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中国组织工程研究与临床康复 2008年第38期12卷 7551-7554页

作者：阮成钧张化彪冯伟生冯振卿南京医科大学第一附属医院神经科南京市210029 美国University of Southern California神经遗传研究所南京医科大学基础医学院南京市210029 卫生部抗体技术重点实验室南京市210029

目前用于脑出血治疗研究的主要细胞有:神经干细胞、遗传工程神经干细胞、骨髓间质干细胞、脐血细胞、胚胎干细胞、重组细胞、微囊化人工细胞等,本文就前5种细胞移植在出血性脑损伤中的保护作用进行综述。干细胞移植在脑出血性动物身上... 详细信息

目前用于脑出血治疗研究的主要细胞有:神经干细胞、遗传工程神经干细胞、骨髓间质干细胞、脐血细胞、胚胎干细胞、重组细胞、微囊化人工细胞等,本文就前5种细胞移植在出血性脑损伤中的保护作用进行综述。干细胞移植在脑出血性动物身上的实验所取得的良好效果,显示细胞移植重建损伤的脑组织、改善脑功能成为治疗脑出血疾病的必然途径临床实验也取得了一定效果,但要真正应用于临床目前还有许多问题要解决:要想准确的定向诱导细胞分化,需要更深入的研究局部微环境,细胞因子及基因对干细胞分化的作用;细胞移植促进脑出血功能的恢复,其确切的机制还需要进一步研究;诱导分化的神经干细胞是否能象正常神经细胞一样能分泌神经递质,是否具有复杂的电生理等。

关键词：细胞移植脑出血脑损伤

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骨髓间质干细胞的胞质体制备及其活性

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第43期12卷 8449-8453页

作者：阮成钧冯伟生冯振卿顾萍张化彪南京医科大学第一附属医院神经科江苏省南京市210029 潢川县人民医院河南省潢川县465150 南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室江苏省南京市210029 美国南加利福尼亚大学神经遗传研究所美国加利福尼亚90033

背景:细胞质在细胞分化过程中起着决定作用,但目前的实验很难获得大量的、有活性的胞质体。目的:分析影响大鼠骨髓间质干细胞胞质体制备的因素,并观察胞质体活性,以期为细胞重组提供实验依据。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的多因... 详细信息

背景:细胞质在细胞分化过程中起着决定作用,但目前的实验很难获得大量的、有活性的胞质体。目的:分析影响大鼠骨髓间质干细胞胞质体制备的因素,并观察胞质体活性,以期为细胞重组提供实验依据。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的多因素设计实验,于2006-09/2007-01在南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室完成。材料:选用1月龄SD大鼠,用于分离骨髓间充质干细胞。方法:骨髓间质干细胞经分离培养、扩增后,用松胞素B、秋水仙碱结合离心术制备胞质体。主要观察指标:应用苏木精-伊红、Alexa-Flour?488anti-ratCD106及Bis-Benzimide染色进行形态学观察,计算胞质体纯度;应用Rhodamine123标记后用流式细胞仪检测胞质体中线粒体膜势能。结果:①胞质体纯度可达95%。80%的胞质体在一两个小时内恢复原来形态,但其生活力不会超过18h。胞质体活性随时间延长而下降。②骨髓间质干细胞的胞质体制备与松弛素B、秋水仙碱剂量、离心速度、离心时间,特别是离心温度有关。结论:骨髓间质干细胞的胞质体制备可受多因素影响。当胞质体具有活性,具有有核细胞的一些行为特征时,可以进行细胞重组。

关键词：干细胞骨髓细胞胞质体细胞松弛素类秋水仙碱

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人神经生长因子在哺乳细胞CHO内表达及鉴定

人神经生长因子在哺乳细胞CHO内表达及鉴定

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中国生物工程学会生命科学与生物技术前沿学术会议

作者：戚菁潘明洁李素芹李越希南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京 21002 南京军区军事医学研究所南京 21002 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京 21002 南京军区军事医学研究所南京 21002

