检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王章定陈冬寅徐进王晓颖李爱萍周建伟南京医科大学公共卫生学院职业与环境卫生学系江苏省应用毒理学重点实验室现代毒理学教育部重点实验室

【研究背景】全球范围内,恶性肿瘤依然是危害公众健康的重大公共卫生问题。尽管近年来肿瘤的化疗与靶向治疗快速发展,但对黑色素瘤、胰腺癌等恶性肿瘤效果都不理想。JWA基因,作为新的环境应答基因,课题组前期研究发现JWA可以抑制正常细... 详细信息

【研究背景】全球范围内,恶性肿瘤依然是危害公众健康的重大公共卫生问题。尽管近年来肿瘤的化疗与靶向治疗快速发展,但对黑色素瘤、胰腺癌等恶性肿瘤效果都不理想。JWA基因,作为新的环境应答基因,课题组前期研究发现JWA可以抑制正常细胞氧化应激、修复DNA损伤,除此之外,JWA表达缺陷的肿瘤细胞迁移和转移等恶性表型均明显高于载体对照细胞。但整体动物水平上JWA对肿瘤的调控机制尚未完全阐明。【目的】探讨JWA在整体动物水平上影响肿瘤生长、转移的机制,通过动物和细胞模型评价JWA基因小分子激动剂JAC4的生物学功能和药物代谢动力学参数。【方法】利用JWA基因剔除(JWA?2/?2)小鼠和JWA Tet-on转基因小鼠,构建黑色素瘤转移与生长模型,观察降低/升高机体JWA表达对黑色素瘤生长与转移的作用;通过黑色素瘤细胞荷瘤和转移模型、胰腺癌PDX模型评价JWA小分子激动剂JAC4抑瘤效果,并用基因剔除(JWA?2/?2)小鼠和JWA KO细胞进行脱靶效应验证;用胰腺癌Panc-1细胞和胃癌BGC-823细胞验证JAC4对能量代谢的影响。采用LC-MS/MS法测定JAC4在SD大鼠和多种属肝微粒体、血浆中的代谢情况。【结果】***基因剔除小鼠黑色素瘤转移和生长的能力均显著高于野生型小鼠,JWA转基因小鼠能有效抑制B16-F10肺转移,且有剂量-效应关系;借助高通量分析发现转录因子NF-?B p65的活性在JWA剔除小鼠体内显著上调,体内及体外的一系列实验进一步证实JWA通过抑制p65的活化负调控CXCR4的表达。2. JAC4有效抑制B16-F10细胞皮下荷瘤生长,且有剂量-效应关系,其中100 mg/kg/d的JAC-4的抑瘤效果与80 mg/kg/d达卡巴嗪相当;JAC4与达卡巴嗪联合使用可提高达卡巴嗪的抑瘤效果;胰腺癌PDX模型中JAC4对人胰腺癌荷瘤的抑瘤率～24.1%,JAC4处理组小鼠未发生死亡,而溶剂对照组与化疗组小鼠均出现死亡(溶剂对照组死亡数量为3/30,化疗组死亡数量为5/30);血清生化结果显示JAC-4显著降低荷瘤小鼠乳酸脱氢酶水平(JAC4组LDH值为2213.0±79.2 U/L,对照组LDH值为2975.5±218.5 U/L)。3.脱靶效应显示JAC4对JWA基因剔除的荷瘤小鼠的抑瘤率仅为9.8%,而对JWA基因野生型小鼠抑瘤效果抑瘤率达到46.1%;用JAC4处理JWA KO的HBE细胞,JAC4失去了对JWA基因及其下游MAPK信号分子(p-MEK和p-ERK)的调控,体内体外实验均证实JAC4发挥抑瘤效应必须通过激活JWA基因表达才能实现。4. JAC4通过增强细胞的基础呼吸(BR)、ATP生成量和有氧呼吸最大潜能(MR),促进人胰腺癌Panc-1细胞和胃癌BGC-823细胞线粒体氧化磷酸化过程,同时JAC4显著抑制细胞的无氧糖酵解。然而,在JWA突变型BGC-823细胞中,JAC4对线粒体有氧氧化和糖无氧酵解过程各参数均无明显影响,再次佐证JAC4通过激活JWA表达改变肿瘤代谢方式。5. SD大鼠单次灌胃口服JAC4(100mg/kg),JAC4最大血药浓度Cmax为1012.21 ng/ml,半衰期t1/2为1.34h;JAC4在人肝微粒体中最为稳定,60分钟剩余12.78%(人肝微粒体>食蟹猴肝微粒体>猪肝微粒体>比格犬肝微粒体>大鼠肝微粒体);与上述5种属的血浆蛋白结合率均较高(89.51%以上)。【结论】整体动物模型发现机体JWA具有抑制肿瘤生长、转移的生物学作用, JWA基因激动剂JAC4通过影响机体组织微环境能够有效抑制肿瘤生长、转移和改善生存。这些发现为研究以JWA为靶点的抑制肿瘤生长、转移治疗手段提供了新的方向,有重要的潜在应用前景。

