目的:研究高温后人体组织DNA的提取方法对DNA-STR分型的影响。方法:用不同浓度TritonX-100处理高温后的人体组织样本,采用Chelex-100提取DNA的方法,经DNA-STR复合扩增,用ABI-3130序列分析仪电泳分离并运用Genemapper ID V3.2基因分析软...
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目的:研究高温后人体组织DNA的提取方法对DNA-STR分型的影响。方法:用不同浓度TritonX-100处理高温后的人体组织样本,采用Chelex-100提取DNA的方法,经DNA-STR复合扩增,用ABI-3130序列分析仪电泳分离并运用Genemapper ID V3.2基因分析软件对基因进行分型。结果:用1%TritonX-100+Chelex-100处理样本后提取DNA,再经QIA quickPCR纯化后可检出全部基因座且基因座能较平衡地扩增。结论:该方法简便易行,实验效果好,是法科学领域中一种值得推荐的方法,尤其适合检案。
目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多种心脑血管疾病的基础,血液流动产生的剪切应力对内皮细胞形态和功能的影响在心血管系统疾病中起重要作用。在内皮细胞,已发现多种受剪切应力调节的基因,包括趋化因子。Fractalkine(FKN)是已发现的趋化因子CX3C亚家族仅有成员,因兼有趋化和粘附的特殊性,与多种炎症性疾病相关,并且在体研究发现低剪切应力诱导形成的AS斑块处FKN表达增加,大量研究也表明FKN对于AS的形成和发展具有重要意义。方法:为阐明内皮细胞Fractalkine m RNA及蛋白表达与剪切应力强度的关系,我们用不同强度的流体剪切应力(2.62,4.58,6.54,10.47,15.71,19.64dyne/cm2)处理培养的***926人脐静脉内皮细胞株,然后采用荧光定量RT-PCR的方法检测内皮细胞Fractalkine m RNA的表达量,采用双抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞Fractalkine蛋白的生成。结果:荧光定量FKN m RNA表达量,未处理组基础表达量极少,为0.01±0.00,在剪切应力4.58dyne/cm2时的表达量最高,为1.92±0.22,进行单因素的方差分析,六组不同剪切应力之间总P<0.05,4.58dyne/cm2与其余组的相差比较均为P<0.05,差别有统计学意义。ELISA法测定Fractalkine的蛋白表达量,未处理组基础表达量极少,为0.016±0.00,剪切应力4.58 dyne/cm2时的Fractalkine蛋白表达量最高,为0.15±0.04,进行单因素方差分析均与其他剪切应力下的蛋白表达量差异有统计学意义。结论:剪切应力诱导内皮细胞Fractalkine表达的最佳强度为4.58dyne/cm2,根据此强度可进一步研究Fractalkine基因表达与作用时间的关系。流体低剪切应力诱导内皮细胞Fractalkine m RNA的表达增高,可能在炎症和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用。
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