检索结果-内蒙古大学图书馆

日本血吸虫成虫抗原通过ROS诱导人LX-2肝星状细胞NLRP3炎症小体活化和胶原表达

寄生虫与医学昆虫学报 2018年第2期25卷 71-79页

作者：朱燕楠缪婷婷王伟陆忠奎刘劲峰王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室江苏南京211100

为了探讨日本血吸虫成虫抗原(SWA)对LX-2细胞NLRP3炎症小体活化和纤维化相关基因表达的影响,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同浓度(0、25、50、100μg/m L)的SWA刺激LX-2细胞,通过实时荧光定量PCR (Real-time PCR)和Wester... 详细信息

为了探讨日本血吸虫成虫抗原(SWA)对LX-2细胞NLRP3炎症小体活化和纤维化相关基因表达的影响,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同浓度(0、25、50、100μg/m L)的SWA刺激LX-2细胞,通过实时荧光定量PCR (Real-time PCR)和Western blot检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、α-SMA和ColⅠ的基因和蛋白表达, ELISA检测细胞IL-1β的分泌水平;同时使用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞LDH的释放;流式细胞术检测SWA刺激对LX-2细胞中ROS产生的影响;之后使用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理细胞,检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1、α-SMA、ColⅠ基因和蛋白的表达水平。结果显示,当SWA的浓度达100μg/m L时,LX-2细胞内NLRP3、Caspase-1、IL-1β、α-SMA和ColⅠ的m RNA的表达与对照组相比均明显升高,同时相关蛋白的表达和IL-1β的分泌也显著升高。流式检测结果显示,SWA刺激LX-2细胞后能显著增加细胞内ROS的生成,并在NAC处理后,可见明显抑制细胞内ColⅠ和炎症小体活化相关的基因和蛋白的表达。结果提示,SWA可以诱导LX-2细胞内炎症小体活化和胶原表达,并且ROS反应可能在介导NLRP3活化中发挥重要的作用。

关键词： LX-2细胞 SWA NLRP3炎症小体 ROS 肝纤维化

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烟曲霉batA基因在卡泊芬净抑菌“矛盾现象”中的调控功能研究

烟曲霉batA基因在卡泊芬净抑菌“矛盾现象”中的调控功能研究

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中国菌物学会2018年学术年会

作者：曾利平仲国维南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京医科大学公共卫生学院卫生检验学系现代毒理学教育部重点实验室

棘白菌素类抗真菌药物对念珠菌属是杀菌剂,对曲霉属是抑菌剂,在侵袭性真菌病治疗中发挥重要作用。近年来多项体内、体外研究证实,棘白菌素类抗真菌药物对念珠菌属和曲霉属均可产生"矛盾现象",即在低药物浓度时念珠菌或曲霉被... 详细信息

棘白菌素类抗真菌药物对念珠菌属是杀菌剂,对曲霉属是抑菌剂,在侵袭性真菌病治疗中发挥重要作用。近年来多项体内、体外研究证实,棘白菌素类抗真菌药物对念珠菌属和曲霉属均可产生"矛盾现象",即在低药物浓度时念珠菌或曲霉被杀死或抑制,而在高药物浓度时出现菌落生长的现象。目前,此现象的产生机制尚未阐明。本项目从根癌农杆菌诱导的烟曲霉随机突变库2000株菌中筛选到2株卡泊芬净耐药菌,对其中1株分离鉴定并命名为基因batA,有研究显示其在人中的同源基因ABCC2负责从肝细胞转运胆汁酸/胆汁盐到胆小管,另外和肿瘤细胞耐药也有关系;在芽殖酵母中的同源基因Ybt1表达蛋白定位在空泡膜上与卵磷脂转运进入空泡内有关。目前在丝状真菌中该基因的同源基因还没有被研究和鉴定。通过构建荧光蛋白标记菌株我们确定了BatA-GFP是定位在菌丝细胞内的空泡上发挥功能的。通过构建基因敲除菌株和基因高表达菌株我们发现相比野生株,?batA敲除株和OEbatA对卡泊芬净最小抑菌浓度MIC值没有发生明显改变,但是出现抑菌"矛盾现象"的药物浓度分别出现提前和延迟（野生株:4μg/ml;?batA:8μg/ml;OEbatA:2μg/ml）。另外我们又将其分别在含有细胞壁抑制剂Congo Red和Calcofluor White,以及含有Na Cl的高渗透培养基上检测菌株的敏感性。结果发现相比野生型菌株,?batA对Congo Red,Calcofluor White和Na Cl具有轻微的抗性;OEbatA对三种所测试的试剂都表现出非常明显的敏感表型。由此推测batA基因在维持烟曲霉细胞壁几丁质和葡聚糖等多糖的结构组成上起重要作用。所以下一步我们将围绕batA如何通过空泡运输影响细胞壁结构组分差异进而影响卡泊芬净抑菌"矛盾现象"来解释batA参与调控该现象的机制。