关键词： JWA 小分子化合物肿瘤微环境黑色素瘤胰腺癌

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多措并举扎实推进医联体建设努力提升医疗服务能力

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中国卫生产业 2016年第35期13卷 179-180页

作者：苏建华孙文龙季英唐金荣肖杭江苏大学附属金坛医院江苏常州213200 南京医科大学第一附属医院江苏南京210029 南京医科大学应用神经毒理研究所江苏南京210029

该院作为江苏省16家首批公立医院综合改革试点县医院之一,积极推进"上下联动、内增活力、外加推力"的医改措施,深化内涵建设,共享优势医疗资源,改革运行机制,不断发挥集团医院服务体系整体效益,医院服务能力进一步增强,医院... 详细信息

该院作为江苏省16家首批公立医院综合改革试点县医院之一,积极推进"上下联动、内增活力、外加推力"的医改措施,深化内涵建设,共享优势医疗资源,改革运行机制,不断发挥集团医院服务体系整体效益,医院服务能力进一步增强,医院发展规划进一步优化,病人就医感受得到进一步提升。

关键词：举措医联体服务能力提升

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甲钴胺对大鼠缺血-再灌注损伤神经细胞凋亡及Caspase-3 mRNA表达的影响

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医药导报 2016年第6期35卷 574-578页

作者：苏建华陈玉芳唐金荣丁新生肖杭江苏大学附属金坛医院神经内科金坛213200 江苏省常州市第四人民医院病理科常州213000 南京医科大学第一附属医院神经内科南京210029 南京医科大学应用神经毒理研究所南京210029

目的探讨甲钴胺对缺血-再灌注大鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)mRNA表达的影响。方法将大鼠按随机原则分为假手术组、模型对照组、尼莫地平组、甲钴胺小剂量组、甲钴胺大剂量组,每组30只。假手术组与模型对照组分别灌胃给予0.9... 详细信息

目的探讨甲钴胺对缺血-再灌注大鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)mRNA表达的影响。方法将大鼠按随机原则分为假手术组、模型对照组、尼莫地平组、甲钴胺小剂量组、甲钴胺大剂量组,每组30只。假手术组与模型对照组分别灌胃给予0.9%氯化钠溶液20 m L·kg^(-1)·d^(-1);尼莫地平组灌胃尼莫地平1 mg·kg^(-1)·d^(-1);甲钴胺小、大剂量组分别灌胃甲钴胺50,100μg·kg^(-1)·d^(-1),给药1周。采用线栓法栓塞大脑中动脉3 h制作大鼠脑缺血-再灌注模型;观察再灌注24 h后神经功能缺损评分,于6,12,24 h用TUNEL法检测顶叶皮质细胞凋亡、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3 mRNA的表达。结果模型对照组神经功能缺损评分为(2.70±0.52)分,尼莫地平组、甲钴胺小剂量组、甲钴胺大剂量组分别为(1.30±0.51),(2.20±0.75),(1.30±0.81)分,与模型对照组比较,均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与尼莫地平组比较,甲钴胺大剂量组差异无统计学意义(P>0.05),与甲钴胺小剂量组比较,甲钴胺大剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。尼莫地平组、甲钴胺小、大剂量组各时间点神经细胞凋亡较模型对照组明显减少;甲钴胺大剂量组24 h时较尼莫地平组差异有统计学意义(P<0.01);6~24 h较甲钴胺小剂量组差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。假手术组Caspase-3 mRNA少量表达,与假手术组比较,模型对照组6~24 h Caspase-3 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,尼莫地平组、甲钴胺大、小剂量组6~24 h Caspase-3 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与尼莫地平组比较,甲钴胺大、小剂量组各时间点Caspase-3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05),与甲钴胺小剂量组比较,甲钴胺大剂量组于24 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲钴胺对脑缺血-再灌注损伤保护机制与抑制Caspase-3 mRNA表达有关,且以大剂量效果较好。

