检索结果-内蒙古大学图书馆

中华糖尿病杂志 2023年第9期15卷 835-843页

作者：温媛媛史会连黄凯玥覃元程昱淅张伟袁栎陈园园南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京210029 江苏省中医院感染科南京210004 南京医科大学、江苏省人类功能基因组学重点实验室南京210029

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对胰岛β细胞中胰岛素原剪切的影响及作用机制。方法将原代小鼠胰岛分为对照组(正常培养)和IL-1β处理组, 将大鼠β细胞系INS-1细胞分为对照组、IL-1β处理组、15 μmol/L SKF9636处理组、15 μmol/L SKF... 详细信息

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对胰岛β细胞中胰岛素原剪切的影响及作用机制。方法将原代小鼠胰岛分为对照组(正常培养)和IL-1β处理组, 将大鼠β细胞系INS-1细胞分为对照组、IL-1β处理组、15 μmol/L SKF9636处理组、15 μmol/L SKF96365+IL-1β处理组、1 μmol/L Go6976处理组、1 μmol/L Go6976+IL-1β处理组、10 μmol/L U0126处理组、10 μmol/L U0126+IL-1β处理组、30 μmol/L磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路抑制剂LY294002处理组、30 μmol/L LY294002+IL-1β处理组、2 μmol/L核因子-κB(NF-κB)通路抑制剂BAY117082处理组、2 μmol/L BAY117082+IL-1β处理组。每组设置3个平行组。通过酶联免疫吸附试验法检测胰岛素原和总胰岛素浓度, 并以胰岛素原与总胰岛素的比值来评价胰岛β细胞中胰岛素原的剪切水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测IL-1β处理后胰岛素原剪切关键酶激素原转化酶(PC)1/3、PC2蛋白及其编码基因Pcsk1和Pcsk2的表达。对IL-1β作用的信号通路进行筛选检测, 通过qPCR和Western blotting法确定IL-1β调控Pcsk1和Pcsk2表达的信号通路。两组间比较采用独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果在原代小鼠胰岛中, 与对照组相比, IL-1β处理组使得低糖孵育时原代小鼠胰岛的上清液中胰岛素原占比由5.5%±0.8%升高为31.5%±2.1%(P<0.01)。INS-1细胞培养上清中胰岛素原占比由7.2%±0.5%升高为22.9%±3.2%(P<0.01);在原代小鼠胰岛中, IL-1β处理组Pcsk1和Pcsk2 mRNA水平与对照组相比均显著降低(Pcsk1 mRNA分别为0.40±0.06和1.00, Pcsk2 mRNA分别为0.37±0.02和1.00);IL-1β处理组PC1/3和PC2蛋白水平与对照组相比也显著降低(PC1/3分别为0.38±0.08和0.87±0.05, PC2分别为0.28±0.04和0.85±0.03), 差异均具有统计学意义(P<0.01)。在INS-1细胞中, IL-1β处理组Pcsk1和Pcsk2 mRNA水平与对照组相比均显著降低(Pcsk1 mRNA分别为0.52±0.06和1.00, Pcsk2 mRNA分别为0.45±0.04和1.00);IL-1β处理组PC1/3和PC2蛋白水平与对照组相比也显著降低(PC1/3分别为0.41±0.06和0.88±0.05, PC2分别为0.54±0.03和0.86±0.03), 差异均具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比, 30 μmol/L LY294002+IL-1β处理组中Pcsk1和PC1/3的表达以及2 μmol/L BAY117082+IL-1β处理组中Pcsk2和PC2的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在胰岛β细胞中, IL-1β分别通过PI3K和NF-κB信号通路下调Pcsk1和Pcsk2的表达, 导致胰岛素原剪切障碍。

关键词：胰岛 β细胞白细胞介素-1β 胰岛素原剪切激素原转化酶基因

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丙型肝炎病毒核心蛋白通过FOXO1/PGC-1α途径上调磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶的转录

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微生物学报 2012年第1期52卷 52-59页

作者：陈继征王倩徐松南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系江苏省人类功能基因组实验室南京210093 中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室武汉430071

【目的】分析丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CORE)稳定表达对磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PCK1)转录水平的影响,并分析HCV CORE调控PCK1转录的分子机制,为进一步阐明HCV感染致2型糖尿病机理的探讨提供新的思路。【方法】利用反转录病毒表达系... 详细信息