关键词：烟曲霉 batA基因空泡转运矛盾现象

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烟曲霉生物膜耐药反向调控基因Afssn3功能解析

烟曲霉生物膜耐药反向调控基因Afssn3功能解析

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中国菌物学会2018年学术年会

作者：龙南彪曾利平乔善磊李磊仲国维湖南邵阳学院医学检验学院南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京医科大学公共卫生学院卫生检验学系现代毒理学教育部重点实验室

侵袭性曲霉病（Invasive Aspergillosis, IA）感染的发生呈现上升趋势,仅次于假丝酵母（Candida）引起的真菌感染,病死率达60%-100%。烟曲霉是所有曲霉引起的感染中最常见的致病菌。治疗深部曲霉感染的临床应用一线药物是三唑类抗真菌药... 详细信息

侵袭性曲霉病（Invasive Aspergillosis, IA）感染的发生呈现上升趋势,仅次于假丝酵母（Candida）引起的真菌感染,病死率达60%-100%。烟曲霉是所有曲霉引起的感染中最常见的致病菌。治疗深部曲霉感染的临床应用一线药物是三唑类抗真菌药物,然而已经发现越来越多的临床分离菌对唑类药物产生耐药性,还有高比例的菌株出现多药耐药性。本项目从根癌农杆菌诱导的烟曲霉随机突变库2000株菌中筛选到8株三唑类药物耐药菌,对其中1株分离鉴定到基因Afssn3,该基因在烟曲霉中被预测作为RNA聚合酶II的转录辅因子并对基因的转录起负调控作用。通过构建荧光蛋白标记菌株我们确定了AfSSN3-GFP是定位在细胞核中发挥功能的。通过基因敲除我们发现相比野生株,?Afssn3敲除株最小抑菌浓度MIC值有2倍升高,生物量和扫描电镜的检测发现是生物膜增多导致的,所以我们设计了一系列实验检测生物膜相关成分的改变以解析其造成耐药的机制。首先通过气质联用GC-MS的方法对敲除株和野生株进行早期代谢差异物质进行普筛,发现相比于野生型,?Afssn3细胞内葡萄糖和各种氨基酸都大量减少。其次我们通过液质联用LC-MS的方法对敲除菌株和野生株进行晚期期代谢差异物质进行了普筛,分析发现相比于野生型,?Afssn3细胞内主要有两大类物质积累量增多:（1）鞘脂代谢中间产物的积累量增多;（2）葡萄糖和半乳糖组成的多糖结构增多。由此我们推测:（1）?Afssn3利用了大量葡萄糖半乳糖等单糖参与合成了胞外多糖物质;（2）消耗利用的氨基酸中丝氨酸+辅酶a参与了合成积累了鞘脂中间产物。进一步通过葡萄糖添加和氨基酸添加验证了该推测。最后我们通过转录组测序发现?Afssn3细胞中有4个药物外排泵基因有上调趋势。综上,我们推测?Afssn3通过大量合成并胞外多糖、鞘脂合成通路中间物质的累积和药泵基因上调而实现的生物膜耐药。

关键词：烟曲霉 Afssn3基因生物膜胞外多糖鞘脂合成中间产物药物外排泵

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后血吸虫病传播阻断阶段：肝纤维化问题

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 404-406页

作者：王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京201129

随着我国血吸虫病流行区逐渐达到传播阻断标准、进入后传播阻断阶段,血吸虫病肝纤维化正成为不容忽视的突出问题。在实现传播阻断和传播控制的地区,应适时调整血防工作的重点,将对血吸虫病肝纤维化的监测与干预纳入常规工作,以减少晚期... 详细信息