关键词：甲钴胺脑缺血-再灌注细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸酶3

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血必净对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2015年第5期41卷 951-955,I0003页

作者：苏建华陈玉芳丁新生唐金荣肖杭林伟江苏大学附属金坛医院神经内科江苏金坛213200 江苏省常州市第四人民医院病理科江苏常州213000 南京医科大学第一附属医院神经内科江苏南京210029 南京医科大学应用神经毒理研究所江苏南京210029

目的：研究血必净对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和细胞色素C（Cyt C）蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法：将108只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和血必净组,每组27只。采用线栓法栓塞大脑中动脉3h制作... 详细信息

目的：研究血必净对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和细胞色素C（Cyt C）蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法：将108只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和血必净组,每组27只。采用线栓法栓塞大脑中动脉3h制作大鼠脑缺血再灌注模型;分别于6、12和24h采用TUNEL法检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡数;Western blotting法检测大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平。结果：TUNEL法检测,与模型组比较,尼莫地平组和血必净组各时间点大鼠神经细胞凋亡数明显减少（P〈0.01）;与尼莫地平组比较,24h时血必净组大鼠神经细胞凋亡数减少（P〈0.05）。Western blotting法检测,6-24h模型组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较假手术组升高（P〈0.05或P〈0.01）;6-24h尼莫地平组和血必净组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较模型组明显降低（P〈0.01）;24h时血必净组大鼠大脑皮层中Cyt C蛋白相对表达水平较尼莫地平组降低（P〈0.01）。结论：血必净对脑缺血再灌注损伤神经细胞有抗凋亡作用,其抗凋亡效应与抑制Cyt C蛋白表达有关联。

关键词：血必净脑缺血再灌注细胞凋亡细胞色素C 大鼠,Wistar

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甲钴胺对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡及细胞色素C表达的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2015年第11期17卷 1193-1196页

作者：苏建华陈玉芳丁新生唐金荣肖杭林伟江苏大学附属金坛医院神经内科 213200 常州市第四人民医院病理科南京医科大学第一附属医院神经内科南京医科大学应用神经毒理研究所

目的探讨甲钴胺对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞色素C表达的影响。方法选择Wistar大鼠132只,随机分为假手术组(24只)、模型组(27只)、尼莫地平组(27只)、甲钴胺低剂量组(27只)、甲钴胺高剂量组(27只)。采用改良线栓法栓塞大脑中动脉3h制... 详细信息

目的探讨甲钴胺对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞色素C表达的影响。方法选择Wistar大鼠132只,随机分为假手术组(24只)、模型组(27只)、尼莫地平组(27只)、甲钴胺低剂量组(27只)、甲钴胺高剂量组(27只)。采用改良线栓法栓塞大脑中动脉3h制作大鼠脑缺血再灌注模型;分别于6、12、24h用TUNEL法检测大脑皮质细胞凋亡、Western blot检测大脑皮质细胞色素C蛋白的表达。结果尼莫地平组、甲钴胺低、高剂量组6、12、24h阳性细胞数较模型组明显降低(P<0.01);模型组6、12、24h细胞色素C表达较假手术组明显升高(P<0.05,P<0.01);尼莫地平组、甲钴胺低、高剂量组6、12、24h细胞色素C表达较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01);甲钴胺高剂量组6、12h细胞色素C表达较甲钴胺低剂量组明显降低(0.466±0.046 vs 0.617±0.033,P<0.01;0.163±0.081 vs 0.552±0.132,P<0.05)。结论甲钴胺对脑缺血再灌注损伤保护机制可能与抑制细胞色素C蛋白表达有关,以高剂量效果较好。