目的：构建人β-神经生长因子(β-NGF)重组真核表达载体，在二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达该基因，并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法：酶切Pcdna3.1-β-NGF获得β-NGF基因，将它连接到真核表达载... 详细信息

目的：构建人β-神经生长因子(β-NGF)重组真核表达载体，在二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达该基因，并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法：酶切Pcdna3.1-β-NGF获得β-NGF基因，将它连接到真核表达载体Pmd902中，将构建好的Pmd902-β-NGF经脂质体转染法导入到二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞中，用撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)的方法进行筛选，并用ELISA对表达产物进行鉴定。利用鸡胚背根神经节法检测表达产物活性。结果：重组载体经OCR鉴定、酶切、测序等分析，插入的基因片段为β-NGF的基因。转染β-NGF基因的细胞上清中可检到NGF蛋白。表达产物能够促进鸡胚背根神经节的生长。结论：成功构建了β-NGF在CHO细胞中的稳定表达体系，转染β-NGF基因的CHO细胞所分泌的β-NGF蛋白具有较高的生物学活性，为进一步研究β-NGF的生物学功能、开展生物治疗和大规模生产重组人神经生长因子奠定了基础。

关键词：人神经生长因子基因克隆真核表达二氢叶酸还原酶缺陷卵巢细胞生物活性生物治疗

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人神经生长因子CHO表达系统的构建

人神经生长因子CHO表达系统的构建

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：戚菁潘明洁李越希南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系南京军区军事医学研究所

神经生长因子(NGF)具有神经营养、神经保护和促神经生长的作用。它控制神经细胞的分化和神经回路的分布。对非神经系统也有作用,被认为是非神经元组织在生理应激条件下的一种炎症介质。可以调节免疫细胞的活性,抑制某些肿瘤的有丝分裂,... 详细信息

神经生长因子(NGF)具有神经营养、神经保护和促神经生长的作用。它控制神经细胞的分化和神经回路的分布。对非神经系统也有作用,被认为是非神经元组织在生理应激条件下的一种炎症介质。可以调节免疫细胞的活性,抑制某些肿瘤的有丝分裂,还可促进伤口组

关键词：人神经生长因子二氢叶酸还原酶 CHO

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改善神经微循环对受压大鼠坐骨神经VEGF表达及神经传导速度的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2007年第6期27卷 598-601,F0004页

作者：王建立唐金荣苏建华侯熙德张平朱学江吴乐肖杭南京新港医院内科南京医科大学第一附属医院神经内科江苏南京210029 金坛市人民医院神经内科南京医科大学第二附属医院病理科江苏南京210011 南京医科大学基础医学院生理教研室江苏南京210029 南京医科大学基础医学院神经毒理研究所江苏南京210029

目的:探讨改善微循环对周围神经嵌压性损害血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达和神经传导功能的影响。方法:制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,在不同时点采用免疫组化与行为医学、电生理学的方法检测内皮细胞生长因子水平与大鼠足趾间距... 详细信息

目的:探讨改善微循环对周围神经嵌压性损害血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达和神经传导功能的影响。方法:制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,在不同时点采用免疫组化与行为医学、电生理学的方法检测内皮细胞生长因子水平与大鼠足趾间距、坐骨神经传导速度,并将各项检测结果进行对比分析。结果:①嵌压大鼠坐骨神经后,12h起各组背根神经节细胞VEGF表达开始增加,72h达到高峰,与正常对照组比较,其余各组各时段背根神经节细胞VEGF表达水平均显著增加(P<0.01/P<0.05),前列地尔组和盐酸丁咯地尔组较模型组为优(P<0.01/P<0.05)、表达的数量增加、持续时间延长。②4周时,前列地尔组和盐酸丁咯地尔组第4周时大鼠足趾间距、坐骨神经传导速度虽较正常对照组差(P<0.01/P<0.05),但均较模型组为优(P<0.05)。结论:周围神经嵌压性损害后神经受损,改善微循环可增加VEGF的表达并提高神经传导速度、减轻神经功能损害,因而对周围神经嵌压性损害的修复具有促进作用。

