现高脂（ＨＣ）组肝及小肠ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平分别低于正常组５０％和６０％（Ｐ＜０．０５），小肠ａｐｏＡ－１ｍＲＮＡ水平低于正常组５８％（Ｐ＜０．０５），此时血清总胆固醇（ＴＣ）及ＬＤＬ胆固醇（ＬＤＬ－ｃ）均明显高于正常组（Ｐ＜０．０１），血清ａｐｏＡ－１低于正常组（Ｐ＜０．０５）。ＨＣ＋ＥＢ组血清ＴＣ及ＬＤＬ－ｃ明显低于ＨＣ组，而肝ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平则显著高于ＨＣ组，为ＨＣ组的３．５倍（Ｐ＜０．００２）。结果提示：（１）高胆固醇负荷时细胞可通过转录水平下行调节ＬＤＬ受体；（２）小肠可能在ａｐｏＡ－１的代谢中起重要作用；（３）ＥＢ可能通过诱导肝ＬＤＬ受体基因表达而降血脂。

关键词：低密度脂蛋白脱辅基脂蛋白类高胆固醇血症

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Ⅰ型胶原与氧化性低密度脂蛋白相互作用的机制研究

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中国病理生理杂志 1999年第3期15卷 210-213页

作者：魏恩会陈琪陈秀英王南南京医科大学动脉粥样硬化研究中心

目的：阐明胶原与血清低密度脂蛋白（ＬＤＬ）之间的关系。方法：在体外制备了Ⅰ型胶原凝胶，观察可能影响氧化ＬＤＬ（ｏｘ－ＬＤＬ）与胶原结合的几种因素。结果：随着ＬＤＬ氧化程度增加，其与胶原的结合量也增加。结论：这种增加可... 详细信息

目的：阐明胶原与血清低密度脂蛋白（ＬＤＬ）之间的关系。方法：在体外制备了Ⅰ型胶原凝胶，观察可能影响氧化ＬＤＬ（ｏｘ－ＬＤＬ）与胶原结合的几种因素。结果：随着ＬＤＬ氧化程度增加，其与胶原的结合量也增加。结论：这种增加可能主要源于脂蛋白的负电性增加，ＬＤＬ聚集度增大则可降低ＬＤＬ与胶原的结合能力。另外，载脂蛋白Ｂ中赖、精、组、酪氨酸残基的化学修饰。

关键词：胶原 LDL 动脉粥样硬化低密度脂蛋白

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