随着我国血吸虫病流行区逐渐达到传播阻断标准、进入后传播阻断阶段,血吸虫病肝纤维化正成为不容忽视的突出问题。在实现传播阻断和传播控制的地区,应适时调整血防工作的重点,将对血吸虫病肝纤维化的监测与干预纳入常规工作,以减少晚期血吸虫病的发生。

关键词：晚期血吸虫病传播阻断肝纤维化干预

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基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

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病毒学报 2016年第1期32卷 56-61页

作者：耿合员汪圣强谢晓谦肖雨张汀谭文杰苏川无锡出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院(无锡)人体携带病原体研究室无锡214101 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心北京102206 南京医科大学基础医学院江苏省现代病原生物学重点实验室南京210029

建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。

关键词： HCoV-NL63 RT-LAMP 快速检测

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吡喹酮对日本血吸虫感染鼠脾脏巨噬细胞功能的影响

吡喹酮对日本血吸虫感染鼠脾脏巨噬细胞功能的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：王伟周春雷刘劲峰孔德龙郭宏飞王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室

目的:脾脏肿大及脾功能亢进是日本血吸虫病慢性期后常见的体征,对此目前尚无有效的内科治疗方法。脾脏免疫细胞功能改变是导致脾脏肿大的关键因素。吡喹酮作为经典的抗血吸虫药物,过去人们主要关注其杀血吸虫作用;脾脏巨噬细胞作为介导... 详细信息

目的:脾脏肿大及脾功能亢进是日本血吸虫病慢性期后常见的体征,对此目前尚无有效的内科治疗方法。脾脏免疫细胞功能改变是导致脾脏肿大的关键因素。吡喹酮作为经典的抗血吸虫药物,过去人们主要关注其杀血吸虫作用;脾脏巨噬细胞作为介导脾脏炎症和脾功能亢进病理过程的重要细胞亚群,吡喹酮是否能影响其数量和功能进而缓解脾肿大及脾功能亢进,尚未见详细研究报道。本研究从脾脏巨噬细胞入手,观察血吸虫感染及吡喹酮治疗前后脾脏巨噬细胞数量及功能变化情况,以期揭示吡喹酮治疗血吸虫感染后脾脏肿大及脾功能亢进的作用和机制。材料与方法:我们建立日本血吸虫感染12周小鼠模型,分别采用吡喹酮3天化疗、持续4周化疗及相同疗程甲氟喹对照等干预,观察吡喹酮对脾脏肿大的治疗效果;采用流式分析治疗前后脾脏F4/80+CD11b+巨噬细胞数量变化,及F4/80+CD11b+CD16/32+和F4/80+CD11b+CD206+巨噬细胞的比例变化。结果:感染血吸虫16周小鼠经吡喹酮持续4周化疗后,肿大的脾脏明显缩小,因炎症损伤而破坏的脾脏组织结构得以明显改善。并且,吡喹酮持续4周化疗显著下调感染血吸虫16周鼠脾脏的巨噬细胞数量,对其分泌炎性因子有一定抑制作用。吡喹酮持续4周化疗使感染血吸虫16周鼠脾脏的M1型巨噬细胞比例下调。而甲氟喹治疗对照组无相应作用。结论及意义:脾脏是人体重要的免疫器官,脾脏肿大和脾功能亢进是血吸虫病的主要病理损伤。本研究发现,血吸虫感染慢性期小鼠肿大的脾脏中,巨噬细胞数量明显增多,且脾脏呈现以M1型巨噬细胞为主炎性应答状态。吡喹酮持续4周化疗具有恢复脾脏肿大、改善脾脏组织结构和下调M1型巨噬细胞比例作用,且效果比吡喹酮3天杀虫治疗组显著。本研究为血吸虫病防治中拓展吡喹酮的使用提供了依据。鉴于多种病因可导致的脾脏肿大及脾功能亢进,因此,本研究结果也为血吸虫感染以外的其他病因所致的脾脏肿大伴脾功能亢进的治疗,提供了可资参考的资料。

关键词：血吸虫病脾脏肿大巨噬细胞吡喹酮

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三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因检测及其对碘伏的抗性研究

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中国消毒学杂志 2009年第1期26卷 8-10页

作者：王晓蕾吴晓松谈智陈越英徐燕沈元任玲江苏省疾病预防控制中心南京医科大学江苏省现代病原生物学重点实验室南京210009 无锡市疾病预防控制中心徐州医学院附属医院