关键词：坐骨神经嵌压性损害微循环足趾间距神经传导内皮细胞生长因子

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超顺磁性氧化铁标记神经干细胞移植入局灶性脑缺血大鼠纹状体的MRI示踪及其对学习记忆的影响

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临床神经病学杂志 2007年第3期20卷 203-206页

作者：晋光荣徐汉荣居胜红韩群颖张海军刘俊华沈志花东南大学基础医学院神经科学研究所南京210009 盐城市第一医院神经内科东南大学附属中大医院放射科南京医科大学基础医学院解剖教研室

目的探讨以超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的胎鼠神经干细胞(NSCs)移植入局灶性脑缺血大鼠纹状体的MRI示踪及其对学习与记忆的影响。方法体外培养的胎鼠NSCs用Fe2O3-多聚左旋赖氨酸(Fe2O3-PLL)标记,普鲁士蓝和台盼蓝染色分别检测标记率和细... 详细信息

目的探讨以超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的胎鼠神经干细胞(NSCs)移植入局灶性脑缺血大鼠纹状体的MRI示踪及其对学习与记忆的影响。方法体外培养的胎鼠NSCs用Fe2O3-多聚左旋赖氨酸(Fe2O3-PLL)标记,普鲁士蓝和台盼蓝染色分别检测标记率和细胞活力。将大鼠随机分为A组(正常对照组)、B组(正常标记NSCs移植组)、C组(脑缺血组)、D组(标记NSCs移植组)、E组(未标记NSCs移植组)及F组(灭活标记NSCs移植组)。取C组、D组、E组和F组大鼠制备局灶性脑缺血模型;将标记及未标记的NSCs悬液及灭活的标记NSCs悬液分别定向注射于B组、D组、E组和F组大鼠左侧纹状体内;移植后3d、7d、2周、3周、4周,对A组、C组、D组和E组分别进行Y型电迷宫检测;对B组、D组和F组进行活体MRI示踪扫描;MRI扫描后的大鼠行脑组织切片普鲁士蓝染色,观察移植的NSCs分布。结果NSCs的Fe2O3-PLL标记率近100%,标记的NSCs细胞活力为95%。与C组比较,D组和E组移植后各时间点大鼠的学习与记忆能力明显改善(均P<0.05);MRI显示移植4周后D组移植区低信号影范围较大;脑组织切片可见移植的NSCs沿胼胝体向对侧迁移。结论Fe2O3-PLL标记不影响NSCs活力;移植NSCs能改善脑缺血大鼠的学习与记忆功能;移植的NSCs可向病灶区迁移。

关键词：神经干细胞超顺磁性氧化铁磁共振成像局灶性脑缺血移植

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VEGF表达对大鼠坐骨神经嵌压性损害的神经保护作用

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中华神经医学杂志 2007年第12期6卷 1244-1248页

作者：唐金荣苏建华侯熙德章莉萍张平朱学江吴乐肖杭丁新生南京医科大学第一附属医院神经内科南京210029 金坛市人民医院神经内科江苏213200 南京医科大学第二附属医院病理科南京210034 南京医科大学基础医学院南京210029 南京医科大学神经毒理研究所南京210029

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达对周围神经嵌压症病理损伤和神经功能损害的保护作用。方法将80只SD大鼠按体重随机分层分组制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,取嵌压后第12小时、72小时、7天与第4周的大鼠坐骨神经,分别采用... 详细信息