【目的】分析丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CORE)稳定表达对磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PCK1)转录水平的影响,并分析HCV CORE调控PCK1转录的分子机制,为进一步阐明HCV感染致2型糖尿病机理的探讨提供新的思路。【方法】利用反转录病毒表达系统构建稳定表达HCV CORE的Huh7-lunet-core细胞系。采用Real-time PCR和萤光素酶报告基因技术检测Huh7-lunet-core细胞系中PCK1、FOXO1以及PGC-1α转录水平变化,并结合Western blot分析FOXO1的活性变化。【结果】HCV CORE的稳定表达显著增强PCK1的转录水平,HCV CORE不影响FOXO1的转录和表达水平,但降低FOXO1的磷酸化水平,激活了FOXO1的转录活性,并增强PGC-1α的mRNA表达水平。【结论】HCV CORE在Huh7-lunet细胞中的稳定表达激活FOXO1的转录活性,并与PGC-1α协同作用,上调PCK1的转录,从而导致肝糖异生过度发生,对HCV CORE调控PCK1转录的分子机制的揭示可能为HCV感染相关的糖尿病的治疗提供新的靶点。

关键词： HCV CORE 2型糖尿病胰岛素抵抗磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶糖异生 FOXO1 PGC-1α

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AcMNPV肌动蛋白核定位基因的亚细胞定位

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病毒学报 2012年第2期28卷 172-177页

作者：王倩陈继征王云王学军陈新文南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系江苏省人类功能基因组实验室南京210093 中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室武汉430071

当前细胞核内肌动蛋白的功能是一个研究热点,核内存在肌动蛋白并参与细胞核内发生的许多生命活动。杆状病毒是迄今唯一报道的利用核内肌动蛋白进行复制增殖的病原微生物,为核内肌动蛋白的结构与功能的研究提供了独特的系统。有报道显示A... 详细信息

当前细胞核内肌动蛋白的功能是一个研究热点,核内存在肌动蛋白并参与细胞核内发生的许多生命活动。杆状病毒是迄今唯一报道的利用核内肌动蛋白进行复制增殖的病原微生物,为核内肌动蛋白的结构与功能的研究提供了独特的系统。有报道显示AcMNPV的ie-1,pe38,ac4,he65,ac102和ac152基因与肌动蛋白单体的核转运有关,然而关于这六个基因的亚细胞定位及其在肌动蛋白入核过程中的功能并没有深入的研究。本文首次揭示了这六个基因的亚细胞定位,IE1和AC152是全细胞分布,PE38和AC102也为核质分布,但主要分布在细胞核中,而AC4和HE65定位于细胞质。但AC102和IE1可以分别介导AC4和HE65入核。同时我们发现当使用外源强启动子OpIE2,在转染ie-1或pe38之后表达ac4和he65可以部分招募肌动蛋白单体入核,而时序性共转染这四个基因则可招募最多肌动蛋白单体入核。对肌动蛋白核定位基因在细胞中的定位分析为进一步了解杆状病毒介导肌动蛋白入核的分子机理提供支持。

关键词： AcMNPV 肌动蛋白核定位基因肌动蛋白核转运

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氟化聚乙烯亚胺衍生物构成的胶束载体的构建、表征及其在跨血-脑屏障递送中的作用研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2024年第8期44卷 1035-1043页

作者：郭小瑭卢席缘李聚学南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室江苏南京211166

目的:探讨由氟化聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)衍生物构成的纳米胶束的构建、表征及其在跨血-脑屏障(blood-brain barrier,BBB)进行基因递送中的作用。方法:使用PEI和七氟丁酸酐(heptafluorobutyric anhydride,HFAA)通过化学反应合成PEI-HFAA,随后通过酰胺反应连接芥子酸(sinapic acid,SA)得到产物PEI-HFAA-SA(简称SPF),最终在SPF外包裹聚山梨酯80(polysorbate 80,PS80)得到最终产物PEI-HFAA-SA@PS80(简称SPFT)。通过傅里叶变换红外吸收光谱、核磁共振氟谱和核磁共振氢谱等对SPFT的分子键和元素组成进行分析,并通过动态光散射实验、琼脂糖凝胶阻滞实验和扫描电镜观察对其水合直径、质粒吸附及保护能力、载体质粒复合体的稳定性和形貌进行进一步表征。探究SPFT在小鼠神经胶质瘤细胞Neuro 2a中的基因转染效率和细胞毒性,通过尾静脉注射携带绿色荧光蛋白表达质粒的SPFT至C57BL/6J小鼠中,观察其在脑组织中的分布情况以及BBB内细胞的基因转染效果。结果:以SA和HFAA修饰以及PS80包裹的方法合成了SFPT。检测结果显示,SPFT水动力粒径100~200 nm,并且对质粒有一定的携带和保护作用。SPFT携带质粒在体外表现出良好的转染能力和生物相容性。体内实验显示,尾静脉注射后的SPFT在小鼠大脑中有聚集现象,能够携带质粒穿越BBB并进行基因递送。结论:SPFT具有一定生物相容性和良好的穿越BBB及基因递送能力,为脑部疾病的治疗药物递送提供了新的思路。