关键词：细胞色素C类细胞凋亡尼莫地平脑缺血再灌注损伤甲钴胺

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DNA修复蛋白JWA对DEN致肝损伤的作用和机制研究

DNA修复蛋白JWA对DEN致肝损伤的作用和机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：黄瑜琳熊建平王章定周建伟南京医科大学公共卫生学院职业与环境卫生学系江苏省应用毒理学重点实验室现代毒理学教育部重点实验室

【目的】环境中常见能引起肝脏损伤的毒物有黄曲霉毒素,藻毒素,亚硝胺类等,其中二乙基亚硝胺（DEN）作为化学诱导剂,可引起肝脏损伤并能诱导肝癌发生。JWA作为环境应答基因,广泛参与细胞对多种环境理化因素的应答反应,是典型的DNA修复... 详细信息

【目的】环境中常见能引起肝脏损伤的毒物有黄曲霉毒素,藻毒素,亚硝胺类等,其中二乙基亚硝胺（DEN）作为化学诱导剂,可引起肝脏损伤并能诱导肝癌发生。JWA作为环境应答基因,广泛参与细胞对多种环境理化因素的应答反应,是典型的DNA修复蛋白并作为BER复合物中新的分子参与DNA的单链损伤修复过程。本研究旨在初步阐明JWA调控的DNA修复信号网络对DEN致肝损伤的保护作用及其分子机制。【材料和方法】细胞实验:人正常肝细胞L02经不同浓度及时间的DEN处理后,检测JWA表达水平变化并观察细胞损伤及凋亡情况,确定IC50值。同时应用JWA的siRNA及高表达质粒处理L02细胞,选取适当剂量DEN处理,蛋白免疫印迹（WB）和免疫荧光（IF）检测改变JWA表达水平后DEN致DNA损伤及相应修复分子表达,同时应用TUNEL实验和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。动物实验:建立JWA和JWA小鼠JWADEN体内亚急性染毒模型,每组5只,DEN处理剂量为100 mg/kg体重,以生理盐水为对照,观察肝脏损伤,检测体内氧化水平;首次腹腔注射48小时后后剖杀小鼠,收集肝脏及血清进行相关指标测定。【结果】DEN能明显诱导L02细胞DNA损伤及细胞凋亡并伴随JWA表达升高,均呈时间-和剂量-效应关系;高表达JWA的L02细胞对于DEN诱导的DNA损伤敏感性明显降低,细胞成活率明显高于对照组;而JWA表达缺陷的L02细胞对DEN更敏感,DNA损伤加重,凋亡增多。高表达丁WA后,DNA损伤减轻,凋亡减少;IF检测γH2AX和8-OHdg结果显示高表达JWA相较于对照组能减轻DEN诱导的DNA单链损伤及DNA双链损伤,JWA缺陷的L02细胞相较于对照组DEN诱导的DNA损伤明显加重;JWA是通过碱基切除修复通路中的XRCC1及Polyβ两个关键分子参与DEN诱导L02细胞DNA损伤修复过程;DEN体内亚急性染毒结果显示对比JWA小鼠,JWA小鼠体重丢失增加,肝组织损伤更重,γH2AX表达增加,肝组织病理切片HE染色JWA小鼠肝损伤明显重于JWA小鼠。【结论】DEN处理引起明显的人正常肝L02细胞DNA损伤及细胞凋亡,以及诱导小鼠发生肝损伤;DNA修复蛋白JWA可通过碱基切除修复通路减轻DEN诱导的肝损伤。

关键词：二乙基亚硝胺(DEN) JWA 肝损伤碱基切除修复通路

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DNA损伤修复通路紊乱影响胃癌细胞顺铂耐药的新机制

DNA损伤修复通路紊乱影响胃癌细胞顺铂耐药的新机制

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：王强许文侠陈敏娟陈琦王章定王守宇李爱萍周建伟南京医科大学公共卫生学院职业与环境卫生学系江苏省应用毒理学重点实验室现代毒理学教育部重点实验室