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达对周围神经嵌压症病理损伤和神经功能损害的保护作用。方法将80只SD大鼠按体重随机分层分组制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,取嵌压后第12小时、72小时、7天与第4周的大鼠坐骨神经,分别采用免疫组化与病理学、电生理学的方法检测VEGF水平与病理变化、神经传导速度、脊髓神经元计数等,并将各项检测结果进行对比,运用正常对照组、模型组、前列地尔组和盐酸丁咯地尔组采用SAS统计软件9.1.3进行方差分析统计处理。结果(1)嵌压大鼠坐骨神经后,除正常对照组外12h起各组背根神经节细胞VEGF表达开始增加,72h达到高峰后开始下降,一周时接近正常水平,正常对照组只轻度表达。与正常对照组比较,其余各组各时段背根神经节细胞VEGF表达水平均显著增加(P<0.05),前列地尔组和盐酸丁咯地尔组较模型组为优(P<0.05)、表达的数量增加、持续时间延长。(2)嵌压大鼠坐骨神经4周后,正常对照组正常,其余各组病理变化、脊髓神经元计数均明显较正常对照组差(P<0.01);而前列地尔组和盐酸丁咯地尔组第4周时上述诸项结果虽较正常对照组差(P<0.05),但均较模型组为优(P<0.05)。(3)嵌压大鼠坐骨神经4周时,正常对照组正常,其余各组大鼠坐骨神经传导速度均明显较正常对照组差(P<0.01);而前列地尔组和盐酸丁咯地尔组第4周时上述诸项结果虽较正常对照组差(P<0.05),但均较模型组为优(P<0.05)。(4)VEGF表达增加组之病理改变减轻、神经功能恢复增加。结论对于周围神经嵌压性损害,VEGF表达的增加可减轻周围神经病理损害、提高神经传导速度、促进周围神经损伤的修复。

关键词：坐骨神经嵌压性损害内皮细胞生长因子病理改变传导速度微循环

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大鼠坐骨神经损害c-fos基因表达及Ca^(2+)阻滞剂的保护作用

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南京医科大学学报（自然科学版） 2006年第10期26卷 898-901,F0002页

作者：顾萍唐金荣苏建华张平朱学江吴乐王颖侯熙德南京医科大学第一附属医院神经内科江苏南京210029 金坛市人民医院神经内科江苏金坛213200 南京医科大学第二附属医院病理科江苏南京210011 南京医科大学基础医学院江苏南京210029 南京医科大学神经毒理研究所江苏南京210029

目的:探讨周围神经嵌压性损害早期c-fos基因的表达及Ca2+通道阻滞剂(CCB)对周围神经嵌压性损害保护作用的机制。方法:将80只SD大鼠按体重随机分层分组制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,取嵌压后第1、4周的大鼠坐骨神经,采用免疫组织化... 详细信息

目的:探讨周围神经嵌压性损害早期c-fos基因的表达及Ca2+通道阻滞剂(CCB)对周围神经嵌压性损害保护作用的机制。方法:将80只SD大鼠按体重随机分层分组制作坐骨神经嵌压性损害的动物模型,取嵌压后第1、4周的大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学结合电生理学的方法测定c-fos基因的表达及坐骨神经传导速度,并将两者结果进行对比,运用正常对照组、模型组、CCB高剂量和CCB低剂量组进行对照统计。结果:嵌压大鼠坐骨神经后,大鼠坐骨神经c-fos基因的表达第1周时显著增加(P<0.01),第4周时趋于正常;CCB可减少1周时大鼠背根神经节细胞c-fos基因的表达,高剂量组尤为显著(P<0.01);第4周时CCB组坐骨神经的传导速度虽较正常对照组及假手术组慢(P<0.01),但较模型组快,高剂量组显著(P<0.05)。结论:周围神经嵌压性损害早期c-fos基因表达增加,并使神经功能受损;CCB则可通过阻断Ca2+内流过程而减少早期神经细胞c-fos基因的表达,从而对周围神经嵌压性损害具有保护作用。

关键词：周围神经嵌压性损害 c—fos基因 Ca^2+通道阻滞剂保护

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盐酸依普卡林缓解内皮素-1诱导的大鼠肺动脉高压

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基础医学与临床 2004年第1期24卷 106-107页