关键词：芥子酸血-脑屏障聚乙烯亚胺氟化修饰

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LDL受体介导的血浆低密度脂蛋白胆固醇的内吞

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生命的化学 2014年第3期34卷 329-336页

作者：范丽娟李仲江苏省人类功能基因组学重点实验室南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京210029

胆固醇是动物细胞细胞膜的重要组成成分,其做为细胞和环境之间的屏障调节细胞膜的流动性。胆固醇是体内所有的类固醇激素和胆酸合成的前体物质,参与体内代谢。同时胆固醇在神经系统的发育中也起着重要的作用。在血浆中胆固醇以低密度脂... 详细信息

胆固醇是动物细胞细胞膜的重要组成成分,其做为细胞和环境之间的屏障调节细胞膜的流动性。胆固醇是体内所有的类固醇激素和胆酸合成的前体物质,参与体内代谢。同时胆固醇在神经系统的发育中也起着重要的作用。在血浆中胆固醇以低密度脂蛋白和高密度脂蛋白这两种胆固醇运载血脂蛋白的形式运输。动物细胞通过细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDL receptor,LDLR)介导的内吞可以从血液中摄取富含胆固醇的低密度脂蛋白,当细胞表面的LDLR的功能缺陷时,可以导致高胆固醇血症,继而引起动脉粥样硬化、冠心病和中风等严重疾病。本文综述了LDL受体的概述及其通过内吞调节血液中低密度脂蛋白胆固醇水平的作用,并对LDL受体的调节进行了阐述。

关键词： LDL受体胆固醇受体介导的内吞

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FTO通过m6A调控3T3-L1细胞分化的作用及其机制研究

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现代生物医学进展 2024年第20期24卷 3801-3808,3822页

作者：李尹许心怡陈钰倩任炼辞李聚学南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系江苏南京211166 南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室江苏南京211166 南京医科大学第一临床医学院江苏南京210029

目的:探究m6A去甲基化酶FTO及其下游基因CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响,以及FTO影响CLK2表达水平的分子机制。方法:(1)通过成脂分化诱导和后续的油红染色以及油红定量探究FTO和CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响;(2)通过蛋白免疫印迹和... 详细信息

目的:探究m6A去甲基化酶FTO及其下游基因CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响,以及FTO影响CLK2表达水平的分子机制。方法:(1)通过成脂分化诱导和后续的油红染色以及油红定量探究FTO和CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响;(2)通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR测定FTO和CLK2蛋白水平和m RNA水平的改变;(3)通过生物信息学分析筛选不同分化时期的3T3-L1细胞差异化m6A修饰位点;(4)通过MeRIP-qPCR测定CLK2 m RNA上的m6A修饰水平;(5)通过放线菌素D抑制新生转录本合成探究CLK2 m RNA的降解速率;(6)通过胰岛素刺激探究3T3-L1细胞Insulin-AKT通路激活情况。结果:(1)3T3-L1细胞的成脂分化依赖FTO的去甲基化酶活性和CLK2的激酶活性;(2)CLK25'UTR区域存在可被FTO去甲基化的m6A修饰,且该位点m6A修饰提高CLK2 m RNA的降解速率;(3)CLK2表达水平与FTO表达水平存在正相关,且CLK2和FTO抑制剂均抑制3T3-L1细胞Insulin-AKT通路的激活。结论:FTO通过降低CLK25'UTR区域的m6A修饰水平从而抑制CLK2 m RNA的降解,促进CLK2的蛋白表达,CLK2进而通过维持Insulin-AKT通路活性促进3T3-L1细胞成脂分化。

关键词： m6A修饰成脂分化 FTO CLK2

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