【目的】化疗药物顺铂(Cisplatin,DDP)可通过诱导DNA双链断裂而杀伤肿瘤细胞。然而肿瘤细胞可通过增强DNA修复能力对顺铂产生耐药性,其机制尚未完全阐明。本研究选用对顺铂敏感性差异的胃癌细胞株探讨DNA损伤修复通路调节顺铂耐药的分... 详细信息

【目的】化疗药物顺铂(Cisplatin,DDP)可通过诱导DNA双链断裂而杀伤肿瘤细胞。然而肿瘤细胞可通过增强DNA修复能力对顺铂产生耐药性,其机制尚未完全阐明。本研究选用对顺铂敏感性差异的胃癌细胞株探讨DNA损伤修复通路调节顺铂耐药的分子机制。【材料和方法】选用4株人胃癌细胞株(BGC823,SGC7901,HGC-27,NCI-N87),CCK8法检测四株细胞在顺铂处理48h后的IC50值;Western Blot技术检测各细胞株中DNA损伤修复通路(BER,MMR,HDR,NHEJ,NER)的关键分子蛋白表达水平。同时,选用BER通路抑制剂MX,HDR/NHEJ通路抑制剂姜黄素以及PARP1特异性抑制剂BYK204165和AG14361联合顺铂处理上述细胞,CCK8,Tunel等方法观察细胞存活和凋亡变化;免疫荧光,Western blot等方法检测DNA双链损伤变化。【结果】1.四株细胞BGC823,SGC7901,HGC-27,NCI-N87在顺铂处理48h后的IC50值分别为0.811,0.408,5.163,10.809μg/ml。HGC-27,NCI-N87相对于BGC823,SGC7901细胞,其BER/MMR通路(BER位于MMR上游)核心分子(JWA、MSH2)表达下降;NHEJ/HDR通路核心分子(DNA-PK、BRCA1)表达升高;在BER/NHEJ/HDR通路均参与DNA修复的PARP1分子表达下降;NER通路核心分子(ERCC1)无明显变化。***或者PARP1抑制剂联合顺铂处理BGC823细胞相对于顺铂处理组DNA双链损伤减轻,细胞存活增高,凋亡减少;姜黄素或者PARP1抑制剂联合顺铂处理HGC-27细胞相对于单独顺铂处理组DNA双链损伤加重,细胞存活减少,凋亡增加。***1抑制剂单独或联合顺铂处理BGC823细胞,BER/MMR通路核心分子表达下降,NHEJ/HDR通路核心分子表达升高;同时PARP1抑制剂单独或联合顺铂处理HGC-27细胞,BER/MMR通路核心分子表达无明显变化,NHEJ/HDR通路核心分子表达下降。【结论】不同胃癌细胞对顺铂敏感性的差异与DNA修复能力有关;不同类型及同一类型的DNA修复分子抑制剂联合顺铂处理顺铂敏感或耐受的胃癌细胞可起到协同或者拮抗作用,提示在临床应用中需根据胃癌细胞是否对顺铂敏感选择合适的抑制剂联合顺铂从而发挥协同杀伤肿瘤细胞的作用,提高疗效。

关键词：胃癌顺铂耐药 DNA损伤修复通路抑制剂

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孕前炔雌醇暴露引起子代糖代谢受损并改变下丘脑ARC区瘦素/NPY通路蛋白表达

孕前炔雌醇暴露引起子代糖代谢受损并改变下丘脑ARC区瘦素/NPY通...