作者：解卫平王虹汪海胡刚南京医科大学第一附属医院呼吸内科南京210029 北京军事医学科学研究院毒物药物研究所北京100850 南京医科大学基础医学院药理和神经生物系南京210029

慢性肺原性心脏病(Chronic cor pulmonale)是一种严重危害人类健康常见病,肺动脉高压(PH)是慢性阻塞性肺病(COPD)发展成慢性肺原性心脏病的中心环节.内皮素-1(ET-1)是目前已知最强的肺血管收缩因子之一[1],其主要是通过阻断血管平滑肌细... 详细信息

慢性肺原性心脏病(Chronic cor pulmonale)是一种严重危害人类健康常见病,肺动脉高压(PH)是慢性阻塞性肺病(COPD)发展成慢性肺原性心脏病的中心环节.内皮素-1(ET-1)是目前已知最强的肺血管收缩因子之一[1],其主要是通过阻断血管平滑肌细胞(VSMC)ATP敏感性钾通道(KATP)而发挥其在肺动脉高压中的作用[2].盐酸依普卡林(iptkalim hydrochloride,IPK)是一种新型的KATP通道开放剂(KATPCO),本研究系统观察了经大鼠肺动脉注入ET-1后平均肺动脉压(mPAP)的变化,及IPK对这种肺动脉高压的预防作用.

关键词：盐酸依普卡林内皮素-1 大鼠肺动脉高压药物治疗血流动力学

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有机磷与拟除虫菊酯农药的拟雌激素活性研究

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中华劳动卫生职业病杂志 2001年第4期19卷 274-277页

作者：陈海燕王心如肖继皋胡刚宋玲王守林何凤生南京医科大学基础医学院药理与生理学系 210029 南京医科大学基础医学院应用毒理研究所 210029 中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所

目的　观察有机磷与拟除虫菊酯农药的拟雌激素活性。方法　选用 5种有机磷农药[辛硫磷 (Pho)、马拉硫磷 (Mal)、乐果 (Dim)、久效磷 (Mon)和水胺硫磷 (Opt) ]和 4种拟除虫菊酯农药[氰戊菊酯 (Fen)、溴氰菊酯 (Del)、氯氰菊酯 (Cyp)和苄... 详细信息

目的　观察有机磷与拟除虫菊酯农药的拟雌激素活性。方法　选用 5种有机磷农药[辛硫磷 (Pho)、马拉硫磷 (Mal)、乐果 (Dim)、久效磷 (Mon)和水胺硫磷 (Opt) ]和 4种拟除虫菊酯农药[氰戊菊酯 (Fen)、溴氰菊酯 (Del)、氯氰菊酯 (Cyp)和苄氯菊酯 (Per) ],进行大鼠子宫雌激素受体 (ER)竞争结合试验和人乳腺癌MCF 7细胞增殖试验。结果　 5种有机磷农药在体外均不与大鼠子宫ER结合 ,不能诱导MCF 7细胞增殖 ;4种拟除虫菊酯农药在体外能与 2 ,4 ,6,7 3H雌二醇 ( 3H E2 )竞争ER ,其结合能力Fen >Cyp >Per>Del,Fen与Cyp抑制3H E2 与ER结合的IC50 分别为 0 .4 79、0 .5 62mmol/L ;拟除虫菊酯能引起MCF 7细胞不同程度的增殖 ,刺激增殖能力Per>Fen >Del>Cyp ,其中Cyp、Del和Per所引起的增殖效应能被雌激素拮抗剂ICI 178.82 0完全阻断 ,而Fen所引起的细胞增殖不能被完全阻断。结论　观察的 5种有机磷农药不具有拟雌激素活性 ;4种拟除虫菊酯农药通过激活ER显示其拟雌激素活性。Fen诱导的MCF 7细胞增殖不完全是由ER激活所引起。

关键词：农药中毒有机磷农药中毒拟除虫菊酯中毒拟雌激素活性 MCF-7细胞增殖试验

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