目的了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性。方法采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测。结果临床分离的三种21株革兰阴... 详细信息

目的了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性。方法采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测。结果临床分离的三种21株革兰阴性杆菌中,检出抗消毒剂基因(qacEΔ1-su lⅠ)阳性菌株有13株,阳性率为61.9%;三种菌抗消毒剂基因携带率之间无明显差别,大肠杆菌标准株抗消毒剂基因检测阴性。有1株抗消毒剂基因阳性的铜绿假单胞菌对碘伏的最小抑菌浓度明显高于其标准株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带率比较高,但其对碘伏消毒剂的抗性未观察到明显变化。

关键词：临床分离菌株消毒剂抗性基因碘伏最小抑菌浓度

来源：评论

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三种革兰阴性杆菌耐消毒剂基因检测及对苯扎溴铵抗性研究

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中国消毒学杂志 2009年第3期26卷 249-251页

作者：吴晓松陈越英谈智徐燕任玲沈元孙俊江苏省疾病预防控制中心南京医科大学江苏省现代病原生物学重点实验室南京210009 徐州医学院附属医院无锡市疾病预防控制中心

目的研究临床分离致病菌抗药基因情况及其对消毒剂的抗性水平。方法采用基因扩增法和肉汤稀释法分别检测了三种21株革兰阴性杆菌的耐消毒剂基因和苯扎溴铵最低抑菌浓度及最低杀菌浓度。结果临床分离的铜绿假单胞菌、大肠杆菌和鲍曼不动... 详细信息

目的研究临床分离致病菌抗药基因情况及其对消毒剂的抗性水平。方法采用基因扩增法和肉汤稀释法分别检测了三种21株革兰阴性杆菌的耐消毒剂基因和苯扎溴铵最低抑菌浓度及最低杀菌浓度。结果临床分离的铜绿假单胞菌、大肠杆菌和鲍曼不动杆菌等21株三种革兰阴性杆菌,其中有13株携带耐消毒剂基因,携带率为61.9%。7株铜绿假单胞菌对苯扎溴铵M IC均低于标准菌株,共有7株菌的MBC高于标准菌株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌多数携带耐消毒剂基因,有33.3%的菌株对苯扎溴铵的MBC高于标准株,提示其抗力有所增强。

关键词：革兰阴性杆菌临床分离菌株苯扎溴铵耐药基因抗性

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鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对消毒剂抗性研究

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中国消毒学杂志 2008年第4期25卷 341-343页

作者：徐燕吴晓松谈智陈越英戎毅王晓蕾孙俊任玲沈元江苏省疾病预防控制中心南京医科大学江苏省现代病原生物学重点实验室南京210009 徐州医学院附属医院无锡市疾病预防控制中心

目的研究临床分离的鲍曼不动杆菌携带抗药基因qacE△1-sulI情况及对消毒剂抗性水平。方法采用PCR法和肉汤稀释法分别检测临床分离鲍曼不动杆菌qacE△1-sulI基因和对消毒剂抗性变化,并与大肠杆菌标准菌株进行比较。结果临床分离的7株鲍... 详细信息

目的研究临床分离的鲍曼不动杆菌携带抗药基因qacE△1-sulI情况及对消毒剂抗性水平。方法采用PCR法和肉汤稀释法分别检测临床分离鲍曼不动杆菌qacE△1-sulI基因和对消毒剂抗性变化,并与大肠杆菌标准菌株进行比较。结果临床分离的7株鲍曼不动杆菌中,4株qacE△1-sulI基因阳性,3株阴性。醋酸氯己定对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为2mg/L^4mg/L,MBC值为4mg/L^125mg/L,均高于大肠杆菌标准株。对氯间二甲基苯酚对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为78mg/L^156mg/L;苯扎溴铵对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为9.8mg/L^19.5mg/L;聚维酮碘与聚醇醚碘对7株鲍曼不动杆菌的MIC值与标准菌株相同,分别为1000mg/L和500mg/L,均未超过标准菌株。结论鲍曼不动杆菌携带qacE△1-sulI基因携带率较高,抗药基因阳性的菌株对多数消毒剂耐受浓度增加。

关键词：鲍曼不动杆菌消毒剂抗药基因抗性

来源：评论

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