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：徐凯旋王心如夏彦恺吴笛南京医科大学公共卫生学院毒理系生殖医学国家重点实验室现代毒理学教育部重点实验室江苏省应用毒理学重点实验室

【目的】炔雌醇被很多育龄妇女用于调节生理周期,但孕前炔雌醇暴露对子代的影响仍需进一步探索。本研究以SD大鼠为模型,观察孕前炔雌醇暴露后引起的子代糖代谢变化及大脑代谢中心ARC区瘦素/NPY(neuropeptide,神经肽)通路关键蛋白表达的... 详细信息

【目的】炔雌醇被很多育龄妇女用于调节生理周期,但孕前炔雌醇暴露对子代的影响仍需进一步探索。本研究以SD大鼠为模型,观察孕前炔雌醇暴露后引起的子代糖代谢变化及大脑代谢中心ARC区瘦素/NPY(neuropeptide,神经肽)通路关键蛋白表达的改变,为炔雌醇孕前暴露提供基线资料。【方法】SD雌性大鼠52只,随机分为4组【对照组(芝麻油)、EE 50组(EE 50 ug/kg)、EE 200组(EE 200 ug/kg)和EE 800组(EE 800ug/kg)】,连续15天灌胃暴露后受孕。在子鼠PND 21进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),在PND25时对子代进食量进行观察并检测下丘脑ARC区中LEP、LEPR、NPY、NPYR、POMC mRNA相对表达水平。【结果】与对照组比,EE 200和EE 800组子代雌鼠PND 21空腹血糖和OGTT中90min、120min时的血糖水平均显著下降(p<0.05),EE 50和EE 200组子代雄鼠PND21空腹血糖和OGTT中60min、120min时的血糖水平均显著下降(p<0.05);EE 50、EE 200和EE 800组子代PND 25进食量与对照相比均显著增高(p<0.05),且EE 800组进食量最高;子代PND 25下丘脑ARC区中,EE 200和EE 800组的NPY、LEPR mRNA表达显著高于对照(p<0.05),而LEP、NPYR、POMC mRNA表达显著低于对照(p<0.05)。【结论】综上所述,孕前炔雌醇暴露会导致子代空腹血糖变化和糖耐量受损、增大进食量。这很可能是由于孕前炔雌醇暴露会影响子代下丘脑的正常发育,引起下丘脑ARC区瘦素/NPY通路受损,进而导致糖代谢失衡及进食量的改变。

关键词：炔雌醇糖代谢失衡下丘脑瘦素/NPY

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DNA修复蛋白JW对DEN致肝损伤的作用和机制研究

DNA修复蛋白JW对DEN致肝损伤的作用和机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：黄瑜琳熊建平王章定周建伟南京医科大学公共卫生学院职业与环境卫生学系江苏省应用毒理学重点实验室现代毒理学教育部重点实验室

[目的]环境中常见能引起肝脏损伤的毒物有黄曲霉毒素,藻毒素,亚硝胺类等,其中二乙基亚硝胺(DEN)作为化学诱导剂,可引起肝脏损伤并能诱导肝癌发生.JWA作为环境应答基因,广泛参与细胞对多种环境理化因素的应答反应,是典型的DNA修复蛋白并... 详细信息

[目的]环境中常见能引起肝脏损伤的毒物有黄曲霉毒素,藻毒素,亚硝胺类等,其中二乙基亚硝胺(DEN)作为化学诱导剂,可引起肝脏损伤并能诱导肝癌发生.JWA作为环境应答基因,广泛参与细胞对多种环境理化因素的应答反应,是典型的DNA修复蛋白并作为BER复合物中新的分子参与DNA的单链损伤修复过程.本研究旨在初步阐明JWA调控的DNA修复信号网络对DEN致肝损伤的保护作用及其分子机制.[材料和方法]细胞实验：人正常肝细胞L02经不同浓度及时间的DEN处理后,检测JWA表达水平变化并观察细胞损伤及凋亡情况,确定IC50值.同时应用JWA的siRNA及高表达质粒处理L02细胞,选取适当剂量DEN处理,蛋白免疫印迹(WB)和免疫荧光(IF)检测改变JWA表达水平后DEN致DNA损伤及相应修复分子表达,同时应用TUNEL实验和流式细胞仪检测细胞凋亡水平.动物实验：建立JWA+/+和JWA△2/△2小鼠JWA DEN体内亚急性染毒模型,每组5只,DEN处理剂量为100 mg/kg体重,以生理盐水为对照,观察肝脏损伤,检测体内氧化水平;首次腹腔注射48小时后后剖杀小鼠,收集肝脏及血清进行相关指标测定.[结果]DEN能明显诱导L02细胞DNA损伤及细胞凋亡并伴随JWA表达升高,均呈时间-和剂量-效应关系;高表达JWA的L02细胞对于DEN诱导的DNA损伤敏感性明显降低,细胞成活率明显高于对照组;而JWA表达缺陷的L02细胞对DEN更敏感,DNA损伤加重,凋亡增多.高表达JWA后,DNA损伤减轻,凋亡减少;IF检测γH2AX和8-OHdg结果显示高表达JWA相较于对照组能减轻DEN诱导的DNA单链损伤及DNA双链损伤,JWA缺陷的L02细胞相较于对照组DEN诱导的DNA损伤明显加重;JWA是通过碱基切除修复通路中的XRCC1及Polyβ两个关键分子参与DEN诱导L02细胞DNA损伤修复过程;DEN体内亚急性染毒结果显示对比JWA+/+小鼠,JWA△2/△2小鼠体重丢失增加,肝组织损伤更重,γH2AX表达增加,肝组织病理切片HE染色JWA△2/△2小鼠肝损伤明显重于JWA+/+小鼠.[结论]DEN处理引起明显的人正常肝L02细胞DNA损伤及细胞凋亡,以及诱导小鼠发生肝损伤;DNA修复蛋白JWA可通过碱基切除修复通路减轻DEN诱导的肝损伤.

关键词：二乙基亚硝胺(DEN) JWA 肝损伤碱基切除修复通路

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JWA对百草枯所致神经元损伤的保护作用及机制

JWA对百草枯所致神经元损伤的保护作用及机制

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：赵雪王日华王守宇李爱萍周建伟南京医科大学公共卫生学院职业与环境卫生学系江苏省应用毒理学重点实验室现代毒理学教育部重点实验室

【目的】农药百草枯一直被视为有效的杀虫剂和除草剂而广泛应用于农业,但其对中枢神经系统尤其是神经元的毒性作用日渐被人们关注,本文研究了环境毒物百草枯致神经元损伤过程中JWA基因的调节作用及其分子机制,旨在为科学制定环境毒物百... 详细信息

【目的】农药百草枯一直被视为有效的杀虫剂和除草剂而广泛应用于农业,但其对中枢神经系统尤其是神经元的毒性作用日渐被人们关注,本文研究了环境毒物百草枯致神经元损伤过程中JWA基因的调节作用及其分子机制,旨在为科学制定环境毒物百草枯引起神经毒性的预防与治疗提供新策略。【材料和方法】以小鼠海马神经元HT-22细胞为研究对象,用不同浓度的百草枯(0、50、100、200、500、1000、2000、5000μM)处理24h后,CCK8法检测HT-22细胞存活率,Western blot法检测JWA蛋白的变化趋势;对HT-22细胞进行瞬时转染,高低表达JWA后给以百草枯的刺激,分别用C-DCFH-DA法检测JWA的表达改变对百草枯所产生的ROS,RNS水平的变化,碱性彗星实验检测JWA对DNA单链损伤程度的影响,Westernblot法检测DNA损伤修复相关蛋白PARP1、LigⅢa、XRCC1等的表达变化,免疫荧光法检测细胞内poly(ADP-ribosyl)ation的水平并用DAPI/TUNEL法检测凋亡相关指标的变化情况。【结果】1.230μM百草枯刺激24h后,HT-22细胞存活率下降约50%,镜下观察细胞皱缩成团,形态改变明显。2.随着百草枯刺激时间的增加,活性氧族ROS显著增加,DNA单链损伤明显,Western blot法观察到JWA表达发生先升高后降低的变化趋势,而PARP1、Caspase-3的剪切体表达水平随毒物刺激时间延长而上升。3.瞬时转染刑A基因使其在HT-22细胞中高表达,可以明显抑制活性氧族ROS的产生,相反低表达JWA可以促进百草枯所致的ROS产生。【结论】JWA基因可以通过调节DNA损伤修复机制抵抗环境毒物百草枯致神经元细胞的死亡,揭示出JWA基因的应答性表达增加具有保护神经元抵抗环境毒物的能力。

关键词：百草枯神经元细胞 JWA基因 DNA损伤